發(fā)布時(shí)間：2017-04-24 22:11

  本文關(guān)鍵詞：核桃殼中黃嘌呤氧化酶抑制活性物質(zhì)的分離鑒定及構(gòu)效關(guān)系的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：高尿酸血癥是人類(lèi)常見(jiàn)的代謝疾病,會(huì)導(dǎo)致關(guān)節(jié)和腎臟形成尿酸鹽結(jié)晶,同時(shí)會(huì)增加患痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、尿酸腎石病、心血管疾病和高血壓等的風(fēng)險(xiǎn)。黃嘌呤氧化酶是嘌呤代謝的關(guān)鍵酶,該酶可以催化次黃嘌呤轉(zhuǎn)化為黃嘌呤,進(jìn)而將黃嘌呤轉(zhuǎn)化為尿酸,與高尿酸血癥的形成息息相關(guān)。因而服用黃嘌呤氧化酶抑制劑是治療高尿酸血癥的非常有效的方法之一。但是,目前廣泛使用的臨床藥物別嘌呤醇會(huì)導(dǎo)致一系列副作用,例如過(guò)敏反應(yīng)、Steven-Johnson癥狀和腎臟毒性等,因此治療高尿酸血癥需要更加安全有效的黃嘌呤氧化酶抑制劑。文獻(xiàn)報(bào)道表明植物中的天然活性物質(zhì)既是潛在的黃嘌呤氧化酶抑制劑,同時(shí)又是良好的抗氧化劑。核桃屬于胡桃科胡桃屬植物,廣泛的分布于世界各地,核桃殼質(zhì)量約占核桃質(zhì)量的30%,核桃加工后會(huì)產(chǎn)生大量的核桃殼。本論文研究了核桃殼的提取物的體內(nèi)降尿酸活性,并期望從中尋找出新型的黃嘌呤氧化酶抑制劑,現(xiàn)將主要研究結(jié)果歸納如下:(1)優(yōu)化了評(píng)定樣品黃嘌呤氧化酶抑制活性的催化反應(yīng)條件,將測(cè)定酚類(lèi)物質(zhì)的黃嘌呤氧化酶抑制活性的高效液相色譜法和分光光度法進(jìn)行了對(duì)比研究。優(yōu)化后的催化反應(yīng)條件為:底物濃度0.24 mM、酶濃度0.01 U/m L、催化反應(yīng)溫度25oC、pH值7.5、催化反應(yīng)時(shí)間30 min和終止反應(yīng)用HCl溶液(1.0 M)的體積80μL。兩種方法在尿酸的檢測(cè)濃度范圍內(nèi)都具有較好的線性關(guān)系和較高的日內(nèi)精密度,但高效液相色譜法的檢出限和定量限比分光光度法大約低了一個(gè)數(shù)量級(jí),靈敏度較高。分光光度法在檢測(cè)活性較弱的物質(zhì)或在292 nm處有強(qiáng)吸收的酚類(lèi)物質(zhì)的黃嘌呤氧化酶抑制活性時(shí)結(jié)果會(huì)偏高。相比之下測(cè)定黃嘌呤氧化酶抑制活性的高效液相色譜法消除了干擾,并可以在不控溫的情況下21 h內(nèi)檢測(cè)有效,每個(gè)樣品檢測(cè)只需8 min,可用于樣品的高通量篩選。同時(shí)高效液相法的日間精密度在0.10-1.50%的范圍內(nèi),說(shuō)明該法具有較高的日間精密度。(2)為了從核桃果實(shí)及其副產(chǎn)物中篩選出合適的原料,對(duì)核桃果實(shí)(青皮、殼和仁)、莖和葉提取物的抗氧化活性和黃嘌呤氧化酶抑制活性進(jìn)行了對(duì)比研究。核桃殼提取率較低(提取率為2.80%),但其提取物的總酚含量(14.81±0.50 GAE g/100 g,GAE沒(méi)食子酸當(dāng)量)最高,抗氧化活性(ORAC 3423.44±142.52μmol TE/g,TE為T(mén)rolox當(dāng)量,還原力115.86±2.05μg/mL)最優(yōu),黃嘌呤氧化酶抑制活性?xún)H次于核桃青皮提取物(核桃殼和青皮提取物抑制黃嘌呤氧化酶的半數(shù)抑制濃度分別為988.36±31.31μg/mL和616.86±17.84μg/mL),在保健食品工業(yè)中具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。