本文關(guān)鍵詞：擬南芥葉綠體PPR蛋白AtECB2參與RNA編輯的機(jī)理研究　出處：《華東師范大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：高等植物細(xì)胞器中RNA編輯是轉(zhuǎn)錄后加工的一種,其主要是將RNA上特定位點(diǎn)的胞嘧啶C轉(zhuǎn)換成尿哺啶U。RNA編輯過(guò)程需要PPR家族蛋白和MORF蛋白的共同參與。擬南芥PPR蛋白AtECB2能夠影響6個(gè)葉綠體基因(accD、 ndhF、ndhG、petL、rpoA以及rpoC1)轉(zhuǎn)錄本的編輯,但是其中的分子機(jī)理仍然是不清楚的。本論文中,我們創(chuàng)建了AtECB2融合4xMYC標(biāo)簽的轉(zhuǎn)基因互補(bǔ)植株。以此為材料,RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(Rip)實(shí)驗(yàn)表明AtECB2蛋白能夠顯著富集accD、ndhF、ndhG以及petL基因的轉(zhuǎn)錄本,說(shuō)明AtECB2蛋白很可能結(jié)合到這些質(zhì)體基因的轉(zhuǎn)錄本上參與RNA編輯過(guò)程。同時(shí),我們利用特異的MYC抗體對(duì)AtECB2-4xMYC重組蛋白進(jìn)行體內(nèi)免疫共沉淀(Co-IP)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示AtECB2蛋白與MORF蛋白中的MORF2以及葉綠素合成途徑中的膽色素原脫氨酶HEMC能夠共沉淀,提示這些蛋白可能參與AtECB2相關(guān)的編輯過(guò)程。酵母雙雜交結(jié)果表明AtECB2蛋白的E結(jié)構(gòu)域與HEMC蛋白有直接的相互作用,而HEMC又與MORF8有直接互作。已報(bào)道MORF2與MORF8蛋白能夠相互作用。遺傳分析表明,HEMC缺失的T-DNA敲除突變體hemc-1呈現(xiàn)白化致死的表型。該突變體中葉綠體基因轉(zhuǎn)錄本編輯效率較野生型的相比顯著下降。這些結(jié)果表明AtECB2蛋白很可能通過(guò)HEMC與MORF蛋白偶聯(lián)起來(lái)共同參與葉綠體轉(zhuǎn)錄本的RNA編輯過(guò)程。免疫印跡表明,AtECB2和MORF8主要定位在類囊體膜上。BN-PAGE結(jié)果表明,AtECB2主要存在于440-669kD左右復(fù)合物中,而MORF8蛋白存在于440kDa以上的復(fù)合物中。因此,MORF8蛋白很可能存在于AtECB2所在的復(fù)合物中。這些工作不僅揭示了AtECB2參與RNA編輯的機(jī)制,也有助于人們對(duì)于質(zhì)體RNA編輯體(editosome)的深入理解。
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：Q943.2

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