發(fā)布時(shí)間：2017-06-28 18:00

  本文關(guān)鍵詞：利用馬鈴薯內(nèi)生菌Bacillus megaterium PE1表達(dá)小鼠干擾素-γ和家蠶素Ⅱ的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：隨著生物科技的進(jìn)步,植物不僅可以為人類提供傳統(tǒng)的天然產(chǎn)品,而且已成為表達(dá)有醫(yī)藥價(jià)值或工業(yè)用途的外源蛋白的良好生物反應(yīng)器,利用植物生物反應(yīng)器表達(dá)外源蛋白,可將外源蛋白富集于種子、塊莖、塊根等組織器官中,有利于蛋白的分離純化。由于植物體表達(dá)外源蛋白易進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn),產(chǎn)品獲取及加工相對(duì)簡(jiǎn)單,生產(chǎn)成本較低,因此受到人們的廣泛重視。但目前將外源基因?qū)胫参锏母鞣N方法均有一定的局限性,如操作繁瑣費(fèi)時(shí)、外源基因丟失、基因沉默等。因此,開發(fā)快速、簡(jiǎn)便、低成本的外源基因轉(zhuǎn)化方法是研究的重要課題。植物內(nèi)生菌(endophyte)廣泛存在于各種植物組織內(nèi),與宿主植物長(zhǎng)期互惠共生,人類的植食性食物中均含有內(nèi)生菌,說明內(nèi)生菌對(duì)人體無(wú)害,符合食品安全要求,因此利用轉(zhuǎn)基因內(nèi)生菌在植物體內(nèi)表達(dá)外源基因可能是一條有效的途徑。前人利用工程內(nèi)生菌在宿主植物中表達(dá)的產(chǎn)物主要是抗蟲蛋白,而大腸桿菌、巨大芽孢桿菌等原核表達(dá)系統(tǒng)的開發(fā)則只限于體外培養(yǎng)和表達(dá)。為此,本研究從馬鈴薯(Solanum tuberosum)塊莖中分離到一株內(nèi)生細(xì)菌巨大芽孢桿菌Bacillus megaterium PE1,并以此菌株作為外源基因表達(dá)菌,將小鼠(Mus musculus)干擾素-γ(interferonγ,IFNγ)基因和家蠶(Bombyx mori)的家蠶素Ⅱ(bombyxinⅡ,BBXⅡ)基因?qū)隑acillus megaterium PE1中,進(jìn)而再回接至馬鈴薯中,測(cè)定了在體外培養(yǎng)及回接到馬鈴薯植株之后2種外源蛋白的表達(dá)情況及表達(dá)產(chǎn)物的生理活性。本研究的主要目的旨在探討使用相對(duì)簡(jiǎn)單的原核生物轉(zhuǎn)化手段,繞過植物轉(zhuǎn)化的過程,利用內(nèi)生菌實(shí)現(xiàn)外源基因在植物中的表達(dá),從而建立一種植物內(nèi)生菌-宿主植物新型表達(dá)系統(tǒng)。主要結(jié)果和結(jié)論如下:(1)對(duì)馬鈴薯塊莖中內(nèi)生菌進(jìn)行了分離、鑒定與優(yōu)勢(shì)菌篩選。首先比較了無(wú)菌水沖洗、75%乙醇、0.1%氯化汞以及次氯酸鈉幾種不同方法對(duì)馬鈴薯塊莖進(jìn)行表面滅菌的效果,確定用次氯酸鈉溶液效果最佳。對(duì)馬鈴薯塊莖中的內(nèi)生菌用LB培養(yǎng)基分離、培養(yǎng),共獲得27株內(nèi)生細(xì)菌(編號(hào)分別為PE1-PE27)。