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擬南芥C2H2型鋅指蛋白ZFP5同源基因ZFP3、ZFP1和ZFP7的克隆及功能驗(yàn)證

發(fā)布時(shí)間:2021-02-06 04:22
  擬南芥表皮毛細(xì)胞是研究植物細(xì)胞發(fā)育的模式系統(tǒng),近年來關(guān)于擬南芥表皮毛調(diào)控機(jī)制的研究已取得很大進(jìn)展,但是對于表皮毛發(fā)育過程中關(guān)鍵調(diào)控基因的研究仍需進(jìn)一步探究。表皮毛覆蓋于植物表面,可以減少水分和熱量的散失,抵御干旱、高溫、紫外等不良外界環(huán)境影響。表皮毛的代謝產(chǎn)物不僅可以作為驅(qū)逐劑驅(qū)逐昆蟲,還可廣泛應(yīng)用于化妝品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。而且現(xiàn)有研究結(jié)果表明擬南芥表皮毛發(fā)育的機(jī)制與棉花纖維細(xì)胞等作物細(xì)胞生長發(fā)育機(jī)制有相似之處,因此對于擬南芥表皮毛細(xì)胞的研究,為棉花纖維細(xì)胞等的研究提供了重要理論基礎(chǔ)。非生物脅迫是影響全球糧食作物產(chǎn)量的重要因素,對植物抗逆性的研究為解決糧食問題提供了重要的理論依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)室之前的研究顯示ZINC FINGER PROTEIN5基因調(diào)控?cái)M南芥花序主莖上的表皮毛引發(fā),對赤霉素信號(hào)作出響應(yīng),同時(shí)它還作用于GLABROUS INFLORESCENCESTEMS(GIS)、GLABROUS INFLORESCENCE STEMS 2(GIS2)、ZINC FINGER PROTEIN(ZFP8)和表皮毛引發(fā)復(fù)合物的上游,并通過直接調(diào)控ZFP8的表達(dá)來調(diào)節(jié)表皮毛發(fā)育。因此,本研究克隆了... 

【文章來源】:浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】:140 頁

【學(xué)位級(jí)別】:博士

【文章目錄】:
致謝
摘要
Abstract
縮略詞
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 擬南芥表皮毛發(fā)育
        1.1 擬南芥表皮毛發(fā)育的不同階段
        1.2 影響擬南芥表皮毛發(fā)育的基因
        1.3 表皮毛細(xì)胞命運(yùn)決定的理論模型
        1.4 植物激素調(diào)控表皮毛發(fā)育
        1.5 microRNA調(diào)控表皮毛發(fā)育
        1.6 泛素/26S蛋白酶體系統(tǒng)調(diào)控表皮毛的發(fā)育
        1.7 表皮毛與環(huán)境脅迫
    2 植物鹽脅迫
        2.1 植物鹽耐性方面
        2.2 擬南芥模型
    3 C2H2型鋅指蛋白
        3.1 鋅指蛋白的分類
        3.2 C2H2型鋅指蛋白結(jié)構(gòu)特征
        3.3 C2H2型鋅指蛋白的功能
    4 本研究的目的意義
第二章 擬南芥鋅指蛋白基因ZFP3 (At5g25160)調(diào)控表皮毛形成和非生物脅迫的分子機(jī)制
    1 材料與方法
        1.1 植物材料與生長條件
        1.2 突變體鑒定
        1.3 基因克隆與載體構(gòu)建
        1.4 擬南芥花序浸染轉(zhuǎn)基因
        1.5 細(xì)胞分裂素處理實(shí)驗(yàn)
        1.6 脅迫處理
        1.7 熒光定量PCR
        1.8 葉綠素含量測定
        1.9 脯氨酸含量測定
        1.10 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 ZFP3影響表皮毛的產(chǎn)生
        2.2 ZFP3能通過細(xì)胞分裂素調(diào)控主莖上表皮毛形成
        2.3 ZFP3作用于表皮毛引發(fā)復(fù)合物的上游
        2.4 ZFP3影響植物的鹽脅迫和滲透脅迫
        2.5 ZFP3的表達(dá)受到鹽脅迫和滲透脅迫的誘導(dǎo)
        2.6 ZFP3在鹽脅迫和滲透脅迫下影響脯氨酸生物合成和葉綠素含量
        2.7 逆境相關(guān)基因在突變體和過表達(dá)株系中的表達(dá)水平
        2.8 ZFP3在不同器官中的表達(dá)
    3 討論
第三章 擬南芥鋅指蛋白基因ZFP1(At1g80730)調(diào)控表皮毛形成的分子機(jī)制
    1 材料與方法
        1.1 植物材料與生長條件
        1.2 突變體鑒定
        1.3 基因克隆與載體構(gòu)建
        1.4 細(xì)胞分裂素處理實(shí)驗(yàn)
        1.5 熒光定量PCR
        1.6 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 ZFP1影響表皮毛的產(chǎn)生
        2.2 ZFP1通過細(xì)胞分裂素調(diào)控表皮毛的形成
        2.3 ZFP1作用在表皮毛形成關(guān)鍵復(fù)合物上游
        2.4 ZFP1在不同器官中的表達(dá)
    3 討論
第四章 擬南芥鋅指蛋白基因ZFP7(At1g24625)調(diào)控表皮毛形成和非生物脅迫
    1 材料與方法
        1.1 植物材料與生長條件
        1.2 突變體鑒定
        1.3 基因克隆與載體構(gòu)建
        1.4 熒光定量PCR
        1.5 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 ZFP7影響表皮毛的產(chǎn)生
        2.2 ZFP7通過細(xì)胞分裂素調(diào)控表皮毛發(fā)育
        2.3 ZFP7影響擬南芥的鹽脅迫和滲透脅迫
        2.4 ZFP7在不同器官中的表達(dá)
    3 討論
第五章 擬南芥GIS3 (At1g68360)基因調(diào)控表皮毛形成的分子機(jī)理驗(yàn)證
    1 材料與方法
        1.1 植物材料與生長條件
        1.2 基因克隆與載體構(gòu)建
        1.3 GUS染色
        1.4 煙草瞬時(shí)表達(dá)
        1.5 染色體免疫共沉淀
        1.6 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 GIS3的表達(dá)受赤霉素和細(xì)胞分裂素信號(hào)的誘導(dǎo)
        2.2 GIS和GIS2是GIS3的靶基因
        2.3 GIS3蛋白的亞細(xì)胞定位
    3 討論
第六章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
附錄 論文中涉及的引物序列
作者簡介
攻讀博士學(xué)位期間取得的科研成果


【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]SQUAMOSA Promoter-Binding Protein-Like Transcription Factors:Star Players for Plant Growth and Development[J]. Xiaobo Chen,Zenglin Zhang,Danmei Liu,Kai Zhang,Aili Li and Long Mao National Key Facility for Crop Gene Resources and Genetic Improvement (NFCRI),MOA Key Laboratory of Crop Germplasm & Biotechnology,Institute of Crop Science,Chinese Academy of Agricultural Sciences (CAAS),Beijing 100081,China.  Journal of Integrative Plant Biology. 2010(11)



本文編號(hào):3020142

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