本文關(guān)鍵詞：基于腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)失衡特征建立新型抑郁癥大鼠模型的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的:抑郁癥是一種以持續(xù)情緒低落為主要癥狀的精神情志障礙性疾病,因其患病率高、復(fù)發(fā)率高、致殘率高和致死率高等特點(diǎn),受到國際社會和世界各國的廣泛重視。但至今抑郁癥的發(fā)病機(jī)制仍未完全明確,針對抑郁癥可用的藥物及治療方法相對匱乏,其機(jī)制研究和抗抑郁新藥開發(fā)都離不開有效的抑郁癥動物模型,準(zhǔn)確可靠的動物模型對抑郁癥的研究具有重要意義。本團(tuán)隊(duì)前期臨床研究初步證實(shí)抑郁癥患者大腦表現(xiàn)為多種神經(jīng)遞質(zhì)失常,三對神經(jīng)遞質(zhì)拮抗對5-羥色胺(5-HT)與多巴胺(DA),乙酰膽堿(Ach)與去甲腎上腺素(NE),抑制性神經(jīng)遞質(zhì)(INH)與興奮性神經(jīng)遞質(zhì)(EXC)間表現(xiàn)出較強(qiáng)的拮抗關(guān)系,抑郁癥患者全腦區(qū)神經(jīng)遞質(zhì)主要態(tài)勢表現(xiàn)為:5-TH ↑ DA↓NE↑Ach↓EXC↓INH ↑或5-TH ↑DA ↓ NE ↑ Ach↓ EXC ↑ INH↓。本研究根據(jù)臨床抑郁癥神經(jīng)遞質(zhì)間失衡態(tài)勢及拮抗關(guān)系復(fù)制抑郁癥大鼠模型,通過海馬微量注射多巴胺D1受體拮抗劑SCH23390擬降低腦內(nèi)DA含量進(jìn)而影響腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)間的平衡,以期建立一種新型有效、穩(wěn)定持久、操作簡便且可量化的抑郁癥動物模型,從而促進(jìn)抑郁癥的相關(guān)研究。本實(shí)驗(yàn)分為兩部分進(jìn)行研究:第一部分制作抑郁癥大鼠模型,摸索較合適的成模藥物劑量及觀察抑郁癥狀的持續(xù)狀況。第二部分評價(jià)抑郁癥大鼠模型的預(yù)測效度。方法:1.抑郁癥大鼠模型制作方法的實(shí)驗(yàn)研究根據(jù)糖水消耗量將SD大鼠隨機(jī)分為五組:正常對照組、空白對照組、低劑量成模組、中劑量成模組和高劑量成模組。除正常對照組外,其他4組皆于左側(cè)海馬安裝套管,休整1周后,低、中、高劑量成模組分別于海馬微量注射不同劑量(1,2,4μg/μl)的多巴胺D1受體拮抗劑SCH23390進(jìn)行造模,空白對照組同部位給予等體積生理鹽水。通過糖水消耗實(shí)驗(yàn)、曠場實(shí)驗(yàn)以及新環(huán)境進(jìn)食抑制實(shí)驗(yàn)等檢測大鼠模前、模后1天、模后1周及模后2周的行為學(xué)變化,并同時(shí)監(jiān)測大鼠體重變化率;模后2周取材,采用ELISA法測定腦脊液中IL-1β、TNF-α的含量,并用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)技術(shù)定量檢測大腦皮層和海馬組織中5-HT、DA、NE、Ach、Glu和GABA等神經(jīng)遞質(zhì)的含量。通過體重變化率和行為學(xué)檢測指標(biāo)評價(jià)大鼠的抑郁樣行為并篩選出較合適成模藥物劑量。2.新型抑郁癥大鼠模型的預(yù)測效度評價(jià)根據(jù)糖水消耗量將SD大鼠隨機(jī)分為空白對照組、模型組、文拉法辛組和逍遙丸組四組,安裝套管休整1周后,模型組、文拉法辛組和逍遙丸組微量給予上述實(shí)驗(yàn)篩選出的最佳成模藥物劑量進(jìn)行造模,空白對照組微量注射等體積生理鹽水。造模完成后,文拉法辛組和逍遙丸組大鼠分別采用鹽酸文拉法辛(12.5mg/kg/d)、逍遙丸(1.5g/kg/d)連續(xù)灌胃2周進(jìn)行治療干預(yù),空白對照組和模型組給予等量的蒸餾水灌胃。分別于造模前、造模結(jié)束后(即模后1天)及模后2周進(jìn)行糖水消耗實(shí)驗(yàn)、曠場實(shí)驗(yàn)、新環(huán)境進(jìn)食抑制實(shí)驗(yàn)及跳臺實(shí)驗(yàn)等行為學(xué)檢測,模后2周采用HPLC-MS/MS技術(shù)定量檢測腦組織中神經(jīng)遞質(zhì)的含量。結(jié)果:1.抑郁癥大鼠模型制作方法的實(shí)驗(yàn)研究造模前,各組大鼠體重及行為學(xué)檢測指標(biāo)與正常對照組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。