對(duì)各菌株進(jìn)行16S rDNA測(cè)序鑒定,將測(cè)序結(jié)果于GenBank進(jìn)行BLAST,利用GenBank上已登錄的序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。經(jīng)同源性檢測(cè),分離到的27個(gè)菌株分屬于4個(gè)屬的7個(gè)種,其中芽孢桿菌屬(Bacillus)共有17株,假單胞菌屬(Pseudomonas)有5株,葡萄球菌屬(Staphylococcus)有3株,短狀桿菌屬(Brachybacterium)有2株,芽孢桿菌屬的菌株數(shù)占總分離菌株數(shù)的63.0%,表現(xiàn)出明顯的種群優(yōu)勢(shì),而在芽孢桿菌屬的17個(gè)菌株中,有10株為巨大芽孢桿菌。而且巨大芽孢桿菌作為異源蛋白表達(dá)系統(tǒng)已經(jīng)有良好的研究基礎(chǔ)和諸多優(yōu)勢(shì)。因此本研究將巨大芽孢桿菌pe1菌株作為表達(dá)外源基因的載體菌,定名為“bacillusmegateriumpe1”。(2)研究了溶菌酶濃度、酶解溫度及酶解時(shí)間對(duì)bacillusmegateriumpe1原生質(zhì)體形成率及再生率的影響。三種影響因素的單因素試驗(yàn)結(jié)果表明,三個(gè)因素對(duì)pe1原生質(zhì)體形成率的影響與對(duì)再生率的影響呈相反趨勢(shì)。進(jìn)一步以原生質(zhì)體形成率與再生率的乘積作為考察指標(biāo),針對(duì)三個(gè)因素設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)以確定最佳的處理?xiàng)l件,結(jié)果顯示,三種主要因子的影響程度依次為:溫度時(shí)間酶量。通過正交試驗(yàn)確定的bacillusmegateriumpe1原生質(zhì)體最佳制備條件為:溶菌酶濃度4mg/ml,酶解溫度30℃,酶解時(shí)間90min。(3)研究了小鼠干擾素-γ基因(mifn-γ)導(dǎo)入bacillusmegateriumpe1及其在體外和回接到馬鈴薯植株中的表達(dá)情況。首先克隆了小鼠干擾素-γ基因(mifn-γ)的cdna,構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒phis1522-mifn-γ,以此重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化bacillusmegateriumpe1,并用d-xylose誘導(dǎo)mifn-γ的表達(dá),經(jīng)sds-page及elisa檢測(cè)均表明,mifn-γ在bacillusmegateriumpe1中獲得了表達(dá),表達(dá)量為224.6229mg/l。將表達(dá)mifn-γ的bacillusmegateriumpe1菌株回接到馬鈴薯組培苗,回接5d、10d、15d、20d后分別進(jìn)行檢測(cè),均檢測(cè)到組培苗中有mifn-γ的存在,說明導(dǎo)入mifn-γ基因的bacillusmegateriumpe1菌株能夠在馬鈴薯組培苗中侵染、定殖,并可在馬鈴薯植株內(nèi)表達(dá)具有活性的外源蛋白。(4)研究了家蠶素Ⅱ基因(bbx-Ⅱ)導(dǎo)入bacillusmegateriumpe1及其在體外和回接到馬鈴薯植株中的表達(dá)情況。