【摘要】：禽流感不僅危害養(yǎng)殖業(yè),造成大量經(jīng)濟(jì)損失,還嚴(yán)重威脅著人類(lèi)生命健康,接種疫苗是目前最有效的預(yù)防手段。禽流感疫苗長(zhǎng)期使用雞胚生產(chǎn),存在諸多弊端。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)方式因其優(yōu)勢(shì)顯著,逐漸在國(guó)際上得到認(rèn)可。其中無(wú)血清懸浮培養(yǎng)易于放大、實(shí)現(xiàn)高密度培養(yǎng),且成本較低、穩(wěn)定性高,是流感疫苗生產(chǎn)的主要方向。目前我國(guó)市場(chǎng)上還沒(méi)有用無(wú)血清懸浮培養(yǎng)細(xì)胞生產(chǎn)H9亞型禽流感疫苗的產(chǎn)品,亟需對(duì)該工藝過(guò)程進(jìn)行研究,建立高病毒產(chǎn)量、適合工業(yè)化生產(chǎn)的工藝。本文從批培養(yǎng)和離心換液兩種極端的工藝入手,分析二者產(chǎn)毒差異大的主要原因是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、代謝副產(chǎn)物和環(huán)境三方面條件的不同。離心工藝滴度高,但實(shí)際生產(chǎn)中不易實(shí)現(xiàn),本文以?xún)煞N工藝的差異為指導(dǎo),改進(jìn)批培養(yǎng)工藝,提高產(chǎn)毒量。對(duì)于批培養(yǎng)工藝缺乏營(yíng)養(yǎng)的問(wèn)題,在批培養(yǎng)工藝基礎(chǔ)上添加各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)探究能否提升產(chǎn)毒量。結(jié)果表明,單獨(dú)添加葡萄糖或谷氨酰胺不能提高病毒產(chǎn)量;流加濃縮培養(yǎng)基,病毒滴度可達(dá)到2~(10.3)HAU/25μl,但工藝復(fù)雜;稀釋流加原培養(yǎng)基,可達(dá)到2~(9.0)HAU/25μl,工藝簡(jiǎn)潔,但還可以通過(guò)調(diào)節(jié)工藝參數(shù)進(jìn)一步提高滴度。對(duì)于批培養(yǎng)工藝代謝副產(chǎn)物積累的問(wèn)題,在離心換液保證營(yíng)養(yǎng)充足的條件下添加代謝副產(chǎn)物乳酸或銨,探究代謝副產(chǎn)物對(duì)病毒生產(chǎn)的影響。結(jié)果表明接毒時(shí)40 mM以?xún)?nèi)的乳酸物質(zhì)或8 mM以?xún)?nèi)的銨,其物質(zhì)本身都不影響產(chǎn)出病毒的最大滴度。對(duì)于批培養(yǎng)和離心工藝產(chǎn)毒期環(huán)境不同的問(wèn)題,優(yōu)化產(chǎn)毒期pH和溫度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)pH≤6.0會(huì)導(dǎo)致HA滴度下降,產(chǎn)毒期pH控制在7.0±0.2為宜,且適當(dāng)降低溫度(30℃-35℃)有利于產(chǎn)毒。綜合對(duì)上述條件的探究,本文建立了稀釋流加降溫工藝。經(jīng)反應(yīng)器驗(yàn)證,HA滴度可達(dá)到2~(10.6±0.2) HAU/25μl,單細(xì)胞產(chǎn)毒量為(16060±786)virions/cell,超過(guò)離心工藝水平。該工藝簡(jiǎn)潔高效,為流感疫苗工業(yè)化生產(chǎn)提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支持。
【學(xué)位授予單位】：華東理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：TQ460.6

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5 趙殿國(guó);王健中;;食用注射禽流感疫苗后的禽肉是否安全[J];現(xiàn)代畜牧獸醫(yī);2005年12期

6 ;中國(guó)有9家企業(yè)有資格生產(chǎn)禽流感疫苗[J];飼料工業(yè);2005年23期

7 ;我國(guó)禽流感疫苗研制成功并廣泛使用[J];食品工業(yè)科技;2005年03期

8 ;我國(guó)H5N1禽流感疫苗研究取得新突破[J];中國(guó)食品學(xué)報(bào);2014年07期

9 林春驛;農(nóng)業(yè)部再次重申只有九家企業(yè)生產(chǎn)的禽流感疫苗為正規(guī)疫苗[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2005年11期