同時(shí),通過(guò)高效液相分析譜圖發(fā)現(xiàn)核桃果實(shí)不同部分(青皮、殼和脫脂核桃仁)、莖和葉提取物組成存在著一定的差異,但均具有相同的特征峰,說(shuō)明這些樣品的主要成分比較接近。(3)探討了核桃殼提取物在高尿酸大鼠體內(nèi)的降尿酸活性,并在體外進(jìn)行了以黃嘌呤氧化酶抑制活性為導(dǎo)向的分離、純化和結(jié)構(gòu)鑒定。按照166 mg/kg核桃殼提取物的劑量灌胃大鼠30 d,發(fā)現(xiàn)灌胃核桃殼提取物不會(huì)影響大鼠的體重;灌胃20 d時(shí)該組大鼠的血尿酸含量明顯低于模型組大鼠(核桃殼提取物組vs模型組,p0.05),在30 d時(shí)血尿酸含量降低到模型組的76.41%(核桃殼提取物組vs模型組,p0.05),同時(shí)大鼠血清中的尿素氮和肌酐含量(核桃殼提取物組vs模型組;尿素氮p0.01,肌酐p0.05)明顯降低,說(shuō)明核桃殼提取物具有體內(nèi)降尿酸活性和腎臟保護(hù)作用。以黃嘌呤氧化酶抑制活性為導(dǎo)向進(jìn)行分離純化,鑒定出了對(duì)香豆醛、β-D-胡蘿卜苷、對(duì)羥基苯甲醛和氫化胡桃醌這四種物質(zhì)。其中對(duì)香豆醛的黃嘌呤氧化酶抑制活性最強(qiáng),為混合性抑制劑,與別嘌呤醇具有協(xié)同增效作用。核桃殼提取物和對(duì)香豆醛可以作為預(yù)防和治療高尿酸血癥及痛風(fēng)的活性物質(zhì)。(4)基于對(duì)香豆醛及其結(jié)構(gòu)類(lèi)似物,探討了黃嘌呤氧化酶抑制活性的構(gòu)效關(guān)系,并對(duì)對(duì)香豆醛抑制黃嘌呤氧化酶的機(jī)制進(jìn)行了探討。體外的黃嘌呤氧化酶抑制活性和分子對(duì)接結(jié)果表明對(duì)香豆醛的醛基、雙鍵和羥基對(duì)其黃嘌呤氧化酶抑制活性具有重要貢獻(xiàn)。對(duì)香豆醛與黃嘌呤氧化酶之間相互作用主要包括對(duì)香豆醛與苯丙氨酸-914和苯丙氨酸-1009之間的苯環(huán)與苯環(huán)的相互作用,羥基與谷氨酸-1261和精氨酸-880之間的兩個(gè)氫鍵,醛基與蘇氨酸-1010和纈氨酸-1011之間的兩個(gè)氫鍵。通過(guò)改變對(duì)香豆醛本身基團(tuán)的位置和增加基團(tuán)進(jìn)一步探討了對(duì)香豆醛及其衍生物抑制黃嘌呤氧化酶的構(gòu)效關(guān)系,結(jié)果表明在對(duì)香豆醛的基礎(chǔ)上尋找活性更好的黃嘌呤氧化酶抑制劑,需要引入加強(qiáng)醛基親電性的基團(tuán),同時(shí)要保持物質(zhì)的線性結(jié)構(gòu);對(duì)香豆醛抑制黃嘌呤氧化酶活性的機(jī)制也進(jìn)一步證實(shí)了對(duì)香豆醛醛基的親電性對(duì)于黃嘌呤氧化酶抑制活性的重要性。
【關(guān)鍵詞】：核桃殼 尿酸 黃嘌呤氧化酶 對(duì)香豆醛
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：TS209
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-15
• 第一章 緒論15-46
• 1.1 尿酸、高尿酸血癥和痛風(fēng)15-16
• 1.2 植物提取物的降尿酸活性研究16-18
• 1.3 黃嘌呤氧化酶與酶抑制作用類(lèi)型18-20
• 1.3.1 黃嘌呤氧化酶18
• 1.3.2 酶抑制作用的類(lèi)型18-20
• 1.4 黃嘌呤氧化酶抑制劑20-32
• 1.4.1 含氮雜環(huán)類(lèi)抑制劑20-24
• 1.4.2 含氧雜環(huán)類(lèi)抑制劑24-30
• 1.4.3 其它類(lèi)型的抑制劑30-32
• 1.5 氧化應(yīng)激和黃嘌呤氧化酶32-33
• 1.6 核桃的研究與開(kāi)發(fā)利用現(xiàn)狀33-37
• 1.6.1 核桃殼的物質(zhì)基礎(chǔ)與生物活性研究33-34
• 1.6.2 核桃青皮的物質(zhì)基礎(chǔ)與生物活性研究34-35
• 1.6.3 核桃內(nèi)種皮的物質(zhì)基礎(chǔ)與生物活性研究35