首先克隆了家蠶素Ⅱ基因(bbx-Ⅱ)的cdna,構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒phis1522-bbx-Ⅱ,然后轉(zhuǎn)化bacillusmegateriumpe1,篩選攜帶bbx-Ⅱ的陽(yáng)性菌落,以d-xylose誘導(dǎo)bbx-Ⅱ的表達(dá),sds-page檢測(cè)結(jié)果顯示,bbxⅡ在bacillusmegateriumpe1中獲得了表達(dá)。將表達(dá)bbxⅡ的bacillusmegateriumpe1菌株回接到馬鈴薯組培苗,回接5d、10d、15d、20d后分別進(jìn)行檢測(cè),均檢測(cè)到組培苗中存在bbxⅡ,說明導(dǎo)入bbx-Ⅱ基因的bacillusmegateriumpe1菌株能夠在馬鈴薯組培苗中侵染、定殖,并可在馬鈴薯植株內(nèi)表達(dá)bbxⅡ。(5)對(duì)bacillusmegateriumpe1表達(dá)的bbxⅡ進(jìn)行了純化和生物活性鑒定。首先將bacillusmegateriumpe1表達(dá)的bbxⅡ利用親和層析獲得純化的bbxⅡ蛋白,配制bbxⅡ注射液,并處理家蠶和小鼠。結(jié)果表明,bbxⅡ無(wú)論對(duì)正常家蠶、饑餓后進(jìn)食的家蠶還是飼喂高糖飼料誘導(dǎo)的高血糖家蠶,均具有降低血液海藻糖含量及提高海藻糖酶活性的作用。Bacillus megaterium PE1表達(dá)的BBXⅡ,對(duì)正常小鼠和鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病小鼠也均有降血糖的生理活性,其效果與胰島素相近。(6)本研究結(jié)果說明,利用馬鈴薯內(nèi)生細(xì)菌Bacillus megaterium PE1作為外源基因表達(dá)菌,無(wú)論在體外還是回接到宿主馬鈴薯植株內(nèi),均能表達(dá)外源基因,獲得具有生物活性的表達(dá)產(chǎn)物,因此建立一種植物內(nèi)生菌-宿主植物新型基因工程表達(dá)系統(tǒng)是可能的。這種表達(dá)系統(tǒng)具有構(gòu)建過程相對(duì)簡(jiǎn)單、成本低、內(nèi)生菌在宿主植物體內(nèi)擴(kuò)散快、用量少、通過常規(guī)無(wú)性繁殖方法可傳遞給后代、有些內(nèi)生菌具有多種宿主植物、對(duì)人安全無(wú)害等諸多優(yōu)勢(shì),如將對(duì)人體有益的外源蛋白基因如疫苗、消化道防御性蛋白等導(dǎo)入內(nèi)生菌并使其在植物中表達(dá),人食用之后可以起到藥食兩用的效果,將具有良好的開發(fā)前景。但對(duì)于導(dǎo)入外源基因的內(nèi)生菌在回接到宿主植物之后與野生菌的競(jìng)爭(zhēng)與定殖問題、如何提高外源基因的表達(dá)量、如何利用宿主植物的蛋白質(zhì)合成體系對(duì)內(nèi)生菌合成的外源蛋白進(jìn)行加工修飾,彌補(bǔ)原核表達(dá)體系的不足,從而使內(nèi)生菌在植物中表達(dá)外源活性蛋白這一方法成為兼具原核及真核表達(dá)體系雙重優(yōu)點(diǎn)等問題還有待于進(jìn)一步深入研究。
【關(guān)鍵詞】：植物內(nèi)生細(xì)菌 巨大芽孢桿菌PE1菌株 馬鈴薯 干擾素-γ 家蠶素Ⅱ 外源基因表達(dá)系統(tǒng)
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：Q789;Q943.2
【目錄】：

