本文關(guān)鍵詞：基于CHA技術(shù)用于單增李斯特菌的新型可視化檢測方法建立

  更多相關(guān)文章： 核酸探針 CHA 信號(hào)擴(kuò)增 試紙條 DNAzyme 可視化 單增李斯特菌

【摘要】：李斯特菌在我們的生活環(huán)境中無處不在,絕大多數(shù)食品中都能找到李斯特菌。肉、蛋蔬菜等常見食物都已表明是李斯特菌的感染源。李斯特菌可引起嚴(yán)重的疾病感染,許多國家已對食品中的李斯特菌采取相應(yīng)控制措施,因此其檢測方法也是各國關(guān)注的焦點(diǎn)之一。檢測方法從傳統(tǒng)常規(guī)的分離培養(yǎng)法到免疫學(xué)檢測方法,發(fā)展到如今的現(xiàn)代分子生物學(xué)檢測技術(shù)。傳統(tǒng)常規(guī)方法受到耗時(shí)長,所需儀器復(fù)雜,需要輔助酶等條件的限制。等溫?cái)U(kuò)增CHA(Catalyzed hairpin assembly)是近期發(fā)展的現(xiàn)代分子學(xué)中新型核酸探針信號(hào)放大技術(shù),常溫?zé)o酶條件下即可實(shí)現(xiàn)對核酸靶標(biāo)的便攜、靈敏的檢測。本研究利用CHA技術(shù)并結(jié)合不同的可視化信號(hào)輸出方式,對單增李斯特菌進(jìn)行特異檢測。本研究的主要內(nèi)容如下:(1)基于CHA和試紙條建立李斯特菌可視化檢測方法基于核酸CHA恒溫?cái)U(kuò)增和試紙條,建立李斯特菌可視化檢測的新方法。CHA的兩個(gè)發(fā)夾結(jié)構(gòu)探針H1和H2的5’(或3’)端分別標(biāo)記Fitc和Biotin,當(dāng)靶標(biāo)DNA存在時(shí),試紙條檢測線上留下紅線標(biāo)記,并且標(biāo)記的顏色強(qiáng)度與靶標(biāo)DNA的濃度在200p M-1n M濃度范圍內(nèi)成線性相關(guān)。該方法的檢測限可達(dá)到36.4 p M,該方法可在常溫?zé)o酶條件下進(jìn)行,靈敏好,特異性強(qiáng)。(2)基于CHA和DNAzyme技術(shù)對李斯特菌可視化檢測基于CHA及DNAzyme建立李斯特菌可視化檢測的新方法。CHA一條發(fā)夾結(jié)構(gòu)探針莖部包裹固定G-四鏈體發(fā)夾型序列。引發(fā)發(fā)夾結(jié)構(gòu)與靶標(biāo)DNA結(jié)合時(shí),釋放出的引發(fā)鏈啟動(dòng)CHA反應(yīng),并打開被包裹住的G-四鏈體結(jié)構(gòu),Hemin激活其活性,加入ABTS和H2O2后并發(fā)生顯色反應(yīng),從而實(shí)現(xiàn)對靶標(biāo)DNA的可視化檢測。其檢測限可以達(dá)到60.7 p M。該方法無需任何標(biāo)記,成本低廉,設(shè)計(jì)簡便,同時(shí)將靶標(biāo)核酸互補(bǔ)片段固定在抓取探針發(fā)夾環(huán)部分,有效的增加實(shí)用性和通用性。(3)基于CHA和DSN酶的雙重信號(hào)放大建立李斯特菌檢測方法基于CHA和DSN酶的雙重放大檢測方法,DNAzyme作為可視化信號(hào)輸出方式,檢測限達(dá)到了434 f M。本方法通過DSN酶輔助的信號(hào)擴(kuò)增結(jié)合CHA恒溫信號(hào)擴(kuò)增反應(yīng),在發(fā)夾型結(jié)構(gòu)探針中固定G-四鏈體結(jié)構(gòu),在靶標(biāo)底物存在的條件下,DSN酶可成功作用于DNA-RNA雙鏈,釋放CHA引發(fā)鏈,從而引發(fā)CHA反應(yīng),產(chǎn)生顯色變化。本檢測平臺(tái)具有雙重放大效果,靈敏度高,特異性強(qiáng)。綜上所述,本文成功建立了基于CHA技術(shù)用于單增李斯特菌核酸特異性檢測的放大平臺(tái),實(shí)現(xiàn)了特異檢測單增李斯特菌,操作簡便,成本低廉,抗干擾能力強(qiáng),檢測限可以達(dá)到f M,有利于建立低成本快速實(shí)樣篩選檢測,為今后新型檢測方法打下良好基礎(chǔ),在臨床診斷、食品衛(wèi)生檢驗(yàn)等領(lǐng)域具有廣闊的前景。
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R155.5

