本文關(guān)鍵詞：亞硒酸化β-乳球蛋白抗衰老活性的研究

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【摘要】：本實驗亞硒酸化β-乳球蛋白為研究對象,考察了其亞急性毒性和急性毒性,通過毒理學實驗確定安全劑量后,建立D-半乳糖亞急性衰老模型,從衰老的自由基損傷學說和神經(jīng)內(nèi)分泌學說的角度出發(fā),應(yīng)用行為學檢測、生化指標檢測、腦組織病理學檢測以及實時熒光定量PCR技術(shù)探討了亞硒酸化p-乳球蛋白的抗衰老活性及其延緩衰老的作用機制。首先,進行亞硒酸化p-乳球蛋白的急性和亞急性毒理試驗,通過改良寇氏法計算出亞硒酸化p-乳球蛋白對昆明種小鼠的半數(shù)致死量(LDso)為15.94mg Se/kg。其次,采用頸背部皮下注射D-半乳糖建立衰老小鼠模型,研究了亞硒酸化β-乳球蛋白的抗衰老活性。在行為學測試中,亞硒酸化β-乳球蛋白給藥組均能縮短衰老小鼠的尋臺潛伏期,增加穿越平臺的次數(shù),提高空間探索試驗中小鼠穿越平臺的次數(shù),在一定程度上延緩衰老小鼠空間學習記憶能力的衰退。測定各組小鼠的生化指標,結(jié)果表明,亞硒酸化p-乳球蛋白能顯著降低血清和腦組織中乙酰膽堿酯酶的活性,維持膽堿能系統(tǒng)的穩(wěn)定,從而延緩衰老。不同劑量的亞硒酸化p-乳球蛋白可在不同程度上提高GSH-Px和SOD的活性,減少各組織中MDA的含量。HE染色觀察大腦皮層發(fā)現(xiàn),灌喂亞硒酸化β-乳球蛋白后,能在一定程度上減緩神經(jīng)元細胞的減少和形變速度,保護大腦皮層的正常形態(tài)結(jié)構(gòu)。最后,小鼠腦、肝臟組織的實時熒光定量PCR實驗結(jié)果表明：與模型組相比,中劑量組小鼠腦、肝臟組織中的GPX1、GPX3、GPX4的表達量明顯升高。以上結(jié)果說明,亞硒酸化p-乳球蛋白能明顯的延緩D-gal致衰老小鼠的衰老進程,具有良好的抗衰老作用。
【關(guān)鍵詞】：亞硒酸化β-乳球蛋白 毒性試驗 抗氧化 基因表達
【學位授予單位】：天津科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：TS201.4;TS201.21
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 1 前言9-21
• 1.1 衰老9
• 1.2 衰老學說及其研究進展9-13
• 1.2.1 自由基損傷學說10-11
• 1.2.2 免疫功能下降學說11
• 1.2.3 神經(jīng)內(nèi)分泌學說11
• 1.2.4 端粒學說11-12
• 1.2.5 遺傳基因?qū)W說12
• 1.2.6 衰老的其他學說12-13
• 1.3 硒的研究概況13-14
• 1.3.1 硒的來源和分布13
• 1.3.2 硒毒理學研究進展13-14
• 1.4 硒的補充14-15
• 1.5 硒的抗衰老生物學基礎(chǔ)15-18
• 1.5.1 硒與抗氧化15-16
• 1.5.2 硒與機體免疫16-17
• 1.5.3 硒與腦功能17
• 1.5.4 硒與內(nèi)分泌系統(tǒng)17-18
• 1.6 研究的目的與內(nèi)容18-21
• 1.6.1 研究的目的及意義18-19
• 1.6.2 研究內(nèi)容19-21
• 2 材料與方法21-33
• 2.1 實驗材料儀器與設(shè)備21-23
• 2.1.1 實驗動物21
• 2.1.2 受試材料21
• 2.1.3 實驗試劑與藥品21-22
• 2.1.4 實驗儀器22-23
• 2.2 硒酸化β-乳球蛋白的制備及安全性分析23
• 2.2.1 硒酸化β-乳球蛋白的制備23
• 2.2.2 硒酸化β-乳球蛋白的毒性實驗23
