本文關(guān)鍵詞：結(jié)直腸癌中miR-9-1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化檢測(cè)研究

  更多相關(guān)文章： miR-9 結(jié)直腸癌 轉(zhuǎn)移 甲基化

【摘要】：背景:多項(xiàng)研究提示,結(jié)直腸癌中miR-9表達(dá)水平較正常組織明顯下降,miR-9水平升高在體外有抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用,其異常表達(dá)可引起腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移�；蚣谆莔iR-9表達(dá)水平的一種調(diào)控方式,已有文獻(xiàn)報(bào)道甲基化特異PCR(MSP)技術(shù)檢測(cè)到結(jié)直腸癌miR-9-1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化。對(duì)基因甲基化的檢測(cè),焦磷酸測(cè)序是金標(biāo)準(zhǔn),但綜合操作和費(fèi)用等方面,不適于臨床應(yīng)用,MSP是目前廣泛認(rèn)可的甲基化檢測(cè)方法,但隨著高分辨溶解曲線(HRM)、熒光探針甲基化特異PCR(Methylight)等方法的出現(xiàn),MSP是否還是最適的檢測(cè)方法還沒(méi)有相關(guān)研究。研究目的:1.分析甲基化特異PCR(MSP)、高分辨溶解曲線(HRM)、熒光探針甲基化特異PCR(Methylight)三種結(jié)直腸癌miR-9-1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化檢測(cè)方法的優(yōu)劣,選擇出最適方法,為miR-9臨床檢測(cè)的應(yīng)用提供參考。2.進(jìn)一步研究miR-9-1甲基化調(diào)控在結(jié)直腸癌不同分期中的變化,進(jìn)一步分析miR-9-1甲基化是否與腫瘤預(yù)后相關(guān)。研究方法:1.以焦磷酸測(cè)序?yàn)榻饦?biāo)準(zhǔn),對(duì)比MSP、HRM、Methylight三種結(jié)直腸癌miR-9-1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化檢測(cè)方法,選出最適方法及最適條件。2.采用最適方法檢測(cè)79例結(jié)直腸癌標(biāo)本中miR-9-1啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀況,根據(jù)標(biāo)本對(duì)應(yīng)患者分期,分析甲基化狀況與結(jié)直腸癌分期關(guān)系。研究結(jié)果:1.MSP法相對(duì)于焦磷酸測(cè)序法的總檢出率為70%,陽(yáng)性檢出率100%,陰性檢出率57.14%。HRM技術(shù)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)其重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果變化較大,考慮其不適合在復(fù)雜樣本中檢測(cè)基因甲基化。Methylight法相對(duì)焦磷酸法的總檢出率、陽(yáng)性檢出率及陰性檢出率均達(dá)100%。Methylight方法,即用HotStart Taq酶甲基化特異PCR擴(kuò)增結(jié)合熒光探針的方法可能是一種更為臨床適用的方法。2.在79例結(jié)直腸癌病例標(biāo)本中,隨病例分期升高,miR-9-1甲基化檢出率升高(P0.05),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義研究結(jié)論:1.甲基化特異性PCR結(jié)合熒光探針的Methylight方法為目前石蠟組織特定DNA甲基化檢測(cè)最適方法,為后續(xù)研究組織DNA甲基化提供便利2.miR-9-1基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化可能與晚期結(jié)腸癌存在聯(lián)系,為后續(xù)擴(kuò)大樣本研究miR-9-1基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化與結(jié)直腸癌腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移的關(guān)系,與腫瘤預(yù)后的影響提供參考。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R735.34

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