本文關(guān)鍵詞：蛹蟲草多肽制備分離及功能口服液加工工藝研究

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【摘要】：蛹蟲草是一種和冬蟲夏草同屬異種的藥食兼用真菌,研究表明蛹蟲草含有與冬蟲夏草相近的功能物質(zhì)及藥用功效。蛹蟲草主要的活性成分主要是蟲草多糖、腺苷、甘露醇、SOD酶和一些微量元素。當(dāng)前報道較多的是關(guān)于蟲草素和蟲草多糖,而關(guān)于蛋白質(zhì)制備多肽類的研究及其保健品的開發(fā)較少。本研究主要內(nèi)容及結(jié)果如下：以蛹蟲草子實體為原料,測定了蛹蟲草子實體基本成分和主要功能成分,其含量為：蛋白質(zhì)28.73%,蟲草多糖21.85%,腺苷1.20%,蟲草素1.08%,甘露醇3.824%。本文采用堿提酸沉法提取蛹蟲草子實體中的蛋白質(zhì)。分別通過單因素試驗和正交試驗對提取方法進行優(yōu)化。最終得到堿法提取蛹蟲草蛋白的最佳提取條件為：NaOH溶液濃度0.15mol/1,料液比1：17.5,提取時間120min。采用酸沉法沉降蛹蟲草蛋白,分析得到pH4.6是蛋白質(zhì)的等電點。選取蛋白酶復(fù)合酶解,以水解度DH為指標(biāo),通過單因素和響應(yīng)面試驗對水解條件進行優(yōu)化,最終確定水解的最佳條件為反應(yīng)時間為7.00h,pH為9.15,反應(yīng)溫度為52.59℃,此時水解度最大,將此條件下的酶解液冷凍干燥。利用Tricine-SDS-PAGE電泳和葡聚糖凝膠層析對蛹蟲草多肽進行初步分離純化,分析了蛹蟲草多肽的分子量范圍。電泳結(jié)果表明,酶解法制備的蛹蟲草多肽分子量主要集中分布在4722-7547Da附近；凝膠層析結(jié)果表明,酶解法制備的蛹蟲草多肽分子量主要分布在6674-28333Da和296-5343Da,多肽是小分子物質(zhì),可知酶解液中分離的多肽分子量主要集中在296-5343Da。選用體外化學(xué)模擬體系測定了蛹蟲草多肽的超氧陰離子自由基(02-)清除能力,DPPH-自由基清除能力、羥自由基(-OH)清除能力和還原能力,當(dāng)蛹蟲草多肽濃度為1.0mg/ml時,超氧陰離子自由基(O2-)清除率,DPPH-自由基清除率、羥自由基(-OH)清除率分別為37.80%、46.34%和43.21%,說明復(fù)合蛋白酶酶解制備的蛹蟲草多肽具有一定的清除自由基和抗氧化的能力。采用平板濾紙法考察蛹蟲草多肽的抑菌活性。試驗結(jié)果顯示,蛹蟲草多肽對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和沙門氏菌的抑菌結(jié)果均為陰性,表明酶法制備的蛹蟲草多肽對上述四種菌沒有抑菌活性。研究了多肽口服液的生產(chǎn)工藝流程。酶解法制備的多肽液采用活性炭、p-環(huán)狀糊精和蘋果酸進行脫苦處理,主要添加白砂糖、檸檬酸、蜂蜜和甘氨酸進行調(diào)配,以感官評定為指標(biāo)確定最佳配方組合,這四種物質(zhì)的添加量為：白砂糖10%,蜂蜜3%,檸檬酸0.2%,甘氨酸0.1%。
【關(guān)鍵詞】：蛹蟲草 酶解 多肽 抗氧化 口服液
【學(xué)位授予單位】：天津科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：TS218
【目錄】：

