蛋白質(zhì)糖基化是生命體最重要的翻譯后修飾之一,糖蛋白幾乎參與了所有重要的生命過程。蛋白質(zhì)糖基化主要常見的類型有N-糖基化和O-糖基化。糖基化的修飾情況與蛋白質(zhì)本身和外部客觀環(huán)境緊密相關(guān),本論文致力于發(fā)展不同生物樣本的糖基化修飾分析方法,針對(duì)血漿中的唾液酸化糖肽、內(nèi)源性糖基化肽段以及尿液外泌體的提取、富集及鑒定等問題展開工作,實(shí)現(xiàn)了對(duì)血清唾液酸糖肽的特異性富集鑒定、血漿內(nèi)源性完整N/O-糖基化肽段首次大規(guī)模鑒定分析,建立了尿液外泌體與血漿外泌體蛋白之間的相關(guān)性,并將其應(yīng)用于臨床肝癌患者的樣品分析。針對(duì)血清中唾液酸糖基化修飾豐度低和富集特異性低的問題,我們發(fā)展了一種多組氨酸修飾的聚合物微球,利用其具有的靜電作用、親水作用以及多組氨酸之間的協(xié)同作用,可以實(shí)現(xiàn)對(duì)唾液酸糖基化肽段的特異性富集,并成功從4mL人源血清樣品中富集到510條完整糖基化肽段,其中唾液酸化糖基化肽段的特異性高達(dá)94.7%,實(shí)現(xiàn)了復(fù)雜生物樣本中唾液酸糖基化修飾的特異性富集和分析。針對(duì)人源血清中的內(nèi)源性糖基化肽段的低豐度以及難鑒定的問題,我們發(fā)展了一種利用酸熱和超濾的方法提取內(nèi)源性肽段,再利用親水相互作用實(shí)現(xiàn)對(duì)糖基化肽段的高效富... 

【文章頁數(shù)】：156 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 蛋白質(zhì)組學(xué)
        1.1.1 蛋白質(zhì)組學(xué)概述
        1.1.2 蛋白質(zhì)組學(xué)的研究策略
        1.1.3 基于質(zhì)譜技術(shù)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究策略
        1.1.4 基于質(zhì)譜技術(shù)的蛋白質(zhì)組學(xué)定量技術(shù)
    1.2 糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)
        1.2.1 糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)概述
        1.2.2 糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)的研究策略
    1.3 外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)
        1.3.1 外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)概述
        1.3.2 外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)的研究策略
        1.3.3 外泌體糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)的研究策略
    1.4 論文設(shè)計(jì)思路
第2章 唾液酸化糖肽富集新材料的制備及應(yīng)用
    2.1 研究背景
    2.2 實(shí)驗(yàn)部分
        2.2.1 材料與試劑
        2.2.2 材料制備與表征
        2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)蛋白和血清樣品的前處理
        2.2.4 唾液酸化糖肽富集
        2.2.5 MHM回收率和富集容量評(píng)價(jià)
        2.2.6 唾液酸糖肽質(zhì)譜分析
        2.2.7 數(shù)據(jù)檢索與分析
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 制備MHM材料的合成和表征
        2.3.2 MHM材料富集唾液酸糖肽的可行性評(píng)估
        2.3.3 MHM材料富集復(fù)雜樣品的應(yīng)用
    2.4 本章小結(jié)
第3章 內(nèi)源性完整糖肽的規(guī)模化鑒定
    3.1 研究背景
    3.2 實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.1 材料與試劑
        3.2.2 內(nèi)源性肽段的提取
        3.2.3 內(nèi)源性糖基化肽段的富集
        3.2.4 質(zhì)譜分析
        3.2.5 數(shù)據(jù)檢索和分析
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 內(nèi)源性糖基化肽段研究策略
        3.3.2 內(nèi)源性糖基化肽段樣品處理及鑒定
        3.3.3 內(nèi)源性糖基化肽段的生物信息分析
    3.4 小結(jié)
第4章 血漿與尿液外泌體蛋白質(zhì)組相關(guān)性及其糖基化修飾的研究
    4.1 研究背景
    4.2 實(shí)驗(yàn)部分
        4.2.1 材料與試劑
        4.2.2 外泌體提取與蛋白質(zhì)酶解
        4.2.3 外泌體糖基化肽段富集
        4.2.4 質(zhì)譜分析
        4.2.5 數(shù)據(jù)檢索與分析
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 尿液與血漿外泌體蛋白質(zhì)組相關(guān)性建立與評(píng)價(jià)
        4.3.2 肝癌患者尿液與血漿外泌體蛋白質(zhì)組相關(guān)性建立與分析
        4.3.3 肝癌患者尿液外泌體糖基化定量蛋白質(zhì)組分析
    4.4 小結(jié)
第5章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
作者簡介在學(xué)期內(nèi)發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果
致謝



本文編號(hào)：3701408