10 欒雪梅;;研發(fā)[J];中國(guó)處方藥;2008年04期

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1 許傲天;吳磊;馬君;;禽流感疫苗的研究進(jìn)展[A];全國(guó)人畜共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

2 羅月波;羅小平;羅濤;莊慶均;;對(duì)綦江縣產(chǎn)蛋雞禽流感H5免疫的一些建議[A];第七屆重慶市飼料工業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略研討會(huì)暨第八屆飼料工業(yè)協(xié)會(huì)會(huì)員大會(huì)論文集[C];2010年

3 楊松全;吳登虎;姚勇;滕明生;楊曉黎;潘永全;;孔雀免疫禽流感重組活疫苗的血清學(xué)效果觀察[A];第四屆中國(guó)畜牧科技論壇論文集[C];2009年

4 肖金東;楊秀環(huán);;不同種家禽紅細(xì)胞對(duì)水禽禽流感抗體效價(jià)的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十四次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

5 徐守榮;林金杏;李國(guó)強(qiáng);;寧海土雞禽流感抗體消長(zhǎng)規(guī)律的研究[A];首屆中國(guó)黃羽肉雞行業(yè)發(fā)展大會(huì)會(huì)刊[C];2008年

6 陳瑞愛(ài);溫志芬;唐滿(mǎn)華;潘洪波;;禽流感滅活油乳劑苗不同免疫劑量的免疫效力比較[A];家禽研究最新進(jìn)展——第十一次全國(guó)家禽學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2003年

7 張成蓮;;雞場(chǎng)禽流感免疫抗體監(jiān)測(cè)與分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第十二次人獸共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第六屆第十四次教學(xué)專(zhuān)業(yè)委員會(huì)論文集[C];2012年

8 張濟(jì)培;陳建紅;劉佑明;張福英;廖潔丹;陳岡;劉少彬;何鎮(zhèn);;蜂-靈散對(duì)不同水禽禽流感疫苗免疫促進(jìn)效果的比較[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

9 朱鳳先;荊汝頂;郝付全;盧曉輝;宋予震;;禽流感與新城疫鑒別診斷[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十四次學(xué)術(shù)研討會(huì)、中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

10 朱方兵;宋予震;董青;朱魁元;朱鳳先;;雞禽流感抗體監(jiān)測(cè)分析與防范[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

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3 葛文斌;紅星農(nóng)場(chǎng)三項(xiàng)措施預(yù)防禽流感[N];黑龍江經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

4 記者　 董映璧;俄將研制口服抗禽流感疫苗[N];科技日?qǐng)?bào);2006年

5 金海;楊凌造禽流感疫苗問(wèn)世[N];陜西科技報(bào);2006年

6 萬(wàn)豐 謝宗博 高鐵彬;緊急撥經(jīng)費(fèi) 嚴(yán)防禽流感[N];中國(guó)財(cái)經(jīng)報(bào);2005年

7 毛立軍;市場(chǎng)上出現(xiàn)假冒偽劣禽流感疫苗[N];人民政協(xié)報(bào);2004年

8 記者 劉翔霄;越南禽流感疫苗將試驗(yàn)人體接種[N];新華每日電訊;2005年

9 記者 王漪;我國(guó)人用禽流感疫苗獲批[N];北京商報(bào);2009年

10 ;加強(qiáng)禽流感疫苗監(jiān)督管理[N];湖北日?qǐng)?bào);2004年

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1 金榮仲;應(yīng)用家蠶桿狀病毒表面展示技術(shù)生產(chǎn)人用禽流感疫苗的研究[D];浙江大學(xué);2008年

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1 彭雯娟;無(wú)血清懸浮培養(yǎng)MDCK細(xì)胞生產(chǎn)H9亞型禽流感疫苗的關(guān)鍵控制點(diǎn)探究[D];華東理工大學(xué);2017年

2 楊炳飛;重組大流行流感疫苗的構(gòu)建及制備工藝研究[D];浙江理工大學(xué);2011年

3 趙娜;雞白細(xì)胞介素-6在畢赤酵母中的表達(dá)及生物活性檢測(cè)[D];揚(yáng)州大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：2639102