①大鼠體重變化率,模后1天、模后1周,與空白對照組相比,中、高劑量成模組大鼠體重增長率均極顯著降低(P0.01);模后2周,與空白對照組相比,低、中、高劑量成模組大鼠體重增長率顯著降低(P0.05,P0.01,P0.01);②糖水消耗實(shí)驗(yàn),模后1天、模后1周,與空白對照組相比,低、中、高劑量成模組大鼠糖水偏愛率均顯著降低(P0.05);模后2周,與空白對照組相比,低、中劑量成模組大鼠糖水偏愛率均明顯降低*P0.05);③曠場實(shí)驗(yàn),模后1天,與空白對照組相比,低、中、高劑量成模組大鼠水平運(yùn)動得分均顯著降低(P0.05);模后1周、模后2周,與空白對照組相比,低、中、高劑量成模組大鼠水平運(yùn)動得分均極顯著降低(P0.01),低、中、高劑量成模組大鼠垂直運(yùn)動得分均極顯著降低(P0.01);④新環(huán)境進(jìn)食抑制實(shí)驗(yàn),模后1天,與空白對照組相比,低、中、高劑量成模組大鼠新環(huán)境進(jìn)食抑制時(shí)間均顯著增長*P0.05);模后1周,與空白對照組相比,低、中、高劑量成模組大鼠新環(huán)境進(jìn)食抑制時(shí)間均顯著增長(P0.01,P0.01,P0.05);模后2周,低、中、高劑量成模組大鼠進(jìn)食抑制時(shí)間均長于空白對照組(P0.05)。各組大鼠腦脊液中IL-1β、TNF-a含量均無顯著性變化,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與空白對照組相比,中劑量成模組大鼠海馬5-HT、NE、Glu含量均顯著升高(P0.01),DA、Ach含量均呈降低趨勢(P0.05);大腦皮層Glu含量顯著升高(P0.05),5-HT、NE含量均呈升高趨勢(P0.05),DA、Ach含量均呈降低趨勢(P0.05)。2.新型抑郁癥大鼠模型的預(yù)測效度評價(jià)造模前,各組大鼠體重及行為學(xué)檢測指標(biāo)與正常對照組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。造模后,與空白對照組變比,模型組、文拉法辛組和逍遙丸組大鼠的體重增長率均極顯著降低(P0.01)、糖水偏愛率均顯著降低(P0.05)、水平運(yùn)動得分和垂直運(yùn)動得分均顯著降低(P0.05)、新環(huán)境進(jìn)食抑制時(shí)間均顯著增長(P0.05)。經(jīng)過2周的灌胃給藥干預(yù)后,與模型組比較,文拉法辛組和逍遙丸組大鼠的體重增長率均極顯著增加(P0.01);文拉法辛組大鼠糖水偏愛率顯著增加(P0.05);文拉法辛組和逍遙丸組大鼠的水平運(yùn)動得分均升高(P0.05),垂直運(yùn)動得分顯著升高(P0.01,P0.05);文拉法辛組大鼠新環(huán)境進(jìn)食抑制時(shí)間明顯減少(P0.05);文拉法辛組大鼠學(xué)習(xí)能力和記憶能力均極顯著提高(P0.01),逍遙丸組大鼠學(xué)習(xí)能力和記憶能力均顯著改善(P0.05,P0.01)。與空白對照組相比,模型組大鼠左側(cè)海馬5-HT、NE、Glu 含量顯著升高(P0.01,P0.05,P0.05),DA、Ach 含量呈降低趨勢(P0.05);右側(cè)海馬5-HT、NE、Glu含量均顯著升高(P0.05),DA、Ach含量均呈降低趨勢(P0.05);大腦皮層Glu含量顯著升高(P0.05),5-HT、NE含量呈升高趨勢(P0.05),DA、Ach含量均呈降低趨勢(P0.05)。灌胃治療干預(yù)2周后,與空白對照組相比,文拉法辛組、逍遙丸組大鼠海馬、皮層中的各神經(jīng)遞質(zhì)含量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);與模型組相比,文拉法辛組、逍遙丸組大鼠海馬中的5-HT、NE、Glu含量均有降低的趨勢(P0.05),DA、Ach含量均有升高的趨勢(P0.05),大腦皮層中的各神經(jīng)遞質(zhì)之間的比例亦得到了不同程度的調(diào)整。結(jié)論:1.本實(shí)驗(yàn)成功復(fù)制出抑郁癥大鼠模型,模型大鼠出現(xiàn)興趣減退、快感缺乏,自主活動減少,探索能力降低及食欲下降、體重增長緩慢等典型的抑郁樣行為,很好地模擬了臨床抑郁癥患者的抑郁癥狀;該模型具有良好的穩(wěn)定性,抑郁狀態(tài)至少可以持續(xù)2周以上,較合適成模藥物劑量為2 μg/μ4l。模型大鼠大腦皮層神經(jīng)遞質(zhì)含量變化趨勢與抑郁癥患者全腦區(qū)多神經(jīng)遞質(zhì)的主要態(tài)勢基本一致。2.文拉法辛和逍遙丸對抑郁癥大鼠模型腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的異常均具有調(diào)節(jié)作用,能夠逆轉(zhuǎn)模型導(dǎo)致的神經(jīng)遞質(zhì)水平的改變,均衡遞質(zhì)之間的比例,從而逆轉(zhuǎn)此模型所致抑郁樣行為,說明此模型具有較好的預(yù)測效度。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R749.4;R-332

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本文編號：1272945