發(fā)布時間：2021-08-10 07:11

　　人胰島素原（1uman proinsulin, HPI）是由109個氨基酸組成的單鏈無糖基化的蛋白質(zhì),分子量約為12kD。HPI是人體唯一降血糖激素胰島素的前體蛋白,體內(nèi)和體外的研究均發(fā)現(xiàn)其能夠有效降低胰高血糖素刺激的糖原分解,并結(jié)合胰島素受體發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。人體內(nèi)胰島素水平的長期失衡容易引起糖尿病,隨著人類社會的不斷發(fā)展和人民生活水平的不斷提高,糖尿病的患者人數(shù)也在不斷上升,其中中國已經(jīng)成為世界上糖尿病患者最多的國家,2010年中華內(nèi)分泌學(xué)會和國家疾病控制中心調(diào)查18歲以上人群糖尿病患病情況,顯示糖尿病患病率仍為9.7%。目前治療糖尿病患者的方法主要是胰島素的皮下注射和其他治療,胰島素的皮下注射給患者帶來了極大的精神痛苦,也容易引起高胰島素血癥、體重增加和低血糖等并發(fā)癥,并且糖尿病患者的治療費用昂貴（美國每名糖尿病患者的年治療費用達11744美元）,因此越來越多的研究開始專注于口服胰島素制劑的開發(fā),但是口服蛋白藥物必須克服胃腸道極端環(huán)境對藥物的破壞和吸收低下兩大問題�？莶菅挎邨U菌是一種非致病性革蘭氏陽性益生菌,在極端環(huán)境的脅迫下能形成具有抗逆性的休眠體—芽孢。芽孢在酸性胃的環(huán)境中可以... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 糖尿病流行病分析
    1.2 糖尿病的分類及其治療
        1.2.1 糖尿病分類
        1.2.2 糖尿病的治療
            1.2.2.1 糖尿病的化合物治療
            1.2.2.2 糖尿病的免疫治療
            1.2.2.3 糖尿病的胰島素治療
            1.2.2.4 糖尿病的微生物治療
    1.3 枯草芽孢桿菌概況
        1.3.1 枯草芽孢桿菌芽孢形成和構(gòu)造
        1.3.2 芽孢表面展示系統(tǒng)和構(gòu)建原則
        1.3.3 枯草芽孢桿菌在食品及醫(yī)藥行業(yè)中的應(yīng)用
    1.4 家蠶疾病模型研究
        1.4.1 模式生物家蠶
        1.4.2 家蠶疾病模型研究
            1.4.2.1 家蠶肝病模型
            1.4.2.2 家蠶帕金森癥模型
            1.4.2.3 家蠶高血糖模型
            1.4.2.4 家蠶其他疾病模型
    1.5 本研究的目的和意義
        1.5.1 主要研究內(nèi)容
        1.5.2 研究的技術(shù)路線
第二章 人胰島素原基因的克隆及其芽孢表面展示
    2.1 實驗材料
        2.1.1 質(zhì)粒和菌株
        2.1.2 試劑
        2.1.3 儀器設(shè)備
        2.1.4 試劑配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 人胰島素原基因hpi的克隆、測序及鑒定
        2.2.2 整合型重組質(zhì)粒pJS700-HPI的構(gòu)建
        2.2.3 重組枯草芽孢桿菌菌株的篩選與鑒定
        2.2.4 表面展示人胰島素原重組芽孢的誘導(dǎo)及鑒定
        2.2.5 Bacillus subtilis芽孢懸液的制備
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 人胰島素原基因的克隆與鑒定
        2.3.2 重組整合型質(zhì)粒pJS700-HPI的構(gòu)建和鑒定
        2.3.3 重組枯草芽孢桿菌菌株的篩選與鑒定
        2.3.4 CotC-HPI融合蛋白的表達及鑒定
    2.4 討論與小結(jié)
第三章 家蠶高血糖模型的構(gòu)建
    3.1 材料
        3.1.1 試劑
        3.1.2 實驗材料
        3.1.3 儀器設(shè)備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 葡萄糖溶液的配置和家蠶的微量注射
        3.2.2 家蠶血液糖類物質(zhì)測定
        3.2.3 家蠶血液中葡萄糖含量的測定
        3.2.4 數(shù)據(jù)處理
    3.3 結(jié)果和分析
        3.3.1 各組家蠶體重和體長的觀測
        3.3.2 家蠶血液的葡萄糖代謝分析
        3.3.3 各組家蠶血液總糖含量的測定
    3.4 討論與小結(jié)
第四章 高血糖模型家蠶的差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析
    4.1 儀器與試劑
        4.1.1 實驗儀器
        4.1.2 二維電泳相關(guān)試劑
        4.1.3 考馬斯亮藍(lán)染色相關(guān)試劑
        4.1.4 質(zhì)譜鑒定所需試劑
        4.1.5 RNA抽提及RT-PCR試劑
    4.2 材料與方法
        4.2.1 家蠶高血糖模型構(gòu)建
        4.2.2 蛋白質(zhì)樣品制備
        4.2.3 二維電泳
        4.2.4 二維凝膠圖譜分析
        4.2.5 樣品處理和質(zhì)譜鑒定
        4.2.6 數(shù)據(jù)庫比對
        4.2.7 差異蛋白的GO分析
        4.2.8 逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 高血糖模型家蠶中腸的形態(tài)差異
        4.3.2 高血糖模型家蠶中腸蛋白質(zhì)組的差異
        4.3.3 差異蛋白的質(zhì)譜鑒定
        4.3.4 差異蛋白的GO分析
        4.3.5 差異蛋白的RT-PCR分析
        4.3.6 差異蛋白的Western blot驗證
    4.4 討論
    4.5 本章小結(jié)
第五章 家蠶高血糖模型評估口服重組芽孢的降血糖功效
    5.1 材料與試劑
    5.2 實驗方法
        5.2.1 高血糖模型家蠶的構(gòu)建和重組芽孢的口添實驗
        5.2.2 家蠶體重和體長的測定
        5.2.3 家蠶血液中血糖含量的測定
        5.2.4 家蠶血液蛋白的Western blot分析
        5.2.5 數(shù)據(jù)處理
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 高血糖模型家蠶口添重組芽孢后的體重和體長觀測
        5.3.2 各組家蠶血液總糖含量的測定
        5.3.3 家蠶口服芽孢后血液的Western blot分析驗證
    5.4 討論
    5.5 本章小結(jié)
第六章 糖尿病模型小鼠對口服重組芽孢的驗證
    6.1 材料與試劑
        6.1.1 實驗材料
        6.1.2 試劑
        6.1.3 儀器設(shè)備
    6.2 實驗方法
        6.2.1 鏈脲佐菌素溶液的配置和小鼠的腹腔注射
        6.2.2 小鼠血液中葡萄糖含量的測定
        6.2.3 糖尿病小鼠的分組和重組芽孢的口添實驗
        6.2.4 小鼠血清中胰島素水平測定
        6.2.5 數(shù)據(jù)處理
    6.3 結(jié)果
        6.3.1 小鼠糖尿病模型的造模結(jié)果
        6.3.2 小鼠血糖含量的測定
        6.3.3 小鼠血清胰島素水平的測定
    6.4 討論
    6.5 本章小結(jié)
第七章 總結(jié)和展望
    7.1 主要工作總結(jié)
    7.2 創(chuàng)新點
    7.3 展望
參考文獻
致謝
博士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)成果和參加的課題


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3333721