本文關(guān)鍵詞：酵母端粒酶延伸端粒DNA分子機(jī)制的研究　出處：《西北農(nóng)林科技大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 逆轉(zhuǎn)錄酶 端粒酶 RNA亞基 Pif1解旋酶 外切酶

【摘要】：端粒酶是由一種蛋白質(zhì)逆轉(zhuǎn)錄酶(TERT)和一個RNA亞基(TR)組成的,是一種特殊的逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)來維持真核細(xì)胞染色體兩端的端粒重復(fù)序列添加串聯(lián)。端粒酶一個典型的特點(diǎn)區(qū)別于其他的逆轉(zhuǎn)錄酶RT是其精確和重復(fù)復(fù)制指定區(qū)域的RNA亞基的能力。以前的研究已經(jīng)表明,RNA模板上游的某個不固定區(qū)域決定著模板的邊界。在這項(xiàng)研究中我們利用高度純度化的假絲酵母TERT與端粒RNA在體外重新組裝成有功能的大分子復(fù)合體。令人驚訝的是我們發(fā)現(xiàn)這個重組端粒酶顯示出幾個意想不到的性質(zhì)。首先作為一種有逆轉(zhuǎn)錄功能的酶只需要端粒RNA模板區(qū)域,它不需要端粒RNA其它二級結(jié)構(gòu)和序列的支持。第二,DNA合成受到鑲嵌在端粒RNA模板區(qū)兩個固定核酸的調(diào)控,即延伸信號停止在rC~(261)-rC~(262)兩個核苷酸之前。第三,一旦端粒DNA的延伸超過rC~(261)-rC~(262)兩個核苷酸,會啟動一個打開RNA徑環(huán)的過程。最后更令我們驚訝的是假絲酵母TERT能夠用非TER-RNA模板來調(diào)節(jié)非端粒DNA的延伸,因此我們發(fā)現(xiàn)假絲酵母TERT具有一個典型的逆轉(zhuǎn)錄酶的功能。本研究中的假絲酵母端粒RNA的重復(fù)序列有23個堿基,不像哺乳類端粒酶只有6個重復(fù)堿基。那么端粒酶在啟動第二輪延伸時,23個已經(jīng)配對的堿基是如何被打開也是我們關(guān)心的重要問題,有文獻(xiàn)報導(dǎo)假絲酵母Pif1在撞擊端粒酶然后行使解旋酶的功能,從而進(jìn)行第二輪延伸,我們在研究中意外的發(fā)現(xiàn)假絲酵母Pif1(Capif1)具有3’-5’外切的活力。最近的研究中頻繁的發(fā)現(xiàn)聚合酶,解旋酶具有3'-5'外切酶的活力,研究中我們分析了Pif1家族從細(xì)菌到人類的基因序列,發(fā)現(xiàn)一些序列保守的物種不但具有解旋活力還具有外切活力。而這個外切活力的序列不與解旋的活力中心在同一區(qū)域,各自執(zhí)行著不同的功能。我們通過突變兩個保守金屬結(jié)合位點(diǎn),使酸性氨基酸“E”突變成中性的氨基酸“A”后,CaPif1的外切活力基本喪失,這使得我們更加確定CaPif1不僅有解旋酶的功能,同時還具有外切酶的能力。同時我們根據(jù)同源序列的比較又找出8個物種的Pif1蛋白,發(fā)現(xiàn)其中細(xì)菌(BsPif1),人(hPif1),熱帶假絲酵母(CtPif1),啤酒酵母(ScPif1)(極弱),并沒有外切酶活力。而熱帶念珠菌(MgPif1),范氏酵母(VpPif1)和杜氏假絲酵母(Cd Pif1).展現(xiàn)出了外切酶活力。新活力的發(fā)現(xiàn)讓我們從新考慮Pif1在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮的作用,切除掉端粒酶在聚合中出現(xiàn)的錯配堿,或者端粒末端形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)以保護(hù)端粒DNA被切除等。以上這些新的發(fā)現(xiàn)為研究端粒酶聚合并修正錯配的DNA分子時的作用機(jī)制提供了新的見解。
[Abstract]:In this study , we found that the recombinant telomerase reverse transcriptase ( RT ) is a special reverse transcriptase ( RT ) . It is a special reverse transcriptase ( RT ) to maintain the ability of RNA subunits in the designated region of eukaryotic cells . These new findings provide new insights into the mechanism of telomerase polymerization and the modification of mismatched DNA molecules .

