本文關(guān)鍵詞：彩繪蛋白膠結(jié)材料MALDI-TOF-MS分析及表征研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：彩繪文物是人類文明進(jìn)步的遺產(chǎn),具有非常重要的歷史、考古、藝術(shù)和科學(xué)價(jià)值。保護(hù)和修復(fù)彩繪文物對中國、世界,乃至全人類有著十分重要的意義。彩繪顏料膠結(jié)材料的老化、降解等化學(xué)反應(yīng)是彩繪文物受損的主要原因。本文采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)法對古代文物彩繪顏料膠結(jié)材料進(jìn)行了蛋白質(zhì)組學(xué)研究。研究了彩繪文物膠結(jié)材料中蛋白質(zhì)的提取工藝,對比了5種試劑(NaOH、TFA、HCOOH, HCl及NH3·H2O)提取蛋白質(zhì)的優(yōu)劣,采用響應(yīng)曲面法(RSM)優(yōu)化古代彩繪文物膠結(jié)材料中蛋白質(zhì)的超聲輔助提取條件；進(jìn)行了膠結(jié)材料雞卵白蛋白的蛋白質(zhì)組學(xué)研究；采用MALDI-TOF-MS法分析和表征了雞卵白、雞卵黃和動(dòng)物膠及其彩繪顏料模擬樣品,建立了雞卵白、雞卵黃和動(dòng)物膠膠結(jié)材料的肽質(zhì)量指紋圖譜。結(jié)果表明：TFA被證明具有很大的應(yīng)用前景,可用于膠結(jié)材料中蛋白質(zhì)提取及MALDI-TOF-MS分析表征研究；TFA超聲輔助提取雞卵蛋白中蛋白質(zhì)的最佳條件為TFA的濃度為0.53%,超聲功率為50%,超聲時(shí)間為40 min；TFA超聲輔助提取動(dòng)物膠中蛋白質(zhì)的最佳條件為TFA的濃度為0.81%,超聲功率為70%,超聲時(shí)間為38.5 min；6種膠原蛋白在放養(yǎng)雞卵白蛋白中被首次發(fā)現(xiàn),8種膠原蛋白在籠養(yǎng)雞卵白蛋白中被首次發(fā)現(xiàn)；EDTA可以有效絡(luò)合顏料中的金屬離子,釋放出蛋白質(zhì)：與朱砂相比,石綠中的銅離子和蛋白質(zhì)中的氨基酸產(chǎn)生強(qiáng)絡(luò)合作用,對蛋白質(zhì)的表征影響較大。本論文包括五部分：第一章緒論概述了彩繪文物膠結(jié)材料研究方法,介紹了質(zhì)譜法的原理及其在膠結(jié)材料分析中的應(yīng)用、蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法和策略,在此基礎(chǔ)上提出了本課題的選題依據(jù)和研究內(nèi)容。第二章雞卵白膠結(jié)材料中蛋白質(zhì)的提取工藝研究研究了古代彩繪文物膠結(jié)材料中蛋白質(zhì)的超聲輔助提取條件,從五種不同的蛋白質(zhì)提取劑TFA、HCOOH、HCl及NH3·H2O)中篩選出一種良好的提取劑,采用響應(yīng)曲面法(RSM)優(yōu)化了古代彩繪文物膠結(jié)材料中蛋白質(zhì)的超聲輔助提取條件。第三章雞卵白蛋白的蛋白質(zhì)組學(xué)研究采用MALDI-TOF-MS法表征了放養(yǎng)雞和籠養(yǎng)雞卵白中的蛋白質(zhì)。研究了膠結(jié)材料雞卵白中蛋白質(zhì)的酶解,主要考察了酶和底物的比例、酶解時(shí)間、酶解pH等三個(gè)因素對蛋白質(zhì)酶解的影響。第四章雞卵及其模擬樣品的MALDI-TOF-MS分析與表征研究了雞卵白和雞卵黃模擬樣品中蛋白質(zhì)的測定條件,干擾的消除方法,建立了雞卵白、雞卵黃及其模擬樣品的肽質(zhì)量指紋圖譜。第五章動(dòng)物膠模擬樣品中蛋白質(zhì)的提取及MALDI-TOF-MS分析與表征采用響應(yīng)曲面法(RSM)優(yōu)化了動(dòng)物膠膠結(jié)材料中蛋白質(zhì)的TFA超聲輔助提取條件,采用MALDI-TOF-MS法表征了動(dòng)物膠及其模擬樣品中蛋白質(zhì),建立了動(dòng)物膠及其模擬樣品的肽質(zhì)量指紋圖譜。
【關(guān)鍵詞】：RSM MALDI-TOF-MS 彩繪文物 膠結(jié)材料
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：O657.63;TQ620.4
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-12
• 第一章 緒論12-44
• 1.1 彩繪文物膠結(jié)材料研究進(jìn)展12-17
• 1.1.1 膠結(jié)材料研究方法概述12-13
• 1.1.2 質(zhì)譜在膠結(jié)材料分析中的應(yīng)用13-17
• 1.1.2.1 直接質(zhì)譜法13
• 1.1.2.2 熱裂解質(zhì)譜13-14
• 1.1.2.3 溫度分辨質(zhì)譜14
• 1.1.2.4 快原子轟擊質(zhì)譜14
• 1.1.2.5 激光解吸/電離質(zhì)譜14-17
• 1.2 蛋白質(zhì)組學(xué)研究概況17-23
• 1.2.1 蛋白質(zhì)組學(xué)的提出及含義17
• 1.2.2 蛋白質(zhì)組學(xué)研究的主要技術(shù)17-20
• 1.2.2.1 雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳17-18
• 1.2.2.2 色譜技術(shù)18
• 1.2.2.3 生物質(zhì)譜技術(shù)18-19
• 1.2.2.4 酵母雙雜交技術(shù)19