• 符號(hào)說明5-11
• 中文摘要11-14
• Abstract14-18
• 1 前言18-42
• 1.1 植物內(nèi)生菌研究概況18-25
• 1.1.1 植物內(nèi)生菌概念的發(fā)展演變18-19
• 1.1.2 植物內(nèi)生菌的生物多樣性19-21
• 1.1.2.1 植物內(nèi)生菌種類的多樣性19-20
• 1.1.2.2 內(nèi)生菌宿主植物的多樣性20
• 1.1.2.3 內(nèi)生菌在宿主植物體內(nèi)存在部位的多樣性20-21
• 1.1.3 植物內(nèi)生菌的生物學(xué)作用21-23
• 1.1.3.1 富集營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)21
• 1.1.3.2 產(chǎn)生植物激素21-22
• 1.1.3.3 產(chǎn)生酶類22
• 1.1.3.4 增強(qiáng)宿主植物的抗性22-23
• 1.1.4 植物內(nèi)生菌的應(yīng)用23-25
• 1.1.4.1 植物內(nèi)生菌作為生物防治因子23-24
• 1.1.4.2 植物內(nèi)生菌是生物活性物質(zhì)的資源庫(kù)24-25
• 1.1.4.3 作為外源基因表達(dá)的載體25
• 1.2 巨大芽孢桿菌（Bacillus megaterium）的應(yīng)用研究進(jìn)展25-30
• 1.2.1 巨大芽孢桿菌在微生物肥料中的應(yīng)用26
• 1.2.2 巨大芽孢桿菌在環(huán)境保護(hù)中的應(yīng)用26-27
• 1.2.2.1 用于水質(zhì)凈化26
• 1.2.2.2 降解殘留農(nóng)藥26-27
• 1.2.2.3 治理土壤重金屬離子污染27
• 1.2.3 巨大芽孢桿菌在生物活性物質(zhì)生產(chǎn)中的應(yīng)用27
• 1.2.4 巨大芽孢桿菌作為原核表達(dá)系統(tǒng)27-30
• 1.2.4.1 巨大芽孢桿菌外源蛋白表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)28
• 1.2.4.2 巨大芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)的發(fā)展28
• 1.2.4.3 利用巨大芽孢桿菌表達(dá)的外源蛋白28-30
• 1.3 轉(zhuǎn)基因植物作為生物反應(yīng)器的研究進(jìn)展30-34
• 1.3.1 利用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)的蛋白產(chǎn)品30-33
• 1.3.1.1 疫苗30-31
• 1.3.1.2 抗體31-32
• 1.3.1.3 藥用蛋白32
• 1.3.1.4 其他蛋白32-33
• 1.3.2 植物轉(zhuǎn)化的途徑33-34
• 1.3.2.1 細(xì)胞核轉(zhuǎn)化33
• 1.3.2.2 質(zhì)體轉(zhuǎn)化33
• 1.3.2.3 植物細(xì)胞懸浮液培養(yǎng)33-34
• 1.3.2.4 瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)34
• 1.3.3 植物生物反應(yīng)器的優(yōu)化34
• 1.4 干擾素-γ 的生理作用及其體外表達(dá)的研究進(jìn)展34-38
• 1.4.1 干擾素-γ 的分子特征35
• 1.4.2 干擾素-γ 的主要功能35-36
• 1.4.2.1 抗病毒作用35-36
• 1.4.2.2 免疫調(diào)節(jié)作用36
• 1.4.2.3 抗腫瘤作用36
• 1.4.3 重組干擾素-γ 的表達(dá)36-38
• 1.4.3.1 重組干擾素-γ 在原核細(xì)胞中的表達(dá)37-38
• 1.4.3.2 重組干擾素-γ 在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)38
• 1.4.3.3 重組干擾素-γ 在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)38
• 1.5 家蠶素Ⅱ的研究進(jìn)展38-40
• 1.5.1 家蠶素的發(fā)現(xiàn)38-39
