本文關鍵詞：膠束溶劑堆積在線富集—毛細管電泳法在中藥材成分分析中的應用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：中藥材是我國重要的農(nóng)產(chǎn)品之一。中藥材的發(fā)展是幾千年來中華民族智慧的結晶,為人類的健康做出了巨大的貢獻。目前我國對中藥材的質量標準常常僅限于鑒別外觀、性狀檢查,很少對其中的有效成分進行檢測。因此,中藥材的質量控制成為其走向現(xiàn)代化和國際化的瓶頸。對于中藥材中活性成分的定量分析,毛細管電泳法(CE)是較為常用的方法。CE具有分離效率高、分析速度快、樣品用量少、應用范圍廣等優(yōu)點,是分離科學中研究最為活躍的領域之一。但由于其靈敏度較低,從而限制了其在痕量物質分析中的應用,所以提高CE檢測的靈敏度一直是人們密切關注的課題。采用在線富集技術是解決CE檢測靈敏度低的一個簡單且行之有效的途徑。膠束溶劑堆積(MSS),是一種新型毛細管電泳在線富集技術,它能夠應用于多種毛細管電泳分離模式,且能和其它在線富集技術聯(lián)用。在系統(tǒng)查閱大量相關文獻資料的基礎上,進行了以下研究工作:(1)應用推掃和MSS兩種在線富集技術,在毛細管區(qū)帶電泳(CZE)模式下,建立了中藥材中有機酸的測定新方法。本試驗探討了MSS對有機陰離子的富集過程。對富集和分離的影響因素進行了優(yōu)化。最終確定最優(yōu)條件為:BGS為50 mmol/L乙酸銨(p H 12.0)中含有50%甲醇(v/v);膠束溶液為12 mmol/L十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)和20 mmol/L乙酸銨混合溶液;樣品基質為20 mmol/L乙酸銨;分離電壓為-20 k V;在最優(yōu)條件下,測定了當歸和胡黃連兩種中藥材的香草酸、阿魏酸和肉桂酸的含量,加標回收率在80.8%~119.6%之間。檢出限(S/N=3)為0.03~0.06μg/m L。富集倍率為42倍至77倍。本方法準確、可靠,靈敏度得到提高,適合中藥材中有機酸含量的分析測定。(2)建立了推掃-MSS-CZE法測定中藥中士的寧和馬錢子堿兩種生物堿的新方法。本實驗探索了富集的機理,對影響分離和富集效率的因素進行了優(yōu)化。BGS為75 mmol/L磷酸(p H 2.5)和30%甲醇(v/v)混合溶液。檢測波長為203 nm。結果表明,士的寧和馬錢子堿在(0.1~5)μg/m L線性關系良好,線性相關系數(shù)分別為0.9998和0.9997,檢出限(S/N=3)均低至0.01μg/m L,與常規(guī)CZE方法相比分別富集了51和38倍,二者加標回收率均在94.2%~105.4%之間。本方法分析時間短、靈敏度高、操作簡單、對環(huán)境污染小,適合中藥中士的寧和馬錢子堿的檢測。(3)應用推掃-MSS兩種毛細管在線富集技術,建立了喹諾里西啶類生物堿(槐果堿、苦參堿和氧化苦參堿)的測定新方法。對分離和富集的影響因素進行了優(yōu)化,最終確定最佳條件為:BGS為50 mmol/L乙酸銨(p H 8.5)中含有40%的甲醇(v/v);膠束溶液為15 mmol/L十二烷基硫酸鈉(SDS)和10 mmol/L乙酸銨(p H 2.0)的混合溶液;樣品基質為15 mmol/L乙酸銨(p H 2.0);0.5 psi下膠束溶液進樣30 s,之后再進90 s樣品;分離電壓為20 k V;檢測波長為200 nm。在最優(yōu)條件下,與常規(guī)CZE相比三種生物堿富集了42倍至52倍。在(0.1~10.0)μg/m L之間,槐果堿、苦參堿和氧化苦參堿線性關系良好,線性回歸系數(shù)為0.9992~0.9996,檢出限(S/N=3)為(0.02~0.03)μg/m L。日內(nèi)(n=8)和日間(n=5)精密度良好,相對標準偏差(RSDs)均低于9.5%。