硫酸化寡糖和多糖廣泛存在于自然界中,具有多種生物活性,如抗凝血、抗氧化、抗腫瘤、抗病毒、抗炎、抑菌和增強(qiáng)機(jī)體免疫等。但是硫酸化寡糖和多糖帶有大量的負(fù)電荷,極性強(qiáng),其分析檢測(cè)及制備較為困難。本文采用衍生化策略,以質(zhì)譜、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)為手段,詳細(xì)分析了酶降解得到的卡拉膠寡糖片段的結(jié)構(gòu),并系統(tǒng)比較了不同降解方法得到的卡拉膠寡糖的結(jié)構(gòu)和抗氧化活性；發(fā)展了多糖硫酸化位點(diǎn)測(cè)定的新方法,為研究硫酸化寡糖和多糖結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系奠定了基礎(chǔ)。本文得到了以下主要結(jié)果：1、系統(tǒng)研究了新型κ-卡拉膠酶的降解機(jī)制,并對(duì)其降解所得的硫酸化κ-卡拉膠寡糖產(chǎn)物的組成和結(jié)構(gòu)序列進(jìn)行了分析。從土壤桿菌Pedobacter hainanensis的培養(yǎng)液中分離純化得到了新型κ-卡拉膠酶。經(jīng)過SDS-PAGE檢測(cè)其分子量約為55 kDa,在最適條件下（pH 7.0,40℃）其最高相對(duì)酶活力為700.53 units/mg。用該酶降解κ-卡拉膠,所得的產(chǎn)物用TLC和HPLC分析,結(jié)果表明,該酶降解的產(chǎn)物是一系列聚合度為偶數(shù)的卡拉膠寡糖,其中四糖占主要成分。利用ESI-MS技術(shù)對(duì)不同時(shí)間獲得的酶解產(chǎn)物進(jìn)... 

【文章來源】：西北大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：146 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1、硫酸化多糖及其生物活性
        1.1 動(dòng)物來源的硫酸化多糖
        1.2 海洋藻類來源的硫酸化多糖
    2、卡拉膠及其寡糖的研究進(jìn)展
        2.1 卡拉膠的結(jié)構(gòu)
        2.2 卡拉膠寡糖及其制備方法
        2.3 卡拉膠寡糖的生物作用
    3、糖類物質(zhì)的硫酸化修飾
    4、硫酸化糖類物質(zhì)結(jié)構(gòu)研究的現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢(shì)
    5、本論文研究的目的和意義
第二章 新型酶降解κ-卡拉膠及其寡糖產(chǎn)物的分析和制備研究
    1、實(shí)驗(yàn)部分
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
            1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 菌株的活化和培養(yǎng)
            1.2.2 κ-卡拉膠酶的分離純化
            1.2.3 κ-卡拉膠酶的相對(duì)酶活力
                1.2.3.1 κ-卡拉膠酶活力的測(cè)定
                1.2.3.2 κ-卡拉膠酶蛋白含量的測(cè)定
                1.2.3.3 κ-卡拉膠酶相對(duì)酶活力的評(píng)價(jià)
            1.2.4 κ-卡拉膠酶的底物特異性研究
            1.2.5 κ-卡拉膠酶分子量的測(cè)定
            1.2.6 κ-卡拉膠寡糖的酶法制備
            1.2.7 酶降解κ-卡拉膠寡糖的TLC分析
            1.2.8 酶降解κ-卡拉膠寡糖的HPLC分析
                1.2.8.1 κ-卡拉膠寡糖的AEC衍生化標(biāo)記
                1.2.8.2 標(biāo)記產(chǎn)物的HPLC分析
            1.2.9 酶降解κ-卡拉膠寡糖醇的制備
            1.2.10 ESI-MS和CID MS/MS分析
    2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論
        2.1 κ-卡拉膠酶的分離純化
        2.2 κ-卡拉膠酶的相對(duì)酶活力
        2.3 κ-卡拉膠酶的底物特異性
        2.4 κ-卡拉膠酶的分子量
        2.5 酶降解κ-卡拉膠寡糖的TLC分析結(jié)果
        2.6 酶降解κ-卡拉膠寡糖的ESI-MS分析結(jié)果
        2.7 酶降解κ-卡拉膠寡糖的HPLC分析結(jié)果
            2.7.1 酶降解κ-卡拉膠寡糖與AEC的衍生
            2.7.2 不同聚合度κ-卡拉膠寡糖的定量分析
        2.8 酶降解κ-卡拉膠寡糖的CID MS/MS分析結(jié)果
            2.8.1 κ-卡拉膠寡糖醇的制備
            2.8.2 κ-卡拉膠寡糖的序列分析
        2.9 κ-卡拉膠酶酶切位點(diǎn)的確定
    3、本章小結(jié)
