膠類中藥是動物類中藥的重要組成,其中阿膠（Colla Corii Asini,CCA）的生產(chǎn)規(guī)模和市場銷量都處于領(lǐng)先。CCA的藥理作用主要為改善代謝平衡、滋陰補(bǔ)血和調(diào)節(jié)免疫功能。CCA中的生物大分子主要為蛋白質(zhì)和糖胺聚糖（Glycosaminoglycan,GAG）,目前對于CCA的研究還不夠全面,因此本論文的第一個(gè)目標(biāo)是研究CCA中生物大分子的結(jié)構(gòu),研究皮樣和膠樣中蛋白及糖胺聚糖的組成,建立相關(guān)的質(zhì)譜分析方法。GAG與蛋白的相互作用在生物體內(nèi)發(fā)揮重要功能。在CCA研究中我們對蛋白序列和GAG糖單元進(jìn)行了分析,但GAG和蛋白的相互作用研究需要更復(fù)雜的質(zhì)譜分析方法和其它新的技術(shù)。通過CCA建立的質(zhì)譜分析方法可對蛋白和GAG進(jìn)行初步的分析,而對于復(fù)雜的糖蛋白混合物的序列長度、糖基化種類、糖鏈、糖基化位點(diǎn)的定性及定量還需要在其基礎(chǔ)上進(jìn)一步的方法開發(fā)。因此本文的剩余篇幅聚焦于復(fù)雜度更高的糖蛋白異型體的分析方法開發(fā)以及結(jié)合生物膜干涉技術(shù)（Bio-layer Interferometry,BLI）和親和柱技術(shù)的GAG與趨化因子的相互作用研究。GAG與趨化因子的相互作用與多種生理病理過程相關(guān),我們選... 

【文章頁數(shù)】：147 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
縮略符號說明
第一章 緒論
    1.1 膠原蛋白及其降解物
        1.1.1 膠原蛋白類型與分子結(jié)構(gòu)
        1.1.2 膠原蛋白降解物
        1.1.3 膠原蛋白的傳統(tǒng)鑒定方法
    1.2 糖胺聚糖的種類及功能
        1.2.1 肝素及硫酸乙酰肝素
        1.2.2 硫酸軟骨素和硫酸皮膚素
        1.2.3 透明質(zhì)酸
        1.2.4 硫酸角質(zhì)素
    1.3 趨化因子的結(jié)構(gòu)及生理作用
        1.3.1 CCL5的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        1.3.2 CCL5的生理作用
    1.4 糖基化修飾的種類及功能
        1.4.1 N-連接糖基化
        1.4.2 O-GalNAc糖基化
        1.4.3 O-GlcNAc糖基化
        1.4.4 磷酸化糖基修飾
        1.4.5 C-甘露糖基化
        1.4.6 糖基化磷脂酰肌醇錨定
    1.5 現(xiàn)代質(zhì)譜分析技術(shù)
        1.5.1 生物質(zhì)譜儀
        1.5.2 質(zhì)譜的碎裂方式
    1.6 蛋白質(zhì)與糖胺聚糖的質(zhì)譜分析策略
        1.6.1 蛋白質(zhì)的質(zhì)譜分析策略
        1.6.2 糖胺聚糖的質(zhì)譜分析策略
    1.7 糖胺聚糖與蛋白的相互作用
    1.8 論文大綱
第二章 阿膠中膠原蛋白成分的鑒定
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 試劑與耗材
        2.2.2 主要儀器
        2.2.3 色譜柱
        2.2.4 緩沖液及流動相的配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 動物皮樣處理
        2.3.2 膠樣產(chǎn)品處理
        2.3.3 蛋白酶解
        2.3.4 NanoLC-MS/MS分析
        2.3.5 生物信息學(xué)分析
        2.3.6 數(shù)據(jù)庫搜索
        2.3.7 LC-MRM-MS/MS分析
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 鳥槍法蛋白組學(xué)
        2.4.2 生物信息學(xué)
        2.4.3 挑選每個(gè)物種的特征肽
        2.4.4 特征肽的MRM定量方法研究
        2.4.5 摻假阿膠產(chǎn)品的檢測
        2.4.6 摻假雜交動物皮的阿膠的鑒定
    2.5 本章小結(jié)
第三章 阿膠制作中糖胺聚糖的變化
    3.1 引言
    3.2 試劑與耗材
        3.2.1 試劑與耗材
        3.2.2 主要儀器
        3.2.3 色譜柱
        3.2.4 緩沖液及流動相的配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 糖胺聚糖的提取
        3.3.2 糖胺聚糖的酶解及AMAC標(biāo)記
        3.3.3 LC-MRM-MS/MS分析
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 糖胺聚糖的結(jié)構(gòu)表征和含量測定
    3.5 本章小結(jié)
第四章 人血漿中天然CCL5的鑒定
    4.1 引言
    4.2 藥品與試劑
        4.2.1 試劑與耗材
        4.2.2 主要儀器
        4.2.3 色譜柱
        4.2.4 緩沖液及流動相的配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 CCL5多抗偶聯(lián)瓊脂糖珠的制備
        4.3.2 CCL5的純化
        4.3.3 野豌豆凝集素親和柱的制備
        4.3.4 CCL5的糖肽富集
        4.3.5 蛋白酶解
        4.3.6 質(zhì)譜分析
        4.3.7 數(shù)據(jù)庫搜索
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 血漿制備
        4.4.2 天然CCL5的存在形式
        4.4.3 CCL5的糖基化形式
    4.5 本章小結(jié)
第五章 CCL5異型體混合物的定性及定量研究
    5.1 引言
    5.2 藥品與試劑
        5.2.1 試劑與耗材
        5.2.2 主要儀器
        5.2.3 色譜柱
        5.2.4 緩沖液及流動相的配制
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 CCL5異型體混合物的酶解
        5.3.2 CCL5異型體混合物的質(zhì)譜分析
        5.3.3 CCL5混合物的定量方法摸索
        5.3.4 數(shù)據(jù)處理
    5.4 結(jié)果與討論
        5.4.1 CCL5糖基化異型體的合成
        5.4.2 CCL5碎裂方式選擇
        5.4.3 HCD和ETD鑒定CCL5
        5.4.4 CCL5定量方法應(yīng)用
    5.5 本章小結(jié)
第六章 CCL5與肝素相互作用研究
    6.1 引言
    6.2 藥品與試劑
        6.2.1 試劑與耗材
        6.2.2 主要儀器
        6.2.3 色譜柱
        6.2.4 緩沖液及流動相的配制
    6.3 實(shí)驗(yàn)方法
        6.3.1 BLI測定
        6.3.2 分子對接模擬
        6.3.3 CCL5混合物過肝素親和柱
        6.3.4 洗脫樣品的定量質(zhì)譜分析
        6.3.5 數(shù)據(jù)處理
    6.4 結(jié)果與討論
        6.4.1 CCL5個(gè)體與肝素的相互作用
        6.4.2 分子對接模擬
        6.4.3 CCL5混合物與肝素的相互作用
    6.5 本章小結(jié)
全文總結(jié)
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及申請的專利
學(xué)位論文評閱及答辯情況表



本文編號：3660755