本方法準確可靠,中藥樣品中加標回收率為87.5%~109.0%。(4)本實驗將場放大進樣(FASI)和MSS兩種在線富集技術聯(lián)用,在毛細管區(qū)帶電泳分離模式下對人尿樣中三種中藥材活性成分(小檗堿、巴馬汀和藥根堿)進行了分離和測定�；惫麎A作為內(nèi)標物,對影響分離和富集效果的因素進行了優(yōu)化。最終確定條件為:背景緩沖溶液為75 mmol/L碳酸氫銨中含40%甲醇(v/v),膠束溶液為15 mmol/L碳酸氫銨和7 mmol/L的SDS混合溶液,樣品基質為40%的甲醇水溶液。分離電壓為20 k V;檢測波長為260 nm。在最優(yōu)條件下,此方法的富集倍率達到314倍至405倍。小檗堿,巴馬汀和藥根堿在(0.05~10.0)μg/m L范圍內(nèi)線性關系良好,線性相關系數(shù)為0.9992~0.9998。檢出限(S/N=3)為(5~10)ng/m L。本方法的日內(nèi)(n=6)和日間(n=4)精密度良好,RSDs均低于9.3%。實際尿樣的加標回收率在85.2%至105.5%之間。該法具有簡單快速、準確可靠、靈敏度高等優(yōu)點。(5)應用FASI和MSS兩步堆積,建立了人尿樣中兩種中藥活性成分(士的寧和馬錢子堿)的毛細管區(qū)帶電泳測定新方法。對影響分離和富集的因素進行了優(yōu)化,最終確定最優(yōu)條件為:BGS為75 mmol/L乙酸銨中含20%甲醇(v/v);膠束溶液為15 mmol/L SDS與30 mmol/L乙酸銨;樣品基質為60%甲醇水溶液;分離電壓為20 k V;該方法士的寧和馬錢子堿在(10~1000)ng/m L范圍內(nèi)線性關系良好,線性相關系數(shù)分別為0.9985和0.9945。與常規(guī)毛細管區(qū)帶電泳相比,本方法的富集倍率達1590倍至1638倍,士的寧和馬錢子堿的檢出限(S/N=3)低至2.5和4.0 ng/m L,靈敏度得到很大提高。本方法簡單、準確、可靠,適合應用于尿樣中生物堿的測定。(6)應用MSS毛細管電泳在線富集技術,建立了苯海拉明、氯苯那敏、異丙嗪的測定方法。本實驗對影響MSS富集效率的因素進行了優(yōu)化。背景緩沖溶液:30mmol/L磷酸二氫鈉(p H 7.5)和55%甲醇(v/v);樣品溶液:10 mmol/L SDS和10mmol/L磷酸二氫鈉(p H 2.5);0.5 psi下進樣60 s;檢測波長為200 nm。結果表明,苯海拉明、氯苯那敏、異丙嗪在0.6~60.0μg/m L濃度范圍內(nèi)線性關系良好,線性相關系數(shù)分別為0.9996、0.9996和0.9971,檢出限(S/N=3)分別低至0.1μg/m L、0.2μg/m L和0.2μg/m L。三者的加標回收率分別為92.5%~107.2%、89.7%~102.7%和100.7%~108.0%。日內(nèi)和日間精密度較好,RSDs均小于9.1%。與常規(guī)毛細管區(qū)帶電泳相比,本方法對三種待測物的富集倍數(shù)為43倍至111倍。本文方法快速、簡便、準確度好,彌補了毛細管電泳測定痕量組分的不足,為人體內(nèi)生物樣品中藥物的痕量分析提供了新的方法。
【關鍵詞】：膠束溶劑堆積 在線富集技術 毛細管電泳 生物樣品 中藥材
【學位授予單位】：河北農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：O657.8;R284
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 主要符號縮寫表10-16
• 1 引言16-31
• 1.1 場放大樣品堆積（FASS）17-18
• 1.2 場放大進樣堆積（FASI）18-19
• 1.3 推掃（Sweeping）19-20
• 1.4 大體積進樣堆積（LVSS）20-21
• 1.5 膠束溶劑堆積（MSS）21-29