第三章 不同方法對(duì)κ-卡拉膠的降解及其寡糖產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和抗氧化活性研究
    1、實(shí)驗(yàn)部分
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
            1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 不同降解方法制備κ-卡拉膠寡糖
                1.2.1.1 自由基氧化降解
                1.2.1.2 溫和酸水解
                1.2.1.3 酶降解
                1.2.1.4 部分還原性水解
            1.2.2 降解產(chǎn)物還原糖含量的測(cè)定
            1.2.3 降解產(chǎn)物硫酸基含量的測(cè)定
            1.2.4 ESI-MS和CID MS/MS分析
            1.2.5 κ-卡拉膠寡糖抗氧化活性的研究
                1.2.5.1 對(duì)超氧陰離子清除能力的評(píng)估
                1.2.5.2 對(duì)羥自由基清除能力的評(píng)估
                1.2.5.3 還原能力的評(píng)估
                1.2.5.4 對(duì)DPPH自由基清除能力的評(píng)估
            1.2.6 κ-卡拉膠寡糖的細(xì)胞內(nèi)抗氧化活性的評(píng)估
                1.2.6.1 人肝癌細(xì)胞HepG2的培養(yǎng)
                1.2.6.2 細(xì)胞內(nèi)抗氧化活性的測(cè)定
    2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論
        2.1 κ-卡拉膠寡糖的制備
            2.1.1 還原糖含量的比較
            2.1.2 κ-卡拉膠寡糖產(chǎn)率的比較
            2.1.3 硫酸基含量的比較
        2.2 κ-卡拉膠寡糖的ESI-MS和CID MS/MS分析結(jié)果
            2.2.1 H_2O_2降解
            2.2.2 HCl水解
            2.2.3 κ-卡拉膠酶降解
            2.2.4 部分還原性水解
        2.3 κ-卡拉膠寡糖抗氧化活性的比較
            2.3.1 對(duì)超氧陰離子的清除能力
            2.3.2 對(duì)羧自由基的清除能力
            2.3.3 還原能力
            2.3.4 對(duì)DPPH自由基的清除能力
        2.4 K-卡拉膠實(shí)糖的細(xì)胞內(nèi)抗氧化活性
    3、本章小結(jié)
第四章 GC-MS用于多糖硫酸化位點(diǎn)分析的新方法研究
    1、實(shí)驗(yàn)部分
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
            1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 枸杞多糖LbGp1-OL的提取和分離純化
            1.2.2 枸杞多糖LbGp1-OL的硫酸化修飾
            1.2.3 總糖含量的測(cè)定
            1.2.4 硫酸基含量的測(cè)定
            1.2.5 相對(duì)分子質(zhì)量的測(cè)定
            1.2.6 紅外光譜分析
            1.2.7 部分酸水解
            1.2.8 單糖組成的定量分析
            1.2.9 甲基化
            1.2.10 脫硫酸基
            1.2.11 GC-MS分析
    2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論
        2.1 枸杞多糖LbGp1-OL的分離純化
        2.2 硫酸化枸杞多糖LbGp1-OL-SL和LbGp1-OL-SH的制備
        2.3 LbGp1-OL、LbGp1-OL-SL和LbGp1-OL-SH理化性質(zhì)的比較
            2.3.1 總糖含量的比較
            2.3.2 硫酸基含量的比較
            2.3.3 相對(duì)分子質(zhì)量的比較
        2.4 FT-IR譜圖分析
        2.5 單糖組成的定量分析比較
        2.6 脫硫酸基分析
        2.7 甲基化分析
    3、本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間取得的科研成果
    (Ⅰ) 攻讀博士學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果
    (Ⅱ) 攻讀博士學(xué)位期間參與的主要科研項(xiàng)目
致謝
作者簡(jiǎn)介
獲獎(jiǎng)情況



本文編號(hào)：3357485