本文關鍵詞：遼寧堿蓬SINAC6、SINAC7基因克隆及功能分析

  更多相關文章： 遼寧堿蓬 NAC轉錄因子 轉基因擬南芥 非生物脅迫

【摘要】：NAC轉錄因子在植物的生長發(fā)育,抵抗干旱、高鹽、低溫、損傷、病毒,以及其它生理過程中起著重要的調控作用。遼寧堿蓬是一種鹽生植物,有大量的耐鹽基因待研究。本論文以實驗室前期獲得的遼寧堿蓬的兩個NAC轉錄因子(命名為SlNAC6、SlNAC7)的EST序列為對象,進行了基因克隆和功能研究。RACE技術獲得了SlNAC6、SlNAC7 cDNA全長序列,SlNAC6 cDNA 1301 bp,GenBank登錄號為KR002106,編碼353個氨基酸,GenBank登錄號為KR002106;SlNAC7cDNA 1863bp,編碼573個氨基酸,GenBank登錄號為KR002107。多重序列比對及進化樹分析表明,SlNAC6屬于ONAC003亞家族,SlNAC7屬于ANAC011亞家族。實時定量PCR技術分析兩個轉錄因子基因的表達特性。SlNAC6與SlNAC7在遼寧堿蓬的根、莖、葉中均有表達,葉中表達量較高。SlNAC6、SlNAC7響應鹽、低溫、干旱和ABA脅迫。酵母單雜交分析結果顯示,SlNAC6、SlNAC7及SlNAC6的C端、SlNAC7的C端均具有轉錄激活活性,而保守的N端均不具有轉錄激活活性。推測SlNAC6、SlNAC7是轉錄因子,轉錄激活域在C端�；驑屴D化法分別將SlNAC6-GFP、SlNAC7-GFP融合蛋白轉化至洋蔥表皮細胞,結果顯示,SlNAC6-GFP、SlNAC7-GFP融合蛋白分布于細胞核、細胞質中,推測分布于細胞核中的SlNAC6、SlNAC7是轉錄因子,在核內行使轉錄因子的功能,分布于細胞質中的SlNAC6、SlNAC7可能具有其他功能。蘸花法分別將SlNAC6與SlNAC7轉化擬南芥,獲得純合的轉基因擬南芥。對轉基因擬南芥進行非生物脅迫處理,結果顯示,SlNAC6與SlNAC7提高了轉基因擬南芥對于鹽、低溫和干旱的耐受性。對遼寧堿蓬非生物脅迫相關NAC轉錄因子的研究,不僅有助于理解植物抗逆機制,而且也將為抗逆作物培育奠定基礎。
【關鍵詞】：遼寧堿蓬 NAC轉錄因子 轉基因擬南芥 非生物脅迫
【學位授予單位】：遼寧師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：Q943.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-11
• 1 文獻綜述11-19
• 1.1 脅迫相關的植物轉錄因子11-13
• 1.1.1 MYB轉錄因子11-12
• 1.1.2 WRKY轉錄因子12-13
• 1.1.3 AP2/EREBP轉錄因子13
• 1.2 NAC轉錄因子13-17
• 1.2.1 NAC轉錄因子的結構與分類14-15
• 1.2.2 NAC轉錄因子的功能15-16
• 1.2.3 NAC轉錄因子的調控機制16-17
• 1.3 遼寧堿蓬17
• 1.4 本研究的目的及意義17-18
• 1.5 研究技術路線18-19
• 2 遼寧堿蓬SlNAC6、SlNAC7基因克隆及序列分析19-34
• 2.1 實驗材料19-20
• 2.1.1 材料19
• 2.1.2 試劑及耗材19
• 2.1.3 引物及測序19
• 2.1.4 儀器設備19-20
• 2.2 實驗方法20-25
• 2.2.1 遼寧堿蓬葉片總RNA的提取和檢測20
• 2.2.2 SlNAC6、SlNAC7 EST序列驗證20-25
• 2.2.3 遼寧堿蓬SlNAC6、SlNAC7基因序列分析25
• 2.3 實驗結果25-33
• 2.3.1 遼寧堿蓬總RNA的提取25-26
• 2.3.2 SlNAC6、SlNAC7 EST序列驗證26-28
• 2.3.3 SlNAC6、SlNAC7基因序列分析28-33
• 2.4 討論33-34
• 3 遼寧堿蓬SlNAC6、SlNAC7基因表達特性分析34-42
• 3.1 實驗材料34-35
• 3.1.1 材料34
• 3.1.2 試劑及耗材34
• 3.1.3 引物及測序34
• 3.1.4 儀器設備34-35
• 3.2 實驗方法35-37
• 3.2.1 遼寧堿蓬幼苗的栽培35
• 3.2.2 遼寧堿蓬的非生物脅迫處理35-36
• 3.2.3 SlNAC6、SlNAC7基因表達特性分析36-37
• 3.3 實驗結果37-41
• 3.3.1 遼寧堿蓬總RNA提取37-38
• 3.3.2 遼寧堿蓬SlNAC6、SlNAC7表達特性38-41
• 3.5 討論41-42
• 4 遼寧堿蓬SlNAC6、SlNAC7轉錄激活作用分析42-52
• 4.1 實驗材料42-43
• 4.1.1 菌株及載體42
• 4.1.2 酶及化學試劑42
• 4.1.3 引物及測序42
• 4.1.4 儀器設備42-43
• 4.2 實驗方法43-48
• 4.2.1 克隆載體的構建43-45
• 4.2.2 表達載體的構建45-48
• 4.2.3 轉錄激活作用分析48
• 4.3 實驗結果48-51
• 4.3.1 酵母表達載體的構建48-50
• 4.3.2 轉錄激活作用50-51
• 4.4 討論51-52
• 5 遼寧堿蓬SlNAC6、SlNAC7亞細胞定位分析52-59
• 5.1 實驗材料52-53
• 5.1.1 材料、菌株及載體52
• 5.1.2 酶及化學試劑52
• 5.1.3 培養(yǎng)基52
• 5.1.4 引物及測序52
• 5.1.5 儀器設備52-53
• 5.2 實驗方法53-57
• 5.2.1 克隆載體的構建53
• 5.2.2 表達載體的構建53-55
• 5.2.3 基因槍法轉化洋蔥表皮細胞55-57
• 5.3 實驗結果57-58
• 5.3.1 亞細胞定位的載體構建57-58
• 5.3.2 亞細胞定位58
• 5.4 討論58-59
• 6 SlNAC6、SlNAC7轉化擬南芥及轉基因擬南芥抗逆性分析59-74
• 6.1 實驗材料59-60
• 6.1.1 材料、菌株及載體59
• 6.1.2 酶及化學試劑59
• 6.1.3 培養(yǎng)基59
• 6.1.4 引物及測序59
• 6.1.5 儀器設備59-60
• 6.2 實驗方法60-67
• 6.2.1 克隆載體的構建60
• 6.2.2 表達載體的構建60-62
• 6.2.3 農桿菌轉化法62-63
• 6.2.4 擬南芥的種植63-64
• 6.2.5 蘸花法轉化擬南芥64
• 6.2.6 轉基因植株的篩選64-65
• 6.2.7 轉基因植株的鑒定-半定量PCR65-66
• 6.2.8 轉基因植株的抗性分析66-67
• 6.3 實驗結果67-73
• 6.3.1 植物表達載體的構建67-68
• 6.3.2 轉基因擬南芥的篩選68-69
• 6.3.3 轉基因植株的鑒定-半定量PCR69-70
• 6.3.4 轉基因擬南芥的抗性分析70-73
• 6.4 討論73-74
• 結論74-75
• 參考 文獻75-79
• 附錄A 培養(yǎng)基的配置79-82
• 附錄B DNA Marker82-83
• 附錄C λ-Hind Ⅲ digest DNA Marker83-84
• 附錄D pGBKT7載體圖譜84-85
• 附錄E pEGAD載體圖譜85-86
• 附錄F pBI121載體圖譜86-87
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表學術論文情況87-88
• 致謝88

