本文關(guān)鍵詞：桔霉素分子印跡仿生酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法研究

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【摘要】：本研究采用本體聚合方法以3,5-二羥基-2-萘甲酸為假模板分子,甲基丙烯酸為功能單體,乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑,在酶標(biāo)板孔表面直接紫外引發(fā)合成了對(duì)桔霉素分子印跡聚合物膜,成功將分子印跡技術(shù)應(yīng)用于免疫分析中,建立了一種食品中桔霉素分子印跡仿生酶聯(lián)免疫吸附法。研究對(duì)分子印跡膜合成參數(shù)和條件進(jìn)行了詳細(xì)優(yōu)化,并通過掃描電鏡對(duì)分子印跡膜進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征。并且,通過平衡結(jié)合實(shí)驗(yàn)和吸附動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)考察了分子印跡膜的吸附性能。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：所合成的分子印跡聚合物膜對(duì)桔霉素具有良好的特異性吸附能力和較快的吸附速度。印跡膜飽和吸附容量達(dá)到1.07 μgwell-1,明顯高于非印跡聚合物膜(0.213 μgwell-1)。當(dāng)桔霉素濃度為50 mgL-1時(shí),10 min內(nèi)可達(dá)到最大吸附容量的54.9%；30 min時(shí)可達(dá)到最大吸附容量的97.3%；吸附40 min達(dá)到吸附平衡。研究以此分子印跡膜為仿生抗體,針對(duì)桔霉素建立了直接競(jìng)爭(zhēng)仿生酶聯(lián)免疫分析法。在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下,方法靈敏度(IC50)和最低檢出限(IC15)分別達(dá)到109.20μgL-1和0.50μgL-1。對(duì)谷物中的五種生物毒素的交叉反應(yīng)率均不超過4.7%。此方法被成功地應(yīng)用于米飯,玉米,米醋三種樣品中的桔霉素的分析檢測(cè),三個(gè)添加濃度下的回收率分別達(dá)到73.2%-89.9%,64.3-86.2%和82.3-92.8%。與高效液相色譜方法檢測(cè)結(jié)果相比,檢測(cè)結(jié)果具有很好的一致性,相關(guān)系數(shù)為0.9942。本研究?jī)?nèi)容為食品樣品中桔霉素檢測(cè)提供了一種穩(wěn)定、可行、低成本的檢測(cè)方法。
【關(guān)鍵詞】：桔霉素 分子印跡聚合物膜 仿生酶聯(lián)免疫
【學(xué)位授予單位】：天津科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：TS207.3
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 1 前言9-26
• 1.1 桔霉素簡(jiǎn)介9-11
• 1.1.1 桔霉素的來源及其自然分布9
• 1.1.2 桔霉素的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)9-10
• 1.1.3 桔霉素的腎毒性10
• 1.1.4 桔霉素的致畸作用10
• 1.1.5 桔霉素的抑菌作用10-11
• 1.1.6 桔霉素在紅曲菌中的部分代謝途徑11
• 1.2 桔霉素的檢測(cè)方法11-13
• 1.2.1 比色法11
• 1.2.2 薄層層析法11
• 1.2.3 高效液相色譜法11-12
• 1.2.4 色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)12-13
• 1.2.5 毛細(xì)管電泳法13
• 1.2.6 免疫親和色譜法13
• 1.2.7 免疫測(cè)定方法13
• 1.3 桔霉素的控制技術(shù)13-14
• 1.4 分子印跡技術(shù)14-24
• 1.4.1 分子印跡技術(shù)概念及特點(diǎn)14
• 1.4.2 分子印跡技術(shù)的發(fā)展歷程14
• 1.4.3 分子印跡技術(shù)的原理及制備過程14-15
• 1.4.4 分子印跡聚合物的識(shí)別機(jī)理15-16
• 1.4.5 分子印跡聚合物制備條件16-21
• 1.4.6 分子印跡聚合物的制備方法21-23
• 1.4.7 分子印跡技術(shù)的應(yīng)用23-24
• 1.5 本課題研究?jī)?nèi)容及意義24-26
• 2 材料與方法26-35
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器26-28
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑26-27
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器27
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)主要溶液的配置27-28
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法28-35
• 2.2.1 桔霉素分子印跡膜的制備28
• 2.2.2 桔霉素分子印跡聚合物膜的性能表征28-29
• 2.2.3 桔霉素酶標(biāo)的連接29-31
• 2.2.4 直接競(jìng)爭(zhēng)仿生酶聯(lián)免疫吸附分析法(BELISA)建立31-32
• 2.2.5 BELISA反應(yīng)體系條件的選擇及優(yōu)化32-33
• 2.2.6 BELISA方法在實(shí)際樣品中的應(yīng)用33
• 2.2.7 實(shí)際樣品的準(zhǔn)備及添加回收實(shí)驗(yàn)33-34
• 2.2.8 液相色譜方法驗(yàn)證34-35
• 3 結(jié)果與討論35-53
• 3.1 桔霉素分子印跡聚合物的合成條件的優(yōu)化35-38
• 3.1.1 假模板的選擇35-36
• 3.1.2 3,5DH2NA最大吸收波長(zhǎng)的確定以及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制36-37
• 3.1.3 桔霉素最大吸收波長(zhǎng)的確定37-38
• 3.2 桔霉素分子印跡仿生抗體的合成38-43
• 3.2.1 溶劑的選擇38-39
• 3.2.2 功能單體的選擇39-40
• 3.2.3 交聯(lián)劑的選擇40
• 3.2.4 模板分子、功能單體與交聯(lián)劑配比的優(yōu)化40-41
• 3.2.5 吸附介質(zhì)的選擇41-42
• 3.2.6 引發(fā)劑、引發(fā)方式和引發(fā)時(shí)間的確定42
• 3.2.7 模板分子的洗脫42-43
• 3.3 分子印跡聚合物膜的性能表征43-45
• 3.3.1 結(jié)構(gòu)特性43-44
• 3.3.2 分子印跡聚合物膜對(duì)桔霉素的平衡結(jié)合實(shí)驗(yàn)44-45
• 3.3.3 分子印跡聚合物膜對(duì)桔霉素的吸附動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)45
• 3.4 桔霉素酶標(biāo)抗原的合成45-46
• 3.5 BELISA條件優(yōu)化46-47
• 3.5.1 酶標(biāo)濃度的優(yōu)化46-47
• 3.5.2 標(biāo)樣稀釋液的優(yōu)化47
• 3.5.3 仿生抗體包被量的優(yōu)化47
• 3.6 BELISA方法的分析特征量47-49
• 3.6.1 BELISA方法的選擇性47-48
• 3.6.2 仿生抗體對(duì)五種毒素的交叉反應(yīng)48-49
• 3.7 樣品基質(zhì)影響及消除49-50
• 3.7.1 三種食品樣品的檢出限50
• 3.8 實(shí)際樣品的添加回收實(shí)驗(yàn)50-51
• 3.9 BELISA方法的準(zhǔn)確性51-53
• 4 結(jié)論53-54
• 5 展望54-55
• 6 參考文獻(xiàn)55-65
• 7 攻讀碩士期間發(fā)表論文情況65-66
• 8 致謝66

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