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 丁建英;韓劍眾;;食品中單增李斯特菌的存在現(xiàn)狀及檢測方法研究進(jìn)展[J];食品研究與開發(fā);2008年12期

2 熊國華;于莉;曹際娟;曹遠(yuǎn)銀;王靜;;單增李斯特菌免疫膠體金試紙條快速檢測[J];中國公共衛(wèi)生;2008年02期

3 侯敏;翟玨明;廖斌;文靜波;;從袋裝生鮮食品中檢出單增李斯特菌[J];中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2010年01期

4 薛超波;戴意飛;王萍亞;孫瑛;;舟山市6類食品中單增李斯特菌污染情況監(jiān)測[J];海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2010年03期

5 李秀娟;徐保紅;高偉利;李波;宋紅梅;張仁偉;;單增李斯特菌鑒定方法比較研究[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2011年01期

6 馮曉慧;王慶國;王仁歡;陳慶敏;蘇亞東;朱瑞良;朱立賢;羅欣;;牛肉中單增李斯特菌的熱失活模型[J];微生物學(xué)報(bào);2011年05期

7 ;4b型單增李斯特菌更易引發(fā)疾病[J];中國乳業(yè);2011年04期

8 張春琳;張家國;;單增李斯特菌增殖的影響因素研究[J];食品研究與開發(fā);2011年07期

9 張加林;楊林嫻;;單增李斯特菌的食源性污染狀況及檢測方法[J];醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐;2012年08期

10 付瑞燕;周陽;祝長青;;食品中單增李斯特菌檢測技術(shù)研究進(jìn)展[J];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2012年06期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 龍軼;周小明;邢達(dá);;基于磁珠分離和超分支滾環(huán)擴(kuò)增的單增李斯特菌電化學(xué)發(fā)光檢測[A];第七屆全國光生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2010年

2 丁建英;韓劍眾;;食品中單增李斯特菌的存在現(xiàn)狀及檢測方法研究進(jìn)展[A];中國食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會(huì)第五屆年會(huì)暨第四屆東西方食品業(yè)高層論壇論文摘要集[C];2007年

3 張耀祺;石磊;;分離自生肉的單增李斯特菌的血清型及脈沖場凝膠電泳分型研究[A];“亞運(yùn)食品安全與廣東食品產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新發(fā)展”學(xué)術(shù)研討會(huì)暨2009年廣東省食品學(xué)會(huì)年會(huì)論文集[C];2009年

4 陳慧燕;;單增李斯特菌室間比對活動(dòng)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果評(píng)價(jià)[A];2009年衛(wèi)生檢驗(yàn)新技術(shù)學(xué)術(shù)研討會(huì)會(huì)刊[C];2009年

5 陳健舜;方維煥;;食品中單增李斯特菌的分子流行病學(xué)特征與致病力研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2009學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊）[C];2009年

6 鄭華英;江元山;呂均;熊燕;龍一兵;曾瑩春;;單增李斯特菌食品分離株多重PCR鑒定分型[A];2008年中國微生物學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2008年

7 何冬梅;王洪敏;柯昌文;鄧小玲;楊杏芬;賴蔚傮;柯碧霞;李柏生;譚海玲;;單增李斯特菌檢測基因芯片的研制與評(píng)價(jià)[A];2011廣東省預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)資料匯編[C];2011年

8 斯國靜;俞驊;劉濤;胡俊;;單核細(xì)胞增生李斯特菌在市售食品中污染現(xiàn)狀分析[A];2011年浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)病毒學(xué)分會(huì)、醫(yī)學(xué)微生物與免疫學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2011年

9 郭明星;朱堂明;陳晨;趙暉;王振華;陳建軍;徐新生;;湖北省水產(chǎn)品中單增李斯特菌基因分型研究[A];第二屆全國人畜共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