• 1.5.1 MSS的操作模式21-25
• 1.5.2 MSS的基本原理和必要條件25-26
• 1.5.3 MSS的影響因素26
• 1.5.4 MSS的應用26-29
• 1.5.5 展望29
• 1.6 研究目的和研究內(nèi)容29-31
• 2 推掃-膠束溶劑堆積-毛細管區(qū)帶電泳法測定藥材中的有機酸31-44
• 2.1 實驗部分32-33
• 2.1.1 儀器和試劑32
• 2.1.2 電泳條件32-33
• 2.1.3 樣品的處理33
• 2.2 推掃-膠束溶劑堆積對有機陰離子的富集過程33-34
• 2.3 結果與討論34-42
• 2.3.1 BGS中有機溶劑的優(yōu)化34
• 2.3.2 BGS中NH4Ac濃度的優(yōu)化34-36
• 2.3.3 BGS pH的優(yōu)化36
• 2.3.4 膠束溶液組成的優(yōu)化36-37
• 2.3.5 樣品基質中NH4Ac的濃度的優(yōu)化37-38
• 2.3.6 進樣時間的優(yōu)化38-39
• 2.3.7 方法的線性范圍、檢出限、重現(xiàn)性和富集倍率39-41
• 2.3.8 中藥材樣品的測定和加標回收實驗41-42
• 2.4 結論42-44
• 3 推掃-膠束溶劑堆積毛細管電泳在線兩步堆積測定中藥中的士的寧和馬錢子堿44-53
• 3.1 實驗部分45-46
• 3.1.1 儀器及試劑45
• 3.1.2 電泳條件45
• 3.1.3 樣品的處理45-46
• 3.2 推掃-膠束溶劑堆積對有機陽離子的富集過程46-47
• 3.3 結果與討論47-52
• 3.3.1 BGS中磷酸濃度的優(yōu)化47-48
• 3.3.2 BGS中有機溶劑含量的優(yōu)化48
• 3.3.3 BGS的pH值的優(yōu)化48
• 3.3.4 膠束溶液的優(yōu)化48-49
• 3.3.5 樣品基質中磷酸濃度的優(yōu)化49
• 3.3.6 進樣條件的優(yōu)化49-50
• 3.3.7 兩步堆積富集效果50-51
• 3.3.8 線性范圍，，檢出限與重現(xiàn)性51
• 3.3.9 樣品分析和回收率的測定51-52
• 3.4 結論52-53
• 4 推掃-膠束溶劑堆積-毛細管電泳法測定苦參類生物堿53-64
• 4.1 實驗部分54-55
• 4.1.1 儀器及試劑54
• 4.1.2 電泳條件54
• 4.1.3 樣品的處理54-55
• 4.3 結果與討論55-62
• 4.3.1 BGS中甲醇含量的影響55-56
• 4.3.2 BGS中乙酸銨的濃度和pH值的影響56-57
• 4.3.3 膠束溶液中SDS和乙酸銨濃度的影響57-58
• 4.3.4 樣品基質中乙酸銨濃度和pH的優(yōu)化58-59
• 4.3.5 進樣條件的優(yōu)化59
• 4.3.6 方法的線性范圍、檢出限、重現(xiàn)性和富集倍率59-61
• 4.3.7 實際樣品的應用和回收率的測定61-62
• 4.4 結論62-64
• 5 場放大進樣-膠束溶劑堆積-毛細管區(qū)帶電泳法測定尿樣中異喹啉類生物堿64-77
• 5.1 實驗部分65-66
• 5.1.1 儀器與試劑65-66
• 5.1.2 電泳條件66
• 5.1.3 尿樣的處理66
• 5.2 FASI和MSS兩步堆積過程原理示意圖66-67
• 5.3 結果與討論67-76
• 5.3.1 BGS中碳酸氫銨濃度的優(yōu)化67
• 5.3.2 BGS中有機溶劑的優(yōu)化67-69
• 5.3.3 BGS的pH值的優(yōu)化69
• 5.3.4 膠束溶液中SDS濃度的優(yōu)化69-71
• 5.3.5 膠束溶液中碳酸氫銨濃度的優(yōu)化71
• 5.3.6 樣品基質中甲醇含量的優(yōu)化71-72
• 5.3.7 膠束溶液進樣條件的優(yōu)化72-73
• 5.3.8 電進樣條件的優(yōu)化73-74
