本文關(guān)鍵詞：出芽短梗霉（UVMU3-1）漆酶活性物質(zhì)性質(zhì)分析及其降解氯酚的研究

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【摘要】：漆酶的全稱為對(duì)-二酚:(雙)氧氧化還原酶,有文章中也稱為多酚氧化酶酚酶,漆酚氧化酶等。漆酶作為一種重要的氧化還原酶類,來(lái)源廣泛,并且在降解酚類等有機(jī)污染物領(lǐng)域發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用,并且其只需要分子氧作為共底物,水是唯一的副產(chǎn)物,因此是一種天然的環(huán)保酵素。本文以出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)無(wú)色素突變株UVMU3-1作為菌種,對(duì)其產(chǎn)生的一種小分子胞外酶類進(jìn)行分析。該分子具有類似漆酶的化學(xué)性質(zhì),因此稱為漆酶活性物質(zhì)。應(yīng)用各種分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定的手段,對(duì)這種胞外小分子漆酶活性物質(zhì)進(jìn)行性質(zhì)分析。另外,還探究了其是否具有與漆酶相似的降解污染物的功能,以期挖掘其重要的作用和價(jià)值。試驗(yàn)結(jié)果如下:(1)通過(guò)不同規(guī)格的透析袋(0-500 D、500D-1000D、1000D-2000D、2000D-3000 D)對(duì)粗酶液進(jìn)行透析,確定該小分子漆酶活性物質(zhì)應(yīng)小于500 D,并除去大分子物質(zhì)。隨后通過(guò)硅膠柱層析實(shí)驗(yàn),選用乙酸乙酯作為流動(dòng)相,除去極性較大的物質(zhì)。(2)通過(guò)液質(zhì)聯(lián)機(jī)實(shí)驗(yàn)、高分辨質(zhì)譜和核磁共振色譜鑒定出該小分子的組分為504.44,是一種三糖物質(zhì),經(jīng)過(guò)漆酶活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)和固體分離產(chǎn)物的薄層層析(TLC)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)出該小分子的物質(zhì)并不是漆酶活性物質(zhì),但是發(fā)現(xiàn)四種分子量不同的糖分子,其質(zhì)荷比 m/z 分別為 203.0、365.0、527.0、689.0。(3)研究發(fā)現(xiàn),UVMU3-1菌株的發(fā)酵罐培養(yǎng)屬于典型的微生物生長(zhǎng)規(guī)律,即0-14 h為停滯期、14h-32h為對(duì)數(shù)期、32h-72h為穩(wěn)定期,72h之后進(jìn)入衰亡期。發(fā)酵罐培養(yǎng)UVMU3-1在32 h之后進(jìn)入漆酶活性物質(zhì)的積累階段,其72 h漆酶活性物質(zhì)積累量可以達(dá)到895.56 U/L。(4)普通的漆酶在降解氯酚類化合物方面具有很大的作用,本實(shí)驗(yàn)利用分離純化得到的小分子漆酶活性物質(zhì)與含有2,4,6-三氯苯酚的溶液進(jìn)行降解試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)無(wú)色素突變菌株UVMU3-1經(jīng)搖瓶培養(yǎng)4天后,經(jīng)過(guò)初步的分離純化,其酶活達(dá)到329.57U/L。在50℃條件下與濃度為10mg/L的2,4,6-三氯苯酚溶液共反應(yīng)3天后,其降解率可以達(dá)到60.23%。該小分子的漆酶活性物質(zhì)不同于普通的漆酶,因此其反應(yīng)產(chǎn)物可能也不同于普通漆酶降解氯酚類化合物的降解產(chǎn)物。本研究未檢測(cè)出該小分子的漆酶活性物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu),因此不能推測(cè)出漆酶活性物質(zhì)降解氯酚類化合物的反應(yīng)機(jī)理。還需要經(jīng)過(guò)后續(xù)的試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證,但是通過(guò)該研究確定了實(shí)驗(yàn)條件及方法,為后續(xù)的研究奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：X703;Q936

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