• 1.5.2 家蠶素Ⅱ的結(jié)構(gòu)與基因特點(diǎn)39
• 1.5.3 家蠶素Ⅱ的生理功能39-40
• 1.6 本研究的目的與意義40-42
• 2 材料與方法42-64
• 2.1 試驗(yàn)材料42-48
• 2.1.1 生物材料42
• 2.1.2 質(zhì)粒和菌株42
• 2.1.3 生化試劑42-46
• 2.1.3.1 試劑及試劑盒42-43
• 2.1.3.2 主要試劑配制43-46
• 2.1.4 供試家蠶人工飼料和小鼠飼料的配方與加工46
• 2.1.5 PCR引物46
• 2.1.6 主要儀器46-47
• 2.1.7 主要軟件及數(shù)據(jù)庫(kù)47-48
• 2.2 試驗(yàn)方法48-64
• 2.2.1 馬鈴薯塊莖中內(nèi)生細(xì)菌的分離與鑒定48-51
• 2.2.1.1 馬鈴薯塊莖中內(nèi)生細(xì)菌的分離純化48-49
• 2.2.1.2 內(nèi)生細(xì)菌 16S rDNA序列測(cè)定49-51
• 2.2.1.3 內(nèi)生細(xì)菌系統(tǒng)發(fā)育分析51
• 2.2.2 馬鈴薯內(nèi)生細(xì)菌菌株Bacillus megaterium PE1原生質(zhì)體制備51-53
• 2.2.2.1 PE1生長(zhǎng)曲線的制作51
• 2.2.2.2 原生質(zhì)體制備及再生方法51-52
• 2.2.2.3 溶菌酶濃度對(duì)PE1原生質(zhì)體形成及再生的影響52
• 2.2.2.4 酶解溫度對(duì)PE1原生質(zhì)體形成及再生的影響52
• 2.2.2.5 酶解時(shí)間對(duì)PE1原生質(zhì)體形成及再生的影響52
• 2.2.2.6 正交試驗(yàn)優(yōu)化PE1原生質(zhì)體形成及再生條件52-53
• 2.2.3 小鼠干擾素-γ 基因的克隆與表達(dá)53-60
• 2.2.3.1 小鼠干擾素-γ 基因的克隆53-55
• 2.2.3.2 小鼠干擾素-γ 基因與表達(dá)載體pHIS1522的連接55-57
• 2.2.3.3 重組質(zhì)粒pHIS1522/mIFN-γ 轉(zhuǎn)化PE1的原生質(zhì)體57-58
• 2.2.3.4 小鼠干擾素-γ 在PE1中的表達(dá)58-59
• 2.2.3.5 重組小鼠干擾素-γ 的檢測(cè)59
• 2.2.3.6 小鼠干擾素-γ 在馬鈴薯中的表達(dá)59-60
• 2.2.3.7 馬鈴薯中表達(dá)小鼠干擾素-γ 的檢測(cè)60
• 2.2.4 家蠶素Ⅱ基因的克隆與表達(dá)60-64
• 2.2.4.1 家蠶素Ⅱ基因的克隆60
• 2.2.4.2 家蠶素Ⅱ基因與表達(dá)載體pHIS1522的連接60
• 2.2.4.3 重組質(zhì)粒pHIS1522/BBX-Ⅱ轉(zhuǎn)化PE160-61
• 2.2.4.4 家蠶素Ⅱ在PE1中的表達(dá)61
• 2.2.4.5 SDS-PAGE檢測(cè)家蠶素Ⅱ的表達(dá)61
• 2.2.4.6 家蠶素Ⅱ在馬鈴薯中的表達(dá)61
• 2.2.4.7 馬鈴薯組培苗中家蠶素Ⅱ的檢測(cè)61
• 2.2.4.8 PE1表達(dá)的家蠶素Ⅱ的純化與注射液的配制61-62
• 2.2.4.9 PE1表達(dá)的家蠶素Ⅱ?qū)倚Q的降血糖作用試驗(yàn)62
• 2.2.4.10 PE1表達(dá)的家蠶素Ⅱ?qū)π∈蟮慕笛窃囼?yàn)62-64
• 3 結(jié)果與分析64-94
• 3.1 馬鈴薯塊莖中內(nèi)生細(xì)菌的分離及鑒定64-69
• 3.1.1 表面滅菌方法對(duì)馬鈴薯塊莖中內(nèi)生細(xì)菌分離效果的影響64
• 3.1.2 馬鈴薯塊莖中內(nèi)生細(xì)菌的培養(yǎng)及鑒定64-69
• 3.1.2.1 內(nèi)生細(xì)菌 16S rDNA的擴(kuò)增結(jié)果65
• 3.1.2.2 內(nèi)生細(xì)菌 16S rDNA序列系統(tǒng)進(jìn)化分析與分類鑒定65-69
• 3.2 制備馬鈴薯內(nèi)生細(xì)菌Bacillus megaterium PE1原生質(zhì)體69-73
• 3.2.1 Bacillus megaterium PE1的生長(zhǎng)曲線69-70