• 摘要4-5
• abstract5-9
• 1 前言9-21
• 1.1 蛹蟲草的研究概況9-12
• 1.1.1 蛹蟲草簡介9
• 1.1.2 蛹蟲草子實體的營養(yǎng)成分9-11
• 1.1.3 蛹蟲草的化學(xué)成分及分析11-12
• 1.1.4 蛹蟲草產(chǎn)品的開發(fā)12
• 1.2 生物活性肽的研究概況12-18
• 1.2.1 生物活性肽的來源13
• 1.2.2 生物活性肽的功能13-14
• 1.2.3 蛋白質(zhì)酶解法制備生物活性肽及其研究進展14-16
• 1.2.4 生物活性肽的分離16-18
• 1.3 蟲草多肽的研究現(xiàn)狀18
• 1.4 微波殺菌技術(shù)的應(yīng)用18-19
• 1.4.1 微波殺菌技術(shù)的原理18
• 1.4.2 影響微波殺菌效果的因素18-19
• 1.4.3 微波殺菌技術(shù)及應(yīng)用19
• 1.5 課題研究意義及內(nèi)容19-21
• 1.5.1 研究的內(nèi)容19-20
• 1.5.2 研究的意義20-21
• 2 材料與方法21-40
• 2.1 材料21-23
• 2.1.1 原料21
• 2.1.2 實驗試劑21-22
• 2.1.3 實驗儀器及設(shè)備22-23
• 2.2 實驗方法23-40
• 2.2.1 蛹蟲草基本成分分析23-26
• 2.2.2 蛹蟲草功能成分測定26-28
• 2.2.3 蛹蟲草子實體蛋白質(zhì)提取工藝28-30
• 2.2.4 蛹蟲草蛋白的酶解工藝30-32
• 2.2.5 蛹蟲草子實體活性肽的分離純化32-34
• 2.2.6 蛹蟲草子實體多肽體外抗氧化活性研究34-37
• 2.2.7 蛹蟲草多肽口服液加工工藝研究37-40
• 3 結(jié)果與討論40-67
• 3.1 蛹蟲草基本成分分析40-41
• 3.1.1 蛹蟲草蛋白質(zhì)含量結(jié)果40
• 3.1.2 蛹蟲草還原糖含量結(jié)果40-41
• 3.2 蛹蟲草功能成分分析41-44
• 3.2.1 蛹蟲草多糖含量的測定41
• 3.2.2 蛹蟲草蟲草素和腺苷含量的測定41-42
• 3.2.3 蛹蟲草甘露醇含量的測定42-43
• 3.2.4 蛹蟲草基本成分含量結(jié)果43-44
• 3.3 蛹蟲草蛋白質(zhì)提取結(jié)果分析44-49
• 3.3.1 牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線44
• 3.3.2 蛹蟲草蛋白沉降點測定結(jié)果44-45
• 3.3.3 蛹蟲草蛋白提取單因素試驗結(jié)果45-47
• 3.3.4 蛹蟲草蛋白提取正交試驗結(jié)果47-49
• 3.4 蛹蟲草蛋白酶解試驗結(jié)果分析49-56
• 3.4.1 蛋白酶篩選試驗結(jié)果49-50
• 3.4.2 單因素試驗結(jié)果分析50-53
• 3.4.3 響應(yīng)面試驗結(jié)果分析53-56
• 3.5 蛹蟲草多肽分離純化結(jié)果56-61
• 3.5.1 電泳結(jié)果分析56-58
• 3.5.2 葡聚糖凝膠層析結(jié)果分析58-60
• 3.5.3 電泳法和葡聚糖層析法分離結(jié)果分析60-61
• 3.6 蛹蟲草多肽抗氧化活性實驗結(jié)果61-63
• 3.6.1 蛹蟲草多肽還原力測定結(jié)果61
• 3.6.2 蛹蟲草多肽DPPH-自由基清除能力測定結(jié)果61-62
• 3.6.3 蛹蟲草多肽超氧陰離子抑制率測定結(jié)果62
• 3.6.4 蛹蟲草多肽羥自由基抑制率測定結(jié)果62-63
• 3.6.5 蛹蟲草多肽抑菌試驗結(jié)果63
• 3.7 蛹蟲草多肽口服液工藝結(jié)果63-67
• 3.7.1 蛹蟲草多肽脫苦試驗結(jié)果63-64
• 3.7.2 蛹蟲草多肽口服液調(diào)配試驗結(jié)果64-65
• 3.7.3 蛹蟲草多肽口服液穩(wěn)定性試驗結(jié)果65
• 3.7.4 蛹蟲草多肽口服液質(zhì)量指標(biāo)測定結(jié)果65-67
• 4 結(jié)論67-68
• 5 展望68-69
• 6 參考文獻69-74
• 7 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文情況74-75
• 8 致謝75

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