本文關鍵詞：新疆石榴皮抗腫瘤多酚主要成分的體內外代謝及藥代動力學研究

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【摘要】：目的:本課題對石榴皮抗腫瘤多酚的主要成分安石榴苷和鞣花酸在大鼠體內外代謝和藥代動力學進行了研究,為體內抗腫瘤活性成分確定提供藥動學依據(jù)。方法:1、建立大鼠腸道菌群體外代謝模型,采用HPLC-ESI-TQ-MS檢測技術,對安石榴苷在大鼠腸道菌群中的代謝產(chǎn)物進行鑒定與分析。2、建立肝微粒體及肝S9片段體外代謝模型,采用UPLC-ESI-QTRAP-MS檢測技術,對大鼠和豚鼠肝微粒體、大鼠肝S9片段中酯酶活性進行表征及比較,并采用UPLC-ESI-QTOF-MS檢測技術,對安石榴苷和鞣花酸在大鼠肝微粒體Ⅰ相CYP450酶、酯酶和Ⅱ相UGT酶中的代謝產(chǎn)物進行鑒定與分析,分析代謝途徑。3、大鼠灌服給藥后,采集血漿、尿液、糞便及膽汁樣品,采用UPLC-ESI-QTOF-MS檢測技術鑒定、分析各生物樣品中的代謝產(chǎn)物。4、安石榴苷采用大鼠口服給藥途徑,鞣花酸采用大鼠口服和靜脈注射給藥途徑,于不同時間點眼內眥采血,二者分別應用HPLC檢測技術、UPLC-ESI-QTRAP-MS檢測技術分析血漿樣品,藥動學統(tǒng)計軟件PK solution 2.0TM提取藥動學參數(shù)。結果:1、建立了HPLC和LC-MS/MS檢測方法,經(jīng)HPLC方法檢測,安石榴苷與大鼠腸道菌群共同孵育后幾乎被完全代謝,且生成M1、M2及M3 3個代謝物,根據(jù)出峰時間初步推測及驗證M3為鞣花酸;經(jīng)LC-MS/MS進一步確認M3是鞣花酸,推測M2可能是Gallagic acid。2、建立了肝微粒體及肝S9片段體外代謝模型,采用UPLC-ESI-QTRAP-MS方法對大鼠和豚鼠肝微粒體、大鼠肝S9片段中酯酶催化產(chǎn)生的探針代謝產(chǎn)物進行測定與分析,結果表明,三者均具有酯酶活性,且豚鼠肝微粒體中酯酶活性與大鼠肝微粒體、大鼠肝S9片段中酯酶活性有顯著性差異,但大鼠肝微粒體中酯酶活性與大鼠肝S9片段中酯酶活性無顯著性差異;采用UPLC/ESI-QTOF-MS檢測技術,對安石榴苷和鞣花酸在大鼠肝微粒體中的Ⅰ相、Ⅱ相代謝產(chǎn)物進行鑒定與分析,結果顯示,安石榴苷共檢測到M1-M6 6個代謝產(chǎn)物,初步推測產(chǎn)物M6可能是鞣花酸化合物,Ⅱ相和Ⅰ相代謝產(chǎn)物相同;鞣花酸共檢測到1個代謝產(chǎn)物,且該代謝物可能為葡萄糖醛酸化代謝物。3、經(jīng)UPLC-ESI-QTOF-MS檢測技術分析,安石榴苷除了在血漿樣品檢測到2個代謝產(chǎn)物,初步推測可能是安石榴林和鞣花酸化合物,在尿液、糞便及膽汁樣品中并未檢測到相關代謝產(chǎn)物。鞣花酸在大鼠血漿、尿液、糞便及膽汁中均未檢測到相關代謝產(chǎn)物。4、建立了HPLC和UPLC-ESI-QTRAP-MS定量檢測方法。大鼠口服給予安石榴苷(給藥劑量300mg/kg)后,血漿樣品經(jīng)HPLC定量方法檢測,繪制了大鼠血漿中安石榴苷的血藥濃度-時間曲線,主要藥代動力學參數(shù)為:AUC(0-t)(243.40±111.62)ng·h·mL-1、T1/2a(42.03±0.8)h、T1/2d(2.68±1.76)h、T1/2e(18.87±17.92)h、Tmax(1.67±0.52)h、Cmax(26.33±5.65)ng·m L-1、Ka(0.42±0.25)h-1;口服(90.0mg/kg)和靜脈注射(1.0mg/kg)給予鞣花酸后,血漿樣品經(jīng)UPLC-ESI-QTRAP-MS定量方法檢測,分別繪制了口服和靜脈注射給藥大鼠血漿中鞣花酸的血藥濃度-時間曲線,口服給藥主要藥代動力學參數(shù)為:AUC(0-t)(71.89±32.02)ng·h·m L-1、T1/2a(2.52±2.96)h、T1/2d(1.89±1.14)h、T1/2e(17.99±11.20)h、Tmax(1.11±1.30)h、Cmax(8.86±4.65)ng·m L-1、Ka(0.57±0.45)h-1,靜脈注射給藥主要藥代動力學為:AUC(0-t)6(362.15±126.8)ng·h·m L-1、T1/2a(0.09±0.01)h、T1/2d(0.65±0.21)h、T1/2e(7.24±5.96)h、Tmax(0.03±0.00)h、Cmax(2512.29±640.13)ng·m L-1、Ka(7.64±0.83)h-1,此外,計算得到鞣花酸的絕對生物利用度為24.49%。結論:通過數(shù)據(jù)整合,安石榴苷在大鼠體內外共生成9個代謝產(chǎn)物,鞣花酸在大鼠體內外共生成1個代謝產(chǎn)物;通過對安石榴苷口服血藥濃度的分析,其代謝過程為開放的二室模型,具有明顯的吸收相、分布相和消除相;鞣花酸口服給藥也符合二室模型;鞣花酸靜脈注射給藥后的血藥濃度-時間曲線在消除相呈現(xiàn)急劇下降趨勢,其可被迅速代謝;鞣花酸的絕對生物利用度較低,可能與其較強的親脂性及肝首過效應有關。
【學位授予單位】：新疆醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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本文編號：1287569