【相似文獻】

中國期刊全文數據庫 前3條

1 李秋莉,高曉蓉,袁曉東,劉大偉,安利佳;一步PCR快速擴增遼寧堿蓬甜菜堿醛脫氫酶cDNA3′末端序列(英文)[J];遺傳;2002年02期

2 李秋莉,高曉蓉,袁曉東,劉大偉,安利佳;一步PCR法快速擴增遼寧堿蓬膽堿單加氧酶cDNA3′末端序列[J];植物學通報;2002年05期

3 ;[J];;年期

中國重要會議論文全文數據庫 前1條

1 李秋莉;高曉蓉;劉大偉;安利佳;;遼寧堿蓬膽堿加單氧酶基因(CMO)克隆及轉化煙草的研究[A];中國生物工程學會第三次全國會員代表大會暨學術討論會論文摘要集[C];2001年

中國碩士學位論文全文數據庫 前10條

1 宿明星;遼寧堿蓬S/NAC4、S/NAC10轉錄因子基因克隆及功能分析[D];遼寧師范大學;2015年

2 孫穎顥;遼寧堿蓬SlNAC8基因克隆和功能分析[D];遼寧師范大學;2015年

3 施鶴;遼寧堿蓬SINAC6、SINAC7基因克隆及功能分析[D];遼寧師范大學;2015年

4 鄭音;遼寧堿蓬營養(yǎng)成分分析及有益內生菌篩選[D];遼寧師范大學;2011年

5 修玉萍;遼寧堿蓬病蟲害調查及紅斑病病原菌生物學特性研究[D];遼寧師范大學;2012年

6 楊星;遼寧堿蓬SlNAC2基因克隆及功能分析[D];遼寧師范大學;2014年

7 劉大偉;遼寧堿蓬甜菜堿和甜菜堿醛脫氫酶的研究[D];大連理工大學;2002年

8 曹盈;鹽生植物遼寧堿蓬（Suaeda liaotungensis K.）轉錄組測序及分析[D];遼寧師范大學;2013年

9 任偉重;遼寧堿蓬白腐病病原菌生物學特性及2株內生菌生物活性的研究[D];遼寧師范大學;2012年

10 馬曉倩;遼寧堿蓬SlPEAMT基因啟動子分離及鹽誘導功能分析[D];遼寧師范大學;2012年

，

本文編號：655540