10 程超男;張笑言;彭媛;白家磊;劉原媛;寧保安;高志賢;;基于3-巰基丙酸修飾金電極構(gòu)建電化學(xué)免疫傳感器檢測牛奶中的單增李斯特菌[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第三十三屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2013年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 ;重視單增李斯特菌風(fēng)險(xiǎn)防范[N];中國醫(yī)藥報(bào);2014年

2 張啟華邋姜文輝;煙臺(tái)首次從進(jìn)口水產(chǎn)品中檢出單增李斯特菌[N];中國國門時(shí)報(bào);2007年

3 記者　 胡其峰;進(jìn)口日本食品連續(xù)出現(xiàn)質(zhì)量問題[N];光明日報(bào);2006年

4 黃全權(quán);進(jìn)口日本食品連出問題,質(zhì)檢交涉[N];新華每日電訊;2006年

5 夏文俊;進(jìn)口日本食品連續(xù)出現(xiàn)質(zhì)量問題[N];中國質(zhì)量報(bào);2006年

6 呂壯;日本輸華食品頻現(xiàn)安全問題[N];中華工商時(shí)報(bào);2006年

7 高亞蘭;小心：進(jìn)口日本食品頻現(xiàn)質(zhì)量問題[N];國際商報(bào);2006年

8 記者　黃全權(quán);進(jìn)口日本食品連續(xù)出現(xiàn)問題[N];人民日報(bào);2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 方春;單核細(xì)胞增生李斯特菌譜系Ⅲ強(qiáng)毒株與弱毒菌株比較基因組及致病力差異機(jī)制[D];浙江大學(xué);2015年

2 亢春雨;食源性單核增生性李斯特氏菌的分布、遺傳多態(tài)性及其毒理機(jī)制研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 張一敏;三種有機(jī)酸對單增李斯特菌誘導(dǎo)性耐酸響應(yīng)研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 李長城;三文魚魚籽中單增李斯特菌預(yù)測模型建立及控制研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2015年

5 夏葉;單核細(xì)胞增生李斯特菌：應(yīng)激轉(zhuǎn)錄組學(xué)與RsbX對SigB表達(dá)和細(xì)菌存活的調(diào)控[D];浙江大學(xué);2015年

6 郗遠(yuǎn);植物提取物對單增李斯特菌的抑制作用及乳化香腸的品質(zhì)影響[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 王建鋒;抗單核細(xì)胞增多性李斯特菌溶血素化合物的發(fā)現(xiàn)及作用機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2015年

8 隋建新;單增李斯特菌雞卵黃抗體的抑菌性能及其機(jī)理研究[D];中國海洋大學(xué);2010年

9 田靜;熟肉制品中單增李斯特菌的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及風(fēng)險(xiǎn)管理措施的研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2010年

10 張輝;單增李斯特菌ActA的表達(dá)、免疫原性及膠體金試紙研制[D];吉林大學(xué);2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馮曉慧;單增李斯特菌在肉牛屠宰過程中的流行特點(diǎn)及其熱失活模型的建立[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

2 于旖斯;食品中單增李斯特菌的分離、鑒定及抑制研究[D];大連工業(yè)大學(xué);2010年

3 趙一鳴;三種分型技術(shù)對食源性單增李斯特菌分型研究[D];華南理工大學(xué);2015年

4 萬松華;食品中污染微生物通用型熒光PCR檢測方法研究[D];華南理工大學(xué);2015年

5 周陽;食品中單增李斯特菌快速檢測方法的建立與應(yīng)用[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

6 王昊宇;食品中單增李斯特菌的分離鑒定及PCR快速檢測方法的研究[D];大連工業(yè)大學(xué);2013年

7 周旋;姜黃素抑制單增李斯特菌溶血素活性的分子機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2016年

8 張星星;漆黃素對單增李斯特菌感染妊娠小鼠流產(chǎn)的保護(hù)作用[D];吉林大學(xué);2016年

9 解新方;單增李斯特菌表面增強(qiáng)拉曼光譜檢測技術(shù)研究[D];天津科技大學(xué);2015年

10 李云霞;納米磁珠對單增李斯特菌低場磁共振檢測的影響研究[D];上海師范大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：1260118