抗體是一類重要的生物技術(shù)藥物,具有廣闊的應(yīng)用前景。目前,蛋白A親和層析是抗體分離的平臺(tái)技術(shù),具有高度特異性,但是存在成本高、洗脫條件苛刻、蛋白配基易脫落等問(wèn)題。尋求經(jīng)濟(jì)高效的抗體分離新方法,具有重要的意義�；旌夏Ｊ綄游龊投屉姆律鷮游鍪悄壳翱贵w分離的新技術(shù),目前對(duì)其的認(rèn)識(shí)還不夠深入。本論文以抗體的高效分離為目標(biāo),以混合模式層析介質(zhì)分離抗體為起步,比較和評(píng)價(jià)混合模式配基在分離抗體時(shí)的作用和效果,然后分子對(duì)接比較混合模式配基和短肽配基,得出短肽配基對(duì)抗體具有更好的選擇性。利用分子模擬分析短肽配基-抗體相互作用,以此作為設(shè)計(jì)四肽配基庫(kù)的重要依據(jù),篩選出相應(yīng)的四肽配基,用于制備以新型四肽為配基的仿生層析介質(zhì),以提高抗體的分離性能。首先比較了四種商業(yè)化混合模式介質(zhì)對(duì)抗體的分離性能,分別是Bestarose Diamond MMA、Bestarose Diamond MMC、MEP HyperCel和PPA HyperCel。以人免疫球蛋白（hIgG）和牛血清白蛋白（BSA）混合料液為分離對(duì)象,采用上述四種介質(zhì)進(jìn)行了分離純化的比較。pH梯度洗脫結(jié)果表明,Bestarose Diamond MMA抗體... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 引言
    1.2 抗體
    1.3 單克隆抗體的分離純化
        1.3.1 層析法
        1.3.2 非層析法
    1.4 蛋白A替代配基
        1.4.1 親硫配基
        1.4.2 疏水電荷誘導(dǎo)配基
        1.4.3 混合模式配基
        1.4.4 仿生配基
    1.5 短肽仿生配基的設(shè)計(jì)和篩選
        1.5.1 組合化學(xué)技術(shù)
        1.5.2 噬菌體展示技術(shù)
        1.5.3 mRNA展示技術(shù)
        1.5.4 計(jì)算模擬輔助技術(shù)
    1.6 本文研究思路
第二章 混合模式層析分離抗體
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 試劑與儀器
        2.2.2 靜態(tài)吸附容量測(cè)定
        2.2.3 pH梯度洗脫層析
        2.2.4 pH階躍洗脫層析
        2.2.5 鹽梯度洗脫層析
        2.2.6 高鹽上樣淋洗層析
        2.2.7 SEC-HPLC分析
        2.2.8 非還原SDS-PAGE分析
        2.2.9 ζ電位測(cè)定
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 pH調(diào)控
        2.3.2 鹽濃度調(diào)控
    2.4 本章小結(jié)
第三章 DAAG配基-抗體相互作用的機(jī)制分析
    3.1 引言
    3.2 計(jì)算模擬方法
        3.2.1 分子建模
        3.2.2 分子對(duì)接
        3.2.3 分子動(dòng)力學(xué)模擬
        3.2.4 相互作用能計(jì)算
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 混合模式配基與短肽配基的比較分析
        3.3.2 DAAG結(jié)合位點(diǎn)的確定
        3.3.3 DAAG結(jié)合機(jī)制分析
        3.3.4 DAAG解離機(jī)制分析
        3.3.5 配基作用模式分析
    3.4 本章小結(jié)
第四章 四肽配基的理性設(shè)計(jì)與初步評(píng)價(jià)
    4.1 引言
    4.2 四肽配基庫(kù)建立與篩選方法
        4.2.1 四肽配基庫(kù)建立
        4.2.2 初步篩選
        4.2.3 二次篩選
        4.2.4 相互作用能分析
    4.3 材料與方法
        4.3.1 試劑與儀器
        4.3.2 Bestarose 4FF氨基活化和氨基密度測(cè)定
        4.3.3 短肽偶聯(lián)和短肽密度測(cè)定
        4.3.4 吸附等溫線測(cè)定
        4.3.5 蛋白混合物中分離IgG
        4.3.6 SEC-HPLC分析
        4.3.7 非還原SDS-PAGE分析
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 四肽配基庫(kù)的建立
        4.4.2 初步篩選——柔性對(duì)接
        4.4.3 二次篩選——分子動(dòng)力學(xué)模擬
        4.4.4 Fc片段與四肽配基的相互作用分析
        4.4.5 四肽介質(zhì)制備
        4.4.6 吸附等溫線
        4.4.7 蛋白混合液中分離hIgG
    4.5 本章小結(jié)
第五章 新型四肽介質(zhì)的抗體吸附和分離性能
    5.1 引言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 試劑與儀器
        5.2.2 Bestarose 4FF氨基活化和氨基密度測(cè)定
        5.2.3 四肽偶聯(lián)和四肽密度測(cè)定
        5.2.4 吸附等溫線測(cè)定
        5.2.5 吸附動(dòng)力學(xué)測(cè)定
        5.2.6 動(dòng)態(tài)載量測(cè)定
        5.2.7 牛乳清中分離IgG
        5.2.8 細(xì)胞培養(yǎng)上清液中分離單抗
        5.2.9 抗體純度和收率分析
        5.2.10 非還原SDS-PAGE與還原SDS-PAGE分析
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 吸附等溫線
        5.3.2 吸附動(dòng)力學(xué)
        5.3.3 10%穿透的動(dòng)態(tài)載量
        5.3.4 牛乳清中分離IgG
        5.3.5 CHO細(xì)胞培養(yǎng)上清液中分離單抗
    5.4 本章小結(jié)
第六章 總結(jié)和展望
    6.1 總結(jié)
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間的研究成果
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3217023