• 3.2.2 溶菌酶濃度對(duì)Bacillus megaterium PE1原生質(zhì)體形成及再生的影響70-71
• 3.2.3 酶解溫度對(duì)Bacillus megaterium PE1原生質(zhì)體形成及再生的影響71
• 3.2.4 酶解時(shí)間對(duì)Bacillus megaterium PE1原生質(zhì)體形成及再生的影響71-72
• 3.2.5 Bacillus megaterium PE1原生質(zhì)體形成及再生條件的正交試驗(yàn)優(yōu)化72-73
• 3.3 小鼠干擾素-γ 在馬鈴薯內(nèi)生巨大芽孢桿菌PE1菌株和馬鈴薯組培苗中的表達(dá)73-80
• 3.3.1 小鼠干擾素-γ 基因的克隆73-75
• 3.3.1.1 小鼠淋巴細(xì)胞總RNA的提取73
• 3.3.1.2 RT-PCR結(jié)果73-74
• 3.3.1.3 重組質(zhì)粒pEASY-T1 simple/mIFN-γ 的鑒定74-75
• 3.3.1.4 mIFN-γ cDNA序列測(cè)定結(jié)果75
• 3.3.2 小鼠干擾素-γ 在馬鈴薯內(nèi)生巨大芽孢桿菌PE1菌株中的表達(dá)75-78
• 3.3.2.1 重組表達(dá)質(zhì)粒pHIS1522/mIFN-γ 的構(gòu)建76
• 3.3.2.2 重組表達(dá)質(zhì)粒pHIS1522/mIFN-γ 轉(zhuǎn)化PE1原生質(zhì)體76-77
• 3.3.2.3 小鼠干擾素-γ 在PE1中的表達(dá)77-78
• 3.3.3 小鼠干擾素-γ 在回接內(nèi)生巨大芽孢桿菌PE1的馬鈴薯組培苗中的表達(dá)78-80
• 3.4 家蠶素Ⅱ在馬鈴薯內(nèi)生巨大芽孢桿菌PE1菌株和馬鈴薯組培苗中的表達(dá)80-94
• 3.4.1 家蠶素Ⅱ基因的克隆80-83
• 3.4.1.1 家蠶頭部總RNA的提取80-81
• 3.4.1.2 RT-PCR結(jié)果81
• 3.4.1.3 重組質(zhì)粒pEASY-T1 simple/BBX-Ⅱ的鑒定81-82
• 3.4.1.4 BBX-Ⅱ cDNA序列測(cè)定結(jié)果82-83
• 3.4.2 BBX-Ⅱ在馬鈴薯內(nèi)生巨大芽孢桿菌PE1菌株中的表達(dá)83-87
• 3.4.2.1 重組表達(dá)質(zhì)粒pHIS1522/BBX-Ⅱ的構(gòu)建83-84
• 3.4.2.2 重組表達(dá)質(zhì)粒pHIS1522/BBX-Ⅱ轉(zhuǎn)化PE1原生質(zhì)體84-85
• 3.4.2.3 BBXⅡ在B. megateriuim PE1中的表達(dá)及純化85-87
• 3.4.3 BBXⅡ在回接內(nèi)生巨大芽孢桿菌PE1菌株的馬鈴薯組培苗中的表達(dá)87
• 3.4.4 內(nèi)生巨大芽孢桿菌PE1菌株表達(dá)的家蠶素Ⅱ?qū)倚Q的降血糖作用87-92
• 3.4.4.1 PE1中表達(dá)的BBXⅡ?qū)φ＜倚Q血糖水平及海藻糖酶活性的影響87-89
• 3.4.4.2 PE1中表達(dá)的BBXⅡ?qū)︷囸I后進(jìn)食的家蠶血糖和海藻糖酶活性的影響89-91
• 3.4.4.3 PE1中表達(dá)的BBXⅡ?qū)Ω咛秋暳险T導(dǎo)的高血糖家蠶的降血糖效果91-92
• 3.4.5 內(nèi)生巨大芽孢桿菌PE1菌株表達(dá)的家蠶素Ⅱ?qū)π∈蟮慕笛亲饔?/span>92-94
• 3.4.5.1 PE1表達(dá)的BBXⅡ?qū)φＰ∈笱堑挠绊?/span>92
• 3.4.5.2 PE1表達(dá)的BBXⅡ?qū)μ悄虿⌒∈笱撬降挠绊?/span>92-94
• 4 討論94-100
• 4.1 馬鈴薯內(nèi)生菌種群分析及外源基因表達(dá)載體菌株的確定94-96
• 4.2 巨大芽孢桿菌原生質(zhì)體制備條件的確定96-97
• 4.3 利用轉(zhuǎn)基因內(nèi)生菌在植物中表達(dá)外源基因的可行性及其優(yōu)勢(shì)97-98
• 4.4 今后進(jìn)一步研究的方向98-100
• 5 結(jié)論100-102
• 參考文獻(xiàn)102-123
• 致謝123-124
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況124