【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：Q78

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 徐耀忠;Thiobase DNA: the chemistry and some applications in cancer studies[J];Progress in Natural Science;2000年06期

2 傅衍 ,牛冬 ,阮暉 ,陳海燕;COMPARISON OF DIFFERENT ENZYMES AND PROBES AND THEIR COMBINATIONS IN DNA FINGERPRINTING[J];Journal of Zhejiang University Science;2001年04期

3 安小惠 ,王一理 ,來寶長 ,耿一萍 ,司履生;CONSTRUCTION OF HUMAN INTERLUEKIN-18 DNA VACCINE AND IT'S EXPRESSION IN MAMMALIAN CELLS[J];Journal of Xi'an Medical University;2001年02期

4 張鵬 ,孟繼本 ,龍江 ,松浦輝男 ,王永梅;Synthesis of Benzo [α]phenoxazin-5-one Derivatives and Their Interactions with DNA[J];Chinese Journal of Chemistry;2002年05期

5 ;DIFFERENT RESULTS BY DIFFERENT COMMERCIAL TAQ DNA POLYMERASE IN RAPD[J];四川動物;2002年02期

6 ;Genetic Diversity of Three Aristichthys nobilis Populations and One Inbreeding Stock[J];Wuhan University Journal of Natural Sciences;2002年02期

7 強(qiáng)曉藝;DNA計(jì)算的應(yīng)用與展望[J];西安聯(lián)合大學(xué)學(xué)報;2002年02期

8 王軍陽,范桂香,勝利,袁育康;THE CONSTRUCTION AND PRELIMINARY APPRAISEMENT OF HSV-2 gD GENE DNA VACCINE[J];Academic Journal of Xi'an Jiaotong University;2002年02期

9 董菁 ,成軍 ,王勤環(huán) ,施雙雙 ,王剛 ,斯崇文;CLONING AND ANALYSIS OF THE GENOMIC DNA SEQUENCE OF AUGMENTER OF LIVERR EGENERATION FROM RAT[J];Chinese Medical Sciences Journal;2002年02期

10 謝傳曉;Evidence for Base Substitutions and Repair of DNA Mismatch Damage Induced by Low Energy N~+ Ion Beam Implantation in E. coli[J];High Technology Letters;2003年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 Michael J.Siefkes;Cory O.Brant;Ronald B.Walter;;A novel real-time XL-PCR for DNA damage detection[A];漁業(yè)科技創(chuàng)新與發(fā)展方式轉(zhuǎn)變——2011年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

2 ;Hormonal Regulation and Tumorigenic Role of DNA Methyltransferase[A];2011中國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議暨浙江省計(jì)劃生育與生殖醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會暨生殖健康講習(xí)班論文匯編[C];2011年

3 Dongmei Zhao;Fan Jin;Yuli Qian;Hefeng Huang;;Expression patterns of Dnmtl and Dnmt3b in preimplantational mouse embryos and effects of in-vitro cultures on their expression[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議婦科內(nèi)分泌會場（婦科內(nèi)分泌學(xué)組、絕經(jīng)學(xué)組、計(jì)劃生育學(xué)組）論文匯編[C];2012年

4 姜東成;蔣稼歡;楊力;蔡紹皙;K.-L.Paul Sung;;在聚吡咯微點(diǎn)致動下的DNA雜交行為[A];2008年全國生物流變學(xué)與生物力學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2008年

5 白明慧;翁小成;周翔;;聯(lián)鄰苯二酚類小分子作為DNA交聯(lián)劑的研究[A];第六屆全國化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

6 張曄;杜智;楊斌;高英堂;;檢測外周血中游離DNA的應(yīng)用前景(綜述)[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第29屆學(xué)術(shù)年會暨首屆生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會論文集[C];2009年

7 周紅;鄭江;王良喜;丁國富;魯永玲;潘文東;羅平;肖光夏;;CpG DNA誘導(dǎo)全身炎癥反應(yīng)綜合征的作用及其機(jī)制研究[A];全國燒傷創(chuàng)面處理、感染專題研討會論文匯編[C];2004年

8 ;EFFECTS OF Ku70-DEFICIENT ON ARSENITE-INDUCED DNA DOUBLE STRAND BREAKS, CHROMOSOMAL ALTERATIONS AND CELL CYCLE ARREST[A];海峽兩岸第三屆毒理學(xué)研討會論文摘要[C];2005年