• 1.6.4 核桃仁及核桃餅粕的物質(zhì)基礎(chǔ)與生物活性研究35-36
• 1.6.5 核桃葉的物質(zhì)基礎(chǔ)與生物活性研究36-37
• 1.7 本課題研究的立題依據(jù)和主要研究?jī)?nèi)容37-38
• 1.7.1 立題依據(jù)37
• 1.7.2 主要研究?jī)?nèi)容37-38
• 參考文獻(xiàn)38-46
• 第二章 分光光度法和高效液相色譜法測(cè)定酚類(lèi)物質(zhì)黃嘌呤氧化酶抑制活性的對(duì)比研究46-65
• 2.1 前言46-47
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器47-48
• 2.2.1 試劑47
• 2.2.2 主要儀器設(shè)備47-48
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法48-51
• 2.3.1 溶液的配制48
• 2.3.2 初始的黃嘌呤氧化酶催化反應(yīng)條件48-49
• 2.3.3 黃嘌呤氧化酶抑制活性測(cè)定的分光光度法49
• 2.3.4 黃嘌呤氧化酶抑制活性測(cè)定的高效液相色譜法49
• 2.3.5 黃嘌呤氧化酶抑催化反應(yīng)條件的優(yōu)化49-50
• 2.3.6 方法學(xué)驗(yàn)證50
• 2.3.7 潛在的干擾物對(duì)分光光度法測(cè)定抑制活性的影響50-51
• 2.3.8 數(shù)據(jù)分析51
• 2.4 結(jié)果與討論51-60
• 2.4.1 黃嘌呤氧化酶催化反應(yīng)條件的優(yōu)化51-54
• 2.4.2 兩種方法測(cè)定尿酸時(shí)的線性相關(guān)性比較54
• 2.4.3 兩種方法日內(nèi)精密度的對(duì)比研究54-55
• 2.4.4 催化反應(yīng)體系中的物質(zhì)對(duì)分光光度法測(cè)定黃嘌呤氧化酶抑制活性的影響55-57
• 2.4.5 黃嘌呤氧化酶抑制活性測(cè)定的高效液相色譜法57-58
• 2.4.6 高效液相色譜法穩(wěn)定性和日間精密度的研究58-60
• 2.5 本章小結(jié)60-61
• 參考文獻(xiàn)61-65
• 第三章 核桃果實(shí)、莖和葉提取物抗氧化和黃嘌呤氧化酶抑制活性的研究65-77
• 3.1 前言65
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器65-67
• 3.2.1 試劑65-66
• 3.2.2 主要儀器設(shè)備66
• 3.2.3 原料66-67
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法67-70
• 3.3.1 樣品醇提物的制備67
• 3.3.2 總酚含量的測(cè)定67-68
• 3.3.3 氧自由基吸收能力（ORAC）的測(cè)定68
• 3.3.4 還原力的測(cè)定68
• 3.3.5 黃嘌呤氧化酶抑制活性的測(cè)定68-69
• 3.3.6 各樣品的高效液相色譜分析69
• 3.3.7 數(shù)據(jù)分析69-70
• 3.4 結(jié)果與討論70-73
• 3.4.1 樣品的提取率和多酚含量70
• 3.4.2 樣品的抗氧化活性70-72
• 3.4.3 樣品的黃嘌呤氧化酶抑制活性72
• 3.4.4 樣品的高效液相色譜分析72-73
• 3.5 本章小結(jié)73
• 參考文獻(xiàn)73-77
• 第四章 核桃殼提取物的體內(nèi)降尿酸活性及活性物質(zhì)的分離、純化和鑒定77-96
• 4.1 前言77-78
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器78-80
• 4.2.1 試劑78-79
• 4.2.2 儀器與設(shè)備79
• 4.2.3 實(shí)驗(yàn)用大鼠79-80
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法80-82
