本文關(guān)鍵詞：基于代謝組學(xué)的炙淫羊藿溫腎助陽炮制機理研究

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【摘要】：淫羊藿為我國傳統(tǒng)補益中藥,臨床研究發(fā)現(xiàn)淫羊藿生用與炙用功效迥異,生品祛風(fēng)濕、堅筋骨力勝,羊脂油炙后溫腎助陽作用增強。課題組前期針對淫羊藿的炮制機理已從化學(xué)成分以及吸收代謝變化規(guī)律的角度進(jìn)行了闡釋,但中藥作用于人體是一個復(fù)雜的系統(tǒng)生物學(xué)過程,僅從上述兩方面無法全面地闡明其炮制機理。為了從整體層面上評價淫羊藿對腎陽虛的干預(yù)作用,并闡釋淫羊藿炮制前后作用于腎陽虛機體的差異,本文擬利用代謝組學(xué)方法結(jié)合多元統(tǒng)計學(xué)手段,研究腎陽虛證大鼠服用淫羊藿及其不同炮制品后,尿液、血漿中內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的變化,并在此基礎(chǔ)上尋找、鑒定腎陽虛生物標(biāo)志物,從整體層面上評價其溫腎助陽作用,探討炙淫羊藿干預(yù)腎陽虛證的代謝通路,從一個全新的視角揭示炙淫羊藿溫腎助陽增效機制,闡明淫羊藿炮制機理。1、本文首先選取心葉淫羊藿作為研究對象,分別制備了淫羊藿生品、加熱品、羊脂油炙品提取液以及炮制輔料羊脂油的乳濁液。持續(xù)對正常大鼠腹腔注射氫化可的松10天,建立大鼠腎陽虛模型,分別在造模同時給大鼠灌胃羊脂油乳濁液、淫羊藿生品、淫羊藿加熱品、淫羊藿羊脂油炙品提取液,通過對比六組(空白組、模型組、羊脂油組、淫羊藿生品組、淫羊藿加熱品組、淫羊藿羊脂油炙品組)大鼠的體重、體溫、生存狀態(tài)、下丘腦-垂體-腎上腺(HPAT)軸相關(guān)指標(biāo)(血清皮質(zhì)酮、促腎上腺皮質(zhì)激素、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素、17-羥基類固醇、三氟甲狀腺原氨酸、甲狀腺素、血清促甲狀腺激素、血清睪酮、雙氫睪酮、血清雌二醇、環(huán)磷酸腺苷、環(huán)磷酸鳥苷及其比值)以及胸腺、腎上腺、下丘腦、垂體、睪丸的病理學(xué)切片發(fā)現(xiàn),腹腔注射氫化可的松后造模成功,灌胃淫羊藿及其不同炮制品提取液后,各組大鼠腎陽虛癥狀均有一定減輕,其中羊脂油炙品對腎陽虛證的治療作用最佳,加熱品次之,淫羊藿生品最次,羊脂油的干預(yù)效果不顯著,提示炙淫羊藿能夠通過更好地調(diào)節(jié)HPAT軸功能紊亂達(dá)到溫腎助陽增效作用。2、本文采用GC-MS和NMR兩種檢測手段分別對六組大鼠尿液、血漿中內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的種類、含量進(jìn)行了全面的檢測分析,并建立主成分分析(PCA)統(tǒng)計分析模型。PCA模型顯示:腹腔注射氫化可的松造模后,模型組與空白組樣本在PCA模型中分布分離明顯,顯示造模成功,分別給腎陽虛大鼠灌胃羊脂油乳濁液、淫羊藿生品提取液、淫羊藿加熱品提取液、淫羊藿羊脂油炙品提取液后,四個給藥組在PCA模型中的分布與模型組重疊面積比例逐漸降低,樣本分布逐漸偏向于空白組區(qū)域,且與空白組重疊面積比例逐漸升高,表明羊脂油乳濁液組、淫羊藿生品組、淫羊藿加熱品組、淫羊藿羊脂油炙品組大鼠尿液、血漿中內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的種類與含量較模型組總體差異逐漸增大,代謝譜軌跡向正常組趨近。提示對于腎陽虛證,羊脂油乳濁液、淫羊藿生品提取液、淫羊藿加熱品提取液、淫羊藿羊脂油炙品提取液對腎陽虛證的干預(yù)效果越來越強,從整體層面評價了淫羊藿及其不同炮制品的溫腎助陽作用。3、通過對空白組與模型組的內(nèi)源性代謝物進(jìn)行多元統(tǒng)計學(xué)分析,我們精確得到41個生物標(biāo)志物,分別為:核糖醇、酪胺、半乳糖醛酸、古洛糖酸、3-羥基脯氨酸、氧代脯氨酸、甘露糖、鳥氨酸、檸檬酸、色氨酸、蔗糖、2,4,6-三甲基吡啶、丙三醇、蘇糖酸、膽固醇、氨基乙醇、甲酸酯、磷酸甘油膽堿、吲哚-3-乳酸鹽、苯乙酸甘氨酸、m-羥基苯乙酸)、丙氨酸、枸櫞酸鹽、甘油醛、丙二酸酯、葫蘆巴堿、3-羥基蘋果酸、乙酰乙酸酯、肌酸、谷氨酸、谷氨酰胺、丙三醇、甘氨酸、組氨酸、乳酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、丙酮酸、低密度脂蛋白、β-葡萄糖。比較上述生物標(biāo)志物在六組中的含量發(fā)現(xiàn),腹腔注射氫化可的松造模后,各生物標(biāo)志物含量異常升高/降低,給予淫羊藿及其炮制品后各代謝物的含量均有一定回調(diào),且整體調(diào)控效果淫羊藿羊脂油炙品組淫羊藿加熱品組淫羊藿生品組羊脂油乳濁液組。提示羊脂油和淫羊藿共同作用能夠增強對腎陽虛的干預(yù)作用,故“羊脂油”和“加熱”這兩個關(guān)鍵因素是淫羊藿炮制過程中必不可少的部分。4、將上述41個生物標(biāo)志物導(dǎo)入KEGG、MetaboAnalyst 3.0數(shù)據(jù)庫進(jìn)行擬合,共得到35條可能與腎陽虛證相關(guān)的代謝通路。通過統(tǒng)計學(xué)分析,本文共篩選得到9條通路,分別為:D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代謝、生物氮代謝、氨基酰-tRNA生物合成、丙氨酸,天冬氨酸和谷氨酸代謝、甲烷代謝、甘氨酸,絲氨酸和蘇氨酸代謝、乙醛酸和二羧酸代謝、苯丙氨酸,酪氨酸和色氨酸生物合成、酮體的合成和降解,涉及聚糖的生物合成與代謝、脂質(zhì)代謝、萜類化合物和聚酮化合物的代謝、外來物質(zhì)的降解和代謝、碳水化合物代謝、氨基酸代謝、能量代謝、核苷酸代謝、輔酶因子和維生素的代謝、其他次級代謝物的生物合成、其他氨基酸代謝等多種代謝類型。綜上,本文通過藥效學(xué)、代謝組學(xué)研究了淫羊藿炮制中“加熱”和“羊脂油”兩個關(guān)鍵環(huán)節(jié)對淫羊藿溫腎助陽作用的影響,從宏觀動物系統(tǒng)藥效學(xué)評價到微觀內(nèi)源性生物標(biāo)志物變化兩個層次、多個角度研究了炙淫羊藿溫腎助陽炮制機理,豐富了淫羊藿炮制機理的研究,同時也為中藥炮制提供了新的思路與方法。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R283

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本文編號：1261457