本文關(guān)鍵詞：中藥雞骨草質(zhì)量控制及對斑馬魚肝損傷保護(hù)作用的初步研究

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【摘要】：目的:雞骨草為豆科植物廣州相思子Abruscantoniensis Hance的干燥全株,主要分布于中國的廣東、廣西等地,并為兩廣的道地藥材。雞骨草全草入藥具有利濕退黃,清熱解毒,疏肝止痛、活血化瘀等功效,現(xiàn)代藥理研究表明,雞骨草具有保肝護(hù)肝、抗氧化、抗炎癥反應(yīng)、抑菌、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、降脂等藥理作用,臨床上常用來治療肝病。查閱文獻(xiàn)可知,雞骨草中含有黃酮、三萜、生物堿、蒽醌、多糖、有機(jī)酸、揮發(fā)油等多種化學(xué)成分。其中生物堿、黃酮、三萜類是雞骨草的主要活性成分。但目前雞骨草質(zhì)量控制研究主要集中在生物堿的含量測定,黃酮類的研究比較少,三萜類的關(guān)注度更是不高�，F(xiàn)階段,指紋圖譜結(jié)合多成份含量測定是比較適合中藥的一種質(zhì)量控制模式,符合中藥模糊的特征,使中藥質(zhì)量控制更科學(xué)、全面。在2015年版中國藥典中,雞骨草只有定性鑒別沒有含量測定項,不利于雞骨草的質(zhì)量控制,因此建立一個全面、合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)十分必要,為雞骨草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善提供依據(jù)。方法:(1)采用UPLC法結(jié)合相似度評價、聚類分析、主成分分析,建立雞骨草UPLC指紋圖譜。(2)采用UPLC/Q-TOF-MSE技術(shù)結(jié)合UNIFI天然產(chǎn)物數(shù)據(jù)庫及雞骨草數(shù)據(jù)庫對雞骨草中的化學(xué)成分進(jìn)行快速分析鑒定。(3)采用UPLC法同時測定雞骨草中相思子堿、下箴刺桐堿、新西蘭牡荊苷2、夏佛塔苷的含量,為雞骨草藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)改進(jìn)提供方法。(4)采用HPLC-DAD-CAD法結(jié)合相似度評價,建立雞骨草HPLC-DAD-CAD指紋圖譜。(5)利用硫代乙酰胺誘導(dǎo)的斑馬魚肝損傷模型,對雞骨草肝損傷的保護(hù)作用進(jìn)行初步研究。結(jié)果:(1)建立了雞骨草藥材的UPLC指紋圖譜,確定了 52個共有峰,指認(rèn)出7個共有峰,運(yùn)用相似度評價、聚類分析、主成分分析對16批雞骨草藥材質(zhì)量評價,三種分析方法所得結(jié)果一致,三者相互驗證,增加結(jié)果的可信度。分析結(jié)果顯示,16個產(chǎn)地的雞骨草被分為4類,廣東肇慶的樣品為野生藥材單獨(dú)聚為一類,兩批廣東栽培藥材歸為一個類別,與廣西的樣品均不為一類,可見廣西和廣東藥材質(zhì)量還是有區(qū)別的;而其中一批廣西欽州藥材單獨(dú)聚為一類,可見即便是同一產(chǎn)地,也有個別批次藥材質(zhì)量有較大差異。(2)建立四種有效成分相思子堿、下箴刺桐堿、新西蘭牡荊苷2、夏佛塔苷的UPLC含量測定方法,測定了 16個不同產(chǎn)地的雞骨草藥材中4種成分的含量。方法學(xué)考察表明該方法重復(fù)性、穩(wěn)定性、精密性和加樣回收試驗均符合中國藥典相關(guān)標(biāo)準(zhǔn),可作為雞骨草中相思子堿、下箴刺桐堿、新西蘭牡荊苷2、夏佛塔苷的含量測定方法。(3)首次建立了雞骨草HPLC-DAD-CAD指紋圖譜,初步可指認(rèn)12個共有峰;實(shí)驗結(jié)果可知,相同條件下,紫外指紋圖譜與CAD指紋圖譜差異明顯,CAD圖譜所檢測到的峰更多、更全面,如三萜類,在紫外檢測器下的基本無響應(yīng),但在CAD檢測器下就有很好的響應(yīng),并在雞骨草中含量較高,是主要成分之一,可見本實(shí)驗引入電噴霧式檢測器的必要性和重要性,為雞骨草中的三萜類成分的進(jìn)一步研究提供了思路和方法。(4)建立了雞骨草化合物數(shù)據(jù)庫,運(yùn)用UNIFI對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析、自動匹配,再經(jīng)過人工核對校正,共鑒別出40個化合物,推測了雞骨草中的具有代表性黃酮碳苷及三萜皂苷可能的裂解規(guī)律。(5)驗證了硫代乙酰胺誘導(dǎo)的斑馬魚肝損傷模型,并運(yùn)用該模型對雞骨草肝損傷的保護(hù)作用進(jìn)行初步研究,結(jié)果表明,雞骨草對硫代乙酰胺誘導(dǎo)的肝損傷有一定的保護(hù)作用。結(jié)論:本實(shí)驗建立了雞骨草UPLC指紋圖譜、雞骨草HPLC-DAD-CAD指紋圖譜結(jié)合4種活性成分含量測定的方法,旨在為雞骨草質(zhì)量控制提供較為全面、有效的評價方法,為雞骨草的質(zhì)量控制及完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù);運(yùn)用UPLC/Q-TOF-MSE技術(shù)可以快速全面地對雞骨草化學(xué)成分進(jìn)行鑒別分析,為雞骨草的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供幫助,為雞骨草的質(zhì)量控制提供物質(zhì)基礎(chǔ)與數(shù)據(jù)支撐,有利于雞骨草進(jìn)一步的研究和開發(fā);實(shí)驗研究表明雞骨草對硫代乙酰胺誘導(dǎo)的肝損傷有一定的保護(hù)作用,與已有的研究成果相互驗證,為其他保肝中藥篩選及研究提供一個新思路。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R284.1;R285.5

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本文編號：1261359