• 5.3.9 萃取條件的優(yōu)化74
• 5.3.10 方法的線性范圍、重現(xiàn)性、檢出限和富集倍率74-75
• 5.3.11 尿樣分析和回收率的測定75-76
• 5.4 結論76-77
• 6 場放大進樣-膠束溶劑堆積-毛細管區(qū)帶電泳法測定尿樣中的馬錢子堿和士的寧 .. 6277-88
• 6.1 實驗部分77-78
• 6.1.1 儀器和試劑77-78
• 6.1.2 電泳條件78
• 6.1.3 尿樣的處理78
• 6.2 結果與討論78-86
• 6.2.1 BGS中甲醇含量的優(yōu)化78-79
• 6.2.2 BGS中乙酸銨濃度和pH值的優(yōu)化79-80
• 6.2.3 膠束溶液中SDS和乙酸銨濃度的優(yōu)化80-82
• 6.2.4 樣品基質中甲醇含量的優(yōu)化82
• 6.2.5 膠束溶液進樣條件的優(yōu)化82-83
• 6.2.6 場放大進樣條件的優(yōu)化83-84
• 6.2.7 方法的線性范圍、檢出限、重現(xiàn)性和富集倍率84-86
• 6.2.8 加標回收實驗86
• 6.3 結論86-88
• 7 膠束溶劑堆積-毛細管區(qū)帶電泳法測定人血漿中抗組胺類藥物88-98
• 7.1 實驗部分89-90
• 7.1.1 儀器及試劑89
• 7.1.2 電泳條件89
• 7.1.3 樣品的處理89-90
• 7.2 有機陽離子的MSS富集理論90
• 7.3 結果與討論90-97
• 7.3.1 BGS中甲醇含量的優(yōu)化90-92
• 7.3.2 BGS中磷酸二氫鈉濃度的優(yōu)化92
• 7.3.3 BGS的pH值的優(yōu)化92
• 7.3.4 樣品基質中SDS濃度的優(yōu)化92-93
• 7.3.5 進樣時間的影響93-94
• 7.3.6 線性范圍，檢出限，重現(xiàn)性和富集倍率94-96
• 7.3.7 樣品分析和回收率的測定96-97
• 7.4 結論97-98
• 8 結論98-99
• 參考文獻99-113
• 在讀期間發(fā)表論文113-114
• 作者簡歷114-115
• 致謝115-116

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 李利軍;蔡卓;李斯光;吳峰敏;李海燕;陳昌東;程昊;吳健玲;;場放大進樣-膠束掃集法測定升麻中3種有機酸[J];分析化學;2008年09期

2 ;Combination of hollow fiber-based liquid-phase microextraction with sweeping techniques in micellar electrokinetic chromatography for the determination of Strychnos alkaloids in human urine[J];Chinese Chemical Letters;2007年03期

3 ;RP-HPLC Determination and Pharmacokinetic Comparison of Cinnamic Acid in Rat Plasma After Administration of Di-Gu-Pi Decoction and Pure Cinnamic Acid[J];Chemical Research in Chinese Universities;2006年01期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳新;毛細管電泳在線富集方法研究及應用[D];江南大學;2013年

  本文關鍵詞：膠束溶劑堆積在線富集—毛細管電泳法在中藥材成分分析中的應用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：343465