• 2.3 硒酸化β-乳球蛋白抗衰老活性實驗?zāi)Ｐ偷慕?/span>23-24
• 2.4 Morris水迷宮(Morris water maze,MWM)測試24-25
• 2.5 各組小鼠組織形態(tài)學檢測及方法25-26
• 2.5.1 臟器指數(shù)的測定25
• 2.5.2 HE染色觀察D-gal衰老小鼠大腦皮層組織形態(tài)學變化25-26
• 2.6 小鼠血清、腦、肝臟中硒含量的測定26-27
• 2.6.1 樣品制備26-27
• 2.6.2 樣品前處理27
• 2.6.3 樣品測定27
• 2.7 小鼠乙酰膽堿酯酶及抗氧化指標的測定27-29
• 2.7.1 樣品制備27
• 2.7.2 乙酰膽堿酯酶的測定27
• 2.7.3 抗氧化系統(tǒng)的測定27-29
• 2.8 小鼠腦、肝臟組織GSH-Px相關(guān)基因mRNA表達水平的檢測及方法29-32
• 2.8.1 引物設(shè)計與合成29-30
• 2.8.2 小鼠肝臟和腦組織總RNA的提取30-31
• 2.8.3 小鼠肝臟和腦組織反轉(zhuǎn)錄cDNA第一鏈的合成31
• 2.8.4 小鼠肝臟和腦組織實時定量Real-Time PCR31-32
• 2.9 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析32-33
• 3 結(jié)果與討論33-48
• 3.1 亞硒酸化β-乳球蛋白的毒性試驗33-34
• 3.1.1 亞硒酸化β-lg急性毒性劑量范圍的確定33
• 3.1.2 受試物半數(shù)致死量(LD50)的確定33-34
• 3.2 小鼠模型的建立34-35
• 3.2.1 各組小鼠體征變化34
• 3.2.2 亞硒酸化β-乳球蛋白對衰老小鼠體重的影響34-35
• 3.3 水迷宮實驗(Morris water maze,MWM)35-38
• 3.4 小鼠組織形態(tài)學38-40
• 3.4.1 亞硒酸化β-lg對小鼠臟器指數(shù)的影響38
• 3.4.2 腦組織HE染色結(jié)果38-40
• 3.5 亞硒酸化β-乳球蛋白對硒含量的影響40-41
• 3.6 亞硒酸化β-乳球蛋白對乙酰膽堿酯酶的影響41-43
• 3.7 亞硒酸化β-lg對D-gal小鼠抗氧化指標的影響43-47
• 3.7.1 亞硒酸化β-lg對腦蛋白含量的影響43
• 3.7.2 亞硒酸化β-lg對GSH-Px活性的影響43-44
• 3.7.3 亞硒酸化β-lg對SOD活性的影響44-45
• 3.7.4 亞硒酸化β-lg對丙二醛(MDA)含量的影響45-47
• 3.8 小鼠腦、肝組織中GSH-Px相關(guān)基因mRNA表達水平的測定47-48
• 4 結(jié)論48-50
• 5 展望50-51
• 6 參考文獻51-58
• 7 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文及申請專利情況58-59
• 8 致謝59

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1 付敏;王武;方紅美;左君;何青云;陳從貴;;瞬變高壓對β-乳球蛋白變性的影響[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2008年36期

2 李丹丹;張楠楠;曹陽陽;劉寧;;利用殼聚糖選擇性去除乳清中β-乳球蛋白[J];中國乳品工業(yè);2009年11期

3 付敏;王武;方紅美;左君;何青云;陳從貴;;瞬變高壓對β-乳球蛋白變性的影響[J];Animal Husbandry and Feed Science;2009年01期

4 張海英;劉e，

本文編號：556570