表觀遺傳學(xué)是近三十年興起、而且發(fā)展迅速的一個(gè)遺傳學(xué)分支學(xué)科。隨著對(duì)表觀遺傳學(xué)研究的不斷深入，越來越多的數(shù)據(jù)顯示，幾乎所有人類疾病，尤其是腫瘤中都存在表觀遺傳調(diào)控異常。研究和弄清表觀遺傳調(diào)控酶對(duì)基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控以及其在腫瘤等疾病發(fā)生中的作用機(jī)制具有重要意義。我的研究課題主要圍繞人Ino80染色質(zhì)重塑酶和人MOF乙�；D(zhuǎn)移酶而展開，本論文的主要研究?jī)?nèi)容概括如下：人Ino80（hIno80）染色體重塑酶復(fù)合物是SWI/SNF染色體重塑酶的家族成員之一，從酵母到人類具有高度保守性。雖然已有研究發(fā)現(xiàn)hIno80復(fù)合物能夠參與DNA損傷修復(fù)并且導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯，但hIno80復(fù)合物在這個(gè)過程中所發(fā)揮的具體機(jī)制尚不清楚。本文中，首先，在敲低hIno80的細(xì)胞內(nèi)，通過基因芯片檢測(cè)技術(shù)得到基因表達(dá)譜。通過對(duì)基因表達(dá)譜內(nèi)數(shù)據(jù)分析后發(fā)現(xiàn)，hIno80能夠調(diào)控多個(gè)細(xì)胞周期相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，尤其是p21基因。接下來，利用qRT-PCR、免疫印跡以及免疫熒光染色技術(shù)驗(yàn)證了這一結(jié)果，并首次證實(shí)hIno80復(fù)合物可以負(fù)調(diào)控p21的表達(dá)。鑒于p21在細(xì)胞周期進(jìn)程中起著關(guān)鍵作用，我們推測(cè)，hIno80對(duì)p21的調(diào)控作用可能直接... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
第一章 緒論
    第一節(jié) 研究背景
        1.1 表觀遺傳學(xué)概述
        1.2 hIno80 染色質(zhì)重塑酶
            1.2.1 hIno80 復(fù)合物的結(jié)構(gòu)
            1.2.2 hIno80 復(fù)合物的生物學(xué)功能
        1.3 細(xì)胞周期
            1.3.1 細(xì)胞周期簡(jiǎn)介
            1.3.2 p21 蛋白在細(xì)胞周期中的作用機(jī)制
        1.4 hMOF 乙�；D(zhuǎn)移酶
            1.4.1 hMOF 的結(jié)構(gòu)與功能
            1.4.2 hMOF 在腫瘤發(fā)生中的作用研究
    第二節(jié) 研究目的、意義和內(nèi)容
        2.1 研究目的和立題依據(jù)
        2.2 研究?jī)?nèi)容
第二章 hIno80 復(fù)合物調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄并參與維持正常細(xì)胞周期進(jìn)程
    第一節(jié) 引言
    第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)試劑、抗體及其他材料
        2.3 細(xì)胞株
    第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2 基因敲低實(shí)驗(yàn)（siRNA Knockdown）
        3.3 RNA 提取
        3.4 逆轉(zhuǎn)錄
        3.5 實(shí)時(shí)定量 PCR（Quantitative Real-time PCR）
        3.6 Western blot
        3.7 DNA 芯片數(shù)據(jù)分析
        3.8 細(xì)胞周期同步化
        3.9 流式細(xì)胞分析
    第四節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和分析
        4.1 siRNA 敲低效果的驗(yàn)證
        4.2 敲低 hIno80 復(fù)合物的基因表達(dá)譜分析
        4.3 細(xì)胞周期相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
        4.4 敲低 hIno80 延遲 G2/M 至 G1 期的進(jìn)程
    第五節(jié) 本章小結(jié)
第三章 hIno80 復(fù)合物負(fù)調(diào)控 p21 基因的機(jī)制研究
    第一節(jié) 引言
    第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)試劑、抗體及其他材料
        2.3 細(xì)胞株
    第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2 免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)（Immunoflourescence，IF）
        3.3 染色質(zhì)免疫沉淀(Chromatin immunoprecipitation，ChIP)
        3.4 CPT 和 Doxo 處理細(xì)胞
        3.5 p53 缺失變體質(zhì)粒構(gòu)建
        3.6 細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒
    第四節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和分析
        4.1 敲低 hIno80 上調(diào) p21 的表達(dá)
        4.2 hIno80 復(fù)合物富集于 p21 啟動(dòng)子上游的 p53 結(jié)合區(qū)
        4.3 hIno80 復(fù)合物對(duì) p21 基因的調(diào)控方式是 p53 蛋白依賴型的
        4.4 hIno80 復(fù)合物富集于 p21 啟動(dòng)子上游需要 p53 的參與
    第五節(jié) 本章小結(jié)
第四章 hIno80 復(fù)合物對(duì)染色體穩(wěn)定性的影響
    第一節(jié) 引言
    第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)試劑、抗體及其他材料
        2.3 細(xì)胞株
    第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2 基因敲低實(shí)驗(yàn)（Knockdown assay）
        3.3 免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)（Immunoflourescence，IF）
        3.4 染色結(jié)果的分析統(tǒng)計(jì)
    第四節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和分析
        4.1 hIno80 對(duì)細(xì)胞核形態(tài)的影響
        4.2 hIno80 對(duì)細(xì)胞質(zhì)分裂、紡錘體形成的影響
        4.3 hIno80 對(duì)中心粒形成的影響
    第五節(jié) 本章小結(jié)
第五章 hMOF 乙�；D(zhuǎn)移酶可成為潛在的癌癥診斷標(biāo)志物
    第一節(jié) 引言
    第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)所用試劑和抗體
        2.2 腫瘤樣本的收集
        2.3 提取組織細(xì)胞全部 RNA 及逆轉(zhuǎn)錄
        2.4 Real-Time PCR 法檢測(cè)組織內(nèi) mRNA 表達(dá)水平
        2.5 組織全細(xì)胞抽出物的制備及 western blot 實(shí)驗(yàn)
    第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和分析
        3.1 hMOF 基因在大腸癌組織中的表達(dá)
        3.2 hMOF 蛋白在大腸癌組織中的表達(dá)
        3.3 hMOF 的低表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性
    第四節(jié) 本章小結(jié)
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)歷
致謝



本文編號(hào)：3262712