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CVA16-SHZH05病毒株和CVA16-CC病毒株生物學(xué)特性的比較研究

發(fā)布時(shí)間:2017-05-29 19:08

  本文關(guān)鍵詞:CVA16-SHZH05病毒株和CVA16-CC病毒株生物學(xué)特性的比較研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。


【摘要】:背景和目的: 手足口。╤and-foot-mouth disease, HFMD)是一種世界性傳染病。近幾十年在亞太地區(qū)多次暴發(fā)流行,其中馬來西亞、新加坡、日本是HFMD發(fā)病率較高的國家。日本于1969~1970年暴發(fā)了以柯薩奇病毒A組16型(Coxsachie virus A16, CVA16)感染為主的HFMD。1997~2000年出現(xiàn)了以腸道病毒71型(enteroviruses71, EV71)和CVA16交替出現(xiàn)及混合感染為主的HFMD流行。在我國,自1981年上海初次發(fā)現(xiàn)HFMD后,在安徽、河南、廣東、北京、臺(tái)灣地區(qū)等多個(gè)省市區(qū)均有流行報(bào)道。1998年在我國臺(tái)灣地區(qū)暴發(fā)的HFMD中,CVA16感染與EV71感染在HFMD中交替出現(xiàn)。目前,研究已證明EV71和CVA16都是HFMD的主要病原體。針對1998年我國安徽省阜陽市EV71感染的暴發(fā)HFMD引起的重大危害,目前我國已分離出多株EV71病毒,并進(jìn)行了深入的基礎(chǔ)和應(yīng)用研究,針對EV71感染的HFMD疫苗即將上市。 CVA16病毒是另一種引起嚴(yán)重HFMD的腸道病毒,與EV71相比,其在HFMD病例中發(fā)現(xiàn)晚、尚未引起足夠重視。目前,國內(nèi)對CVA16的研究日益重視,前期的研究證實(shí),CVA16病毒在流行中基因組變異和重組率高,因此,疫苗和藥物的研究進(jìn)展緩慢。 本實(shí)驗(yàn)室在此之前發(fā)現(xiàn)CVA16-SHZH05毒力較弱,但尚無深入的研究,而CVA16-CC則具有一定的毒力。由于CVA16-SHZH05和CVA16-CC024同屬于CVA16,為了進(jìn)一步比較疫苗安全效應(yīng)差異。本研究從疫苗安全效應(yīng)方面,,著重分析了CVA16的這兩個(gè)亞型毒株(CVA16-SHZH05和CVA16-CC)的生物學(xué)特點(diǎn)。在EV71疫苗研究和藥物設(shè)計(jì)成功經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,本研究建立了可用于疫苗和藥物有效性評價(jià)的動(dòng)物模型。利用該動(dòng)物模型研究不同株CVA16病毒的致病特點(diǎn);觀察兩株病毒感染后體內(nèi)病毒的親嗜性、病毒復(fù)制能力、感染周期;研究病毒在體外的細(xì)胞親嗜性和復(fù)制能力。本研究為CVA16病毒的基礎(chǔ)研究提供依據(jù),為疫苗研發(fā)奠定基礎(chǔ)。 方法: 本研究的內(nèi)容共分為兩個(gè)部分:在第一部分研究中,建立乳鼠動(dòng)物模型,用細(xì)胞培養(yǎng)的病毒收獲液感染新生乳鼠腦腔,觀察長春分離的多株流行株(CVA16-CC)和早期深圳分離株(CVA16-SHZH05)對乳鼠模型的致病性、病毒在模型鼠體內(nèi)感染的復(fù)制能力、組織定位和感染周期等,對不同病毒的生物學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行了比較研究。在第二部分研究中,在第一部分的基礎(chǔ)上通過體外實(shí)驗(yàn)對不同細(xì)胞株(CVA16-CC和CVA16-SHZH05)的感染能力進(jìn)行了平行對比研究。 結(jié)果: 本研究成功建立了CVA16流行株的乳鼠致死性感染模型,利用此模型的研究發(fā)現(xiàn),遺傳背景相近的病毒卻具有不同的致病能力;CVA16-CC與CVA16-SHZH05具有截然不同的特點(diǎn)。在乳鼠模型實(shí)驗(yàn)中CVA16-SHZH05對乳鼠無感染性和致死性;而CVA16-CC病毒株對乳鼠有毒株相關(guān)及劑量相關(guān)的感染性和致死性。通過乳鼠組織病理學(xué)研究、免疫組化分析和病毒載量測定等結(jié)果發(fā)現(xiàn),以CVA16-CC024病毒為代表的CVA16-CC病毒株可以在新生乳鼠各種組織中大量復(fù)制并嚴(yán)重?fù)p傷組織,對肺、后肢肌及豎脊肌具有特異性侵染力;CVA16-SHZH05則不能在新生乳鼠體內(nèi)復(fù)制、不能引起乳鼠組織損傷。