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 陳治芳;王文橋;韓秀英;張小風(fēng);馬志強(qiáng);;灰霉病化學(xué)防治及抗藥性研究進(jìn)展[J];河北農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年08期

2 劉玉軍;張龍娃;何亞瓊;王濱;丁德貴;李增智;;櫟旋木柄天牛高毒力球孢白僵菌菌株的篩選[J];昆蟲學(xué)報(bào);2008年02期

3 范麗華;牛輝林;張金桐;劉金龍;楊美紅;宗世祥;;臍腹小蠹高致病力蟲生真菌菌株的篩選[J];應(yīng)用昆蟲學(xué)報(bào);2014年02期

4 呂黎;王蕾;周佳敏;羅志威;豐來(lái);;巨大芽孢桿菌的研究現(xiàn)狀及應(yīng)用[J];農(nóng)業(yè)科學(xué)研究;2014年03期

5 蒲順昌;劉玉軍;葛永斌;郭慧;;從光肩星天牛活體蟲中分離球孢白僵菌及其無(wú)紡布菌條生產(chǎn)[J];宿州學(xué)院學(xué)報(bào);2013年02期

6 李曉雪;田錫煒;王永紅;儲(chǔ)炬;張嗣良;劉玉偉;;擬干酪乳桿菌胞內(nèi)代謝產(chǎn)物的GC-MS分析方法的建立[J];食品工業(yè)科技;2013年18期

7 李慧;李紅梅;雷霆雯;;人干擾素α-2b基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化[J];生物技術(shù);2014年01期

8 杜威;江萍;王彥蘇;呂立新;王宏偉;卜元卿;劉常宏;戴傳超;;白僵菌施加對(duì)水稻三種抗氧化酶活力及葉際微生物多樣性的影響[J];生態(tài)學(xué)報(bào);2014年23期

9 李嘉;王小奇;;球孢白僵菌在香蕉象甲防治中的應(yīng)用研究概述[J];熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué);2015年08期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 鄔強(qiáng);結(jié)核分枝桿菌抗原及其融合蛋白在大腸桿菌、煙草中表達(dá)和免疫效應(yīng)研究[D];海南大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳治芳;殺菌劑混合物對(duì)番茄灰霉病菌毒力增效研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

2 劉玉軍;危險(xiǎn)性林業(yè)有害生物櫟旋木柄天牛生物防治新途徑的研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

3 李欣欣;天然來(lái)源的選擇性抑制疫霉菌孢子囊產(chǎn)生的化合物的化學(xué)及生物學(xué)研究[D];浙江大學(xué);2013年

4 楊曉楠;山東省灰霉病菌對(duì)常用殺菌劑敏感性監(jiān)測(cè)及微孔板法檢測(cè)技術(shù)研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

5 高劍;內(nèi)生真菌多樣性及其生態(tài)分布[D];廣東海洋大學(xué);2013年

6 申靜靜;油菜葉片組織培養(yǎng)體系建立及葉綠體表達(dá)載體的構(gòu)建[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

7 FAHEEM AHMED KHAN;[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

8 李亞梅;華南木薯（SC8）葉綠體遺傳轉(zhuǎn)化體系研究[D];海南大學(xué);2013年

9 張艷杰;玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63對(duì)蔬菜根結(jié)線蟲的防治及其作用機(jī)理[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

10 陳亞平;耐鹽堿植物內(nèi)生真菌的分離鑒定及促進(jìn)作物耐鹽菌株的篩選[D];浙江大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：利用馬鈴薯內(nèi)生菌Bacillus megaterium PE1表達(dá)小鼠干擾素-γ和家蠶素Ⅱ的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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