9 李經(jīng)建;冀中華;蔡生民;;小溝結(jié)合方式中的DNA媒介電荷轉(zhuǎn)移[A];第十三次全國電化學(xué)會議論文摘要集（下集）[C];2005年

10 ;The interaction between Levofloxacine Hydrochloride and DNA mediated by Cu~(2+)[A];湖北省化學(xué)化工學(xué)會2006年年會暨循環(huán)經(jīng)濟(jì)專家論壇論文集[C];2006年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 本報記者 袁滿;平安：把“領(lǐng)先”作為DNA[N];經(jīng)濟(jì)觀察報;2006年

2 舒放;編織一個DNA納米桶[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2006年

3 閆潔;英兩無罪公民起訴要求銷毀DNA記錄[N];新華每日電訊;2008年

4 何德功;日本制成診斷魚病的“DNA書”[N];農(nóng)民日報;2004年

5 本報記者 張巍巍;DNA樣本也能作假[N];科技日報;2009年

6 周斌偉　鄒巍;蘇州警方應(yīng)用DNA技術(shù)一年偵破案件1887起[N];人民公安報;2011年

7 本報記者 楊天笑;揭秘“神探”DNA[N];蘇州日報;2011年

8 第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室教授 李福洋;破除法老DNA的咒語[N];東方早報;2011年

9 常麗君;DNA電路可檢測導(dǎo)致疾病的基因損傷[N];科技日報;2012年

10 常麗君;效率和質(zhì)量：“DNA制造業(yè)”兩大障礙被攻克[N];科技日報;2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 唐陽;基于質(zhì)譜技術(shù)的基因組DNA甲基化及其氧化衍生物分析[D];武漢大學(xué);2014年

2 池晴佳;DNA動力學(xué)與彈性性質(zhì)研究[D];重慶大學(xué);2015年

3 胡璐璐;哺乳動物DNA去甲基化過程關(guān)鍵酶TET2的三維結(jié)構(gòu)與P暬蒲芯縖D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 馬寅洲;基于滾環(huán)擴(kuò)增的DNA自組裝技術(shù)的研究[D];南京大學(xué);2014年

5 黃學(xué)鋒;精子DNA碎片的臨床意義：臨床和實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

6 隋江東;APE1促進(jìn)DNA-PKcs介導(dǎo)hnRNPA1磷酸化及其在有絲分裂期端粒保護(hù)中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 劉松柏;結(jié)構(gòu)特異性核酸酶FEN1在DNA復(fù)制及細(xì)胞周期過程中的功能性研究[D];浙江大學(xué);2015年

8 王璐;哺乳動物中親本DNA甲基化的重編程與繼承[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2015年

9 齊文靖;染色質(zhì)改構(gòu)蛋白BRG1在DNA雙鏈斷裂修復(fù)中的作用及機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

10 龍湍;水稻T-DNA插入突變?nèi)后w側(cè)翼序列的分離分析和OsaTRZ2的克隆與功能鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李婷婷;小鼠DNA模式識別重要受體的分子結(jié)構(gòu)特征及其功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 劉瑞斯;抗癌藥物奧沙利鉑與DNA相互作用的原子力顯微鏡觀察研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

3 熊忠;芳香二肽與一價金屬離子間相互作用及DNA切割活性的研究[D];鄭州大學(xué);2015年

4 王天帥;含DNA嵌入基團(tuán)的新型手性雙核鉑配合物的制備及抗腫瘤生物活性研究[D];昆明理工大學(xué);2015年

5 艾曉璐;線粒體DNA D-loop基因多態(tài)性與慢性腎臟病發(fā)病風(fēng)險關(guān)系的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 楊培;石斛、北豆根、肉桂的DNA條形碼鑒定及鐵皮石斛葉綠體基因組研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

7 張小波;基于SNPs標(biāo)記的豬肉DNA溯源研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

8 胡翔宇;五唇蘭居群遺傳結(jié)構(gòu)研究[D];海南大學(xué);2014年

9 黃曉蘋;多苯并咪唑鈷配合物-DNA凝聚體細(xì)胞攝取途徑的研究[D];華中師范大學(xué);2014年

10 李雪;核酸對銅鋅超氧化物歧化酶聚集的調(diào)控作用[D];華中師范大學(xué);2014年

，

本文編號：1392303