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)CVA16-SHZH05和CVA16-CC病毒株均對BHK細(xì)胞具有感染性和致細(xì)胞病變效應(yīng),而對C6、L929、ML-1細(xì)胞則不具有感染性。遺傳學(xué)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)CVA16-SHZH05病毒和CVA16-CC024病毒的基因組5’非翻譯區(qū)(untranslated Regions, UTR)及P1,P2和P3蛋白編碼區(qū)具有多樣性差異。 結(jié)論: 在乳鼠模型實(shí)驗(yàn)中CVA16-SHZH05對乳鼠無感染性和致死性;而CVA16-CC病毒株對乳鼠有毒株相關(guān)及劑量相關(guān)的感染性和致死性。CVA16-SHZH05不感染乳鼠,不在乳鼠體內(nèi)復(fù)制,故不造成組織病理損傷。以CVA16-CC024病毒為代表的長春分離病毒株,除對乳鼠造成發(fā)病和致死外,我們觀察到其在乳鼠體內(nèi)多個(gè)器官復(fù)制,并且對乳鼠的病理性損傷具有組織特異性,特異性損傷肺、后肢肌、豎脊肌等。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明CVA16-SHZH05和CVA16-CC病毒對多種細(xì)胞系的作用是一致的,即均對BHK細(xì)胞具有感染性和致細(xì)胞病變效應(yīng),而對C6、L929、ML-1細(xì)胞則未顯示具有感染性。病毒基因組測序結(jié)果顯示CVA16-SHZH05病毒和CVA16-CC024病毒的基因組5’非翻譯區(qū)(untranslated regions,5’UTR)及P1,P2和P3蛋白編碼區(qū)具有多樣性差異,這些多樣性差異可導(dǎo)致病毒生物特性的差異。本研究為進(jìn)一步研究CVA16分子流行病學(xué)和毒力變異、致病位點(diǎn)篩查提供了參考,為預(yù)防性疫苗和治療性藥物開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】:柯薩奇A組16型病毒 手足口病 流行株 非流行株 乳鼠模型
【學(xué)位授予單位】:吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號】:R373
【目錄】:
  • 前言4-5
  • 中文摘要5-8
  • Abstract8-13
  • 中英文縮略詞對照表13-14
  • 第1章 緒論14-36
  • 1.1 手足口病病原學(xué)與流行病學(xué)14-21
  • 1.2 手足口病臨床研究現(xiàn)狀21-29
  • 1.3 手足口病動(dòng)物模型的研究29-33
  • 1.4 本研究的目的和意義33-36
  • 第2章 柯薩奇病毒 A 組 16 型感染乳鼠模型的比較研究36-100
  • 2.1 材料與方法37-43
  • 2.1.1 材料37-38
  • 2.1.2 方法38-43
  • 2.2 結(jié)果43-87
  • 2.2.1 乳鼠攻毒試驗(yàn)43-47
  • 2.2.2 組織病理學(xué)及免疫組化檢查47-49
  • 2.2.3 病毒載量試驗(yàn)49-51
  • 2.2.4 柯薩奇病毒 A 組 16 型遺傳學(xué)分析51-87
  • 2.3 討論87-97
  • 2.4 小結(jié)97-100
  • 第3章 柯薩奇病毒 A 組 16 型體外感染細(xì)胞的比較研究100-118
  • 3.1 材料與方法101-104
  • 3.1.1 材料101-102
  • 3.1.2 方法102-104
  • 3.2 結(jié)果104-111
  • 3.2.1 CVA16 病毒感染后的鼠細(xì)胞形態(tài)變化104-107
  • 3.2.2 病毒感染后的鼠細(xì)胞形態(tài)變化比較107-111
  • 3.3 討論111-116
  • 3.3.1 CPE 與 CVA16 病毒滴度及感染細(xì)胞時(shí)間的相關(guān)性111-113
  • 3.3.2 CVA16 病毒感染 BHK 細(xì)胞產(chǎn)生 CPE 現(xiàn)象的影響因素113-115
  • 3.3.3 CPE 現(xiàn)象與 EV71 和 CVA16-CC 病毒株115-116
  • 3.4 小結(jié)116-118
  • 第4章 結(jié)論118-120
  • 參考文獻(xiàn)120-132
  • 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果132-134
  • 致謝134

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號:405515

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