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埃博拉病毒新型反向遺傳學(xué)系統(tǒng)的建立、分析及應(yīng)用

發(fā)布時間:2021-02-07 23:06
  埃博拉病毒(EBOV)是一種高致病性病原,可導(dǎo)致人類和其他靈長類高致死性的出血熱。歷史上最大的埃博拉暴發(fā)是2013到2016年發(fā)生在西非的流行,造成了將近30,000人感染,超過11,000人死亡。從2018年開始在剛果民主共和國(Democratic Republic of Congo、DRC)蔓延的疫情則導(dǎo)致了比西非暴發(fā)更高的病死率,盡管有超過30萬人接種了疫苗,但感染人數(shù)仍已超過3,400人,死亡病例超過2,200例。面對大型暴發(fā)的接連出現(xiàn)以及特效藥物的缺失,人們亟需對埃博拉病毒進(jìn)行更多更深入的研究。然而,埃博拉病毒的研究必需在生物安全四級(Biosafety Level 4、BSL-4)實驗室中進(jìn)行,導(dǎo)致研究進(jìn)度受到了嚴(yán)重限制。為了能在四級實驗室之外進(jìn)行研究,科學(xué)家建立了多種反向遺傳學(xué)系統(tǒng)來模擬病毒生活周期的不同步驟,其中包括迷你基因組(Minigenome、MG)系統(tǒng)以及能夠被轉(zhuǎn)錄和復(fù)制的病毒樣顆粒(transcription-and replication-competent virus-like particle、trVLP)系統(tǒng)。但是,現(xiàn)有的反向遺傳學(xué)系統(tǒng)都依賴于多種質(zhì)... 

【文章來源】:中國科學(xué)院大學(xué)(中國科學(xué)院上海巴斯德研究所)上海市

【文章頁數(shù)】:100 頁

【學(xué)位級別】:博士

【部分圖文】:

埃博拉病毒新型反向遺傳學(xué)系統(tǒng)的建立、分析及應(yīng)用


圖1.2?EBOV反向遺傳學(xué)系統(tǒng)??病續(xù)全長RNA以cDNA質(zhì)粒形式提供(rgZ),本身沒有感染性,可以在生物安全1級或??2級實驗觀中操作

埃博拉病毒新型反向遺傳學(xué)系統(tǒng)的建立、分析及應(yīng)用


圖2.1A、B)

流程圖,細(xì)胞,蛋白,流程


>\Huh7-4R?-??B?c?丄??130kDa-??NP?^??34kDaJ ̄?VP35? ̄ ̄—??34kDa-?VP30?500bp-????43kDa-_^^^?Actin??D?E??}:|?廣?s::廣\??3????3-U ̄. ̄, ̄, ̄, ̄, ̄, ̄n-??2?4?6?81012?24?4872?96?1?2?3?4?7?11?15?19??Hours?post-transfection?Days?post-transfection??圖2.2?Huh7-4P細(xì)胞可以髙效支持MG的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄??CA)制備能表達(dá)NP、VP35、VP30以及L蛋白的Huh7-4P細(xì)胞的流程屈。CB)通過免疫印??跡襝測NP、VP35以及VP30蛋白的表逢;義y?(C)通過戾轉(zhuǎn):錄PCR檢測L蛋白.mRNA的奢達(dá)??水平s?CD、E)轉(zhuǎn)染了MGvRNA的Huh7-4P細(xì)胞橋參上辨中的GLuc活f生,??Figure?2.2?Huh7-4P?cells?efficiently?support?minigenome?replication?and?transcription??(A)?The?protocol?to?construct?Huh7-4P?cells?stably?expressing?NP,?VP35,?VP30,?and?L?proteins.??(B)?Western?blot?analysis?of?NP,?VP35,?and?VP30?proteins.?(C)?RT-PCR?analysis?of?L?gene??mRNA?expression.?(D?and?E)?GLuc?acti


本文編號:3022964

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