• 1.2.2.5 蛋白質(zhì)芯片技術(shù)19
• 1.2.2.6 串聯(lián)親和純化技術(shù)19-20
• 1.2.2.7 生物信息學(xué)20
• 1.2.3 蛋白質(zhì)組學(xué)的研究策略20-23
• 1.2.3.1 蛋白質(zhì)的提取和預(yù)分離20
• 1.2.3.2 蛋白質(zhì)的質(zhì)譜鑒定20-23
• 1.3 選題依據(jù)和研究內(nèi)容23-25
• 參考文獻(xiàn)25-44
• 第二章 膠結(jié)材料中蛋白質(zhì)的提取工藝研究44-62
• 2.1 引言44-45
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分45-46
• 2.2.1 試劑與儀器45
• 2.2.2 樣品制備45
• 2.2.3 蛋白的超聲輔助提取45
• 2.2.4 蛋白濃度的測定45
• 2.2.5 響應(yīng)曲面優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì)45-46
• 2.3 結(jié)果與討論46-57
• 2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線46
• 2.3.2 不同的提取劑提取蛋白的效率對比46-52
• 2.3.2.1 NaOH超聲輔助提取蛋白質(zhì)的條件優(yōu)化47-48
• 2.3.2.2 TFA超聲輔助提取蛋白質(zhì)的條件優(yōu)化48-50
• 2.3.2.3 NH_3濃度對超聲輔助提取蛋白質(zhì)影響50-51
• 2.3.2.4 HCOOH濃度對超聲輔助提取蛋白質(zhì)影響51-52
• 2.3.2.5 HCl濃度對超聲輔助提取蛋白質(zhì)影響52
• 2.3.3 TFA超聲輔助提取蛋白質(zhì)的響應(yīng)曲面試驗(yàn)結(jié)果與分析52-57
• 2.3.3.1 響應(yīng)曲面試驗(yàn)結(jié)果53-54
• 2.3.3.2 回歸方程模型的建立54
• 2.3.3.3 ANOVA方差分析54-55
• 2.3.3.4 響應(yīng)曲面分析55-57
• 2.3.3.5 優(yōu)化的工藝條件57
• 2.4 小結(jié)57-58
• 參考文獻(xiàn)58-62
• 第三章 雞卵白蛋白的蛋白質(zhì)組學(xué)研究62-80
• 3.1 引言62
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分62-64
• 3.2.1 試劑與儀器62-63
• 3.2.2 樣品制備63
• 3.2.3 蛋白的酶解63
• 3.2.4 MALDI-TOF-MS測定63
• 3.2.5 數(shù)據(jù)分析63-64
• 3.3 結(jié)果與討論64-77
• 3.3.1 蛋白質(zhì)酶解條件的優(yōu)化64-71
• 3.3.1.1 酶和底物加入比例的影響64-66
• 3.3.1.2 酶解pH的影響66-69
• 3.3.1.3 酶解時(shí)間的影響69-71
• 3.3.2 蛋白質(zhì)的鑒定71-77
• 3.4 小結(jié)77-78
• 參考文獻(xiàn)78-80
• 第四章 雞卵白蛋白模擬樣品的肽質(zhì)量指紋圖譜研究80-94
• 4.1 引言80
• 4.2 實(shí)驗(yàn)部分80-81
• 4.2.1 試劑與儀器80-81
• 4.2.2 樣品制備81
• 4.2.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)81
• 4.3 結(jié)果與討論81-91
• 4.3.1 模擬樣品分析81-82
• 4.3.2 干擾消除82-84
• 4.3.3 模擬樣品的MALDI-TOF-MS分析與表征84-91
• 4.4 小結(jié)91-92
• 參考文獻(xiàn)92-94
• 第五章 動(dòng)物膠及其模擬樣品肽質(zhì)量指紋圖譜研究94-108
• 5.1 引言94
• 5.2 實(shí)驗(yàn)部分94-96
• 5.2.1 試劑、儀器與材料94-95
• 5.2.2 模擬樣品制備95
• 5.2.3 蛋白的提取及MALDI-TOF-MS表征95
• 5.2.4 響應(yīng)曲面優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì)95-96
• 5.3 結(jié)果與討論96-105
• 5.3.1 模擬樣品分析96-97
• 5.3.2 響應(yīng)曲面試驗(yàn)97-101
• 5.3.2.1 響應(yīng)曲面試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果97-98
• 5.3.2.2 回歸方程模型的建立及其顯著性檢驗(yàn)98-99
• 5.3.2.3 響應(yīng)曲面分析99-101
• 5.3.2.4 優(yōu)化的工藝條件101
• 5.3.3 MALDI-TOF-MS表征101-105
• 5.4 小結(jié)105-106
• 參考文獻(xiàn)106-108
• 總結(jié)108-110
• 攻讀博士學(xué)位期間取得的科研成果110-112
• 致謝112

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：彩繪蛋白膠結(jié)材料MALDI-TOF-MS分析及表征研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：327876