• 4.3.1 核桃殼提取物的制備80
• 4.3.2 核桃殼提取物體內(nèi)降尿酸活性的研究80
• 4.3.3 總酚含量的測(cè)定80-81
• 4.3.4 氧自由基吸收能力（ORAC）的測(cè)定81
• 4.3.5 還原力的測(cè)定81
• 4.3.6 DPPH·清除能力的測(cè)定81
• 4.3.7 黃嘌呤氧化酶抑制活性的測(cè)定81
• 4.3.8 以活性為導(dǎo)向，分離和純化核桃殼提取物中的活性物質(zhì)81-82
• 4.3.9 活性物質(zhì)的鑒定82
• 4.3.10 樣品的黃嘌呤氧化酶抑制類(lèi)型和抑制常數(shù)研究82
• 4.3.11 數(shù)據(jù)分析82
• 4.4 結(jié)果與討論82-92
• 4.4.1 核桃殼提取物體內(nèi)降尿酸活性研究82-85
• 4.4.2 以活性為導(dǎo)向，分離、純化和鑒定核桃殼提取物內(nèi)活性物質(zhì)85-90
• 4.4.3 對(duì)香豆醛的黃嘌呤氧化酶抑制類(lèi)型和抑制常數(shù)研究90-91
• 4.4.4 對(duì)香豆醛與別嘌呤醇的協(xié)同增效作用研究91-92
• 4.5 本章小結(jié)92-93
• 參考文獻(xiàn)93-96
• 第五章 對(duì)香豆醛及其類(lèi)似物的黃嘌呤氧化酶抑制活性構(gòu)效關(guān)系的探討96-118
• 5.1 前言96
• 5.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器96-98
• 5.2.1 試劑96-97
• 5.2.2 主要儀器設(shè)備97-98
• 5.3 實(shí)驗(yàn)方法98-101
• 5.3.1 黃嘌呤氧化酶抑制活性的測(cè)定98
• 5.3.2 分子對(duì)接98
• 5.3.3 對(duì)香豆醛及其衍生物的合成方法98-100
• 5.3.4 合成產(chǎn)物表征100
• 5.3.5 對(duì)香豆醛抑制黃嘌呤氧化酶機(jī)制的研究100
• 5.3.6 數(shù)據(jù)分析100-101
• 5.4 結(jié)果與討論101-114
• 5.4.1 對(duì)香豆醛苯環(huán)上的基團(tuán)對(duì)黃嘌呤氧化酶抑制活性影響的研究101-102
• 5.4.2 對(duì)香豆醛與黃嘌呤氧化酶的分子對(duì)接102-104
• 5.4.3 對(duì)香豆醛及其衍生物的合成104-109
• 5.4.4 對(duì)香豆醛及其衍生物的黃嘌呤氧化酶抑制活性及構(gòu)效關(guān)系的探討109-111
• 5.4.5 對(duì)香豆醛抑制黃嘌呤氧化酶機(jī)制的探討111-114
• 5.5 本章小結(jié)114-115
• 參考文獻(xiàn)115-118
• 結(jié)論與展望118-121
• 1. 結(jié)論118-119
• 2. 論文創(chuàng)新點(diǎn)119
• 3. 展望119-121
• 攻讀博期間論文發(fā)表情況121-122
• 致謝122-124
• 附件124

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 謝紅;馬哲龍;許志連;俞燕;蔣福升;丁志山;;山核桃葉提取物體外對(duì)HepG2細(xì)胞增殖抑制作用研究[J];海峽藥學(xué);2011年11期

2 劉慎;鄧煜;魯雙;高瑩;;核桃葉黃酮微波輔助提取及抗氧化性研究[J];食品研究與開(kāi)發(fā);2009年06期

3 周瑾;劉俊;何娟娟;林峰;李淑慧;張瑞芹;;慢性高尿酸血癥動(dòng)物模型的制備及改良[J];深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志;2010年06期

  本文關(guān)鍵詞：核桃殼中黃嘌呤氧化酶抑制活性物質(zhì)的分離鑒定及構(gòu)效關(guān)系的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號(hào)：325064