本文關(guān)鍵詞：耐砷細菌的分離、鑒定及其對砷的氧化與還原能力研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：利用微生物修復(fù)砷污染環(huán)境由于具備經(jīng)濟、環(huán)保且無二次污染等優(yōu)點,得到了相關(guān)學(xué)者的廣泛關(guān)注。近年來,研究者在利用微生物修復(fù)砷污染環(huán)境的研究中取得了較大進展,但總體而言,相關(guān)的研究大多還處于實驗室試驗階段,在推廣和應(yīng)用中依然存在著不少技術(shù)障礙。因此,在已有研究基礎(chǔ)上,進一步探究微生物與砷的互作關(guān)系,有助于為砷污染微生物修復(fù)技術(shù)的應(yīng)用提供理論依據(jù)和生物材料。本研究從湖南石門采集的砷污染土壤樣品中分離、篩選出優(yōu)勢耐砷細菌,對其進行生理生化及分子鑒定,并進一步探究了耐砷細菌對砷的氧化與還原能力。通過批量試驗,得到了如下結(jié)果：1,利用稀釋涂布法從8個砷污染土壤樣品中分離得到28株耐砷細菌,在此基礎(chǔ)上利用砷濃度梯度法進行篩選,發(fā)現(xiàn)編號為2-2、4-3、8-5的3株細菌在As(V)濃度達2000mg·L-1的脅迫平板中均表現(xiàn)出較好的耐受性,并在含砷的液態(tài)LB培養(yǎng)基中也表現(xiàn)出了較好的長勢,表明三株細菌對砷具有很強的耐性。2,將篩得的3株優(yōu)勢耐砷細菌進行生理生化鑒定及16SrDNA基因序列分析,結(jié)果表明：菌株2-2為Pseudomonas taiwanensis(臺灣假單胞菌),菌株4-3為Pseudomonas monteilii(蒙氏假單胞菌),菌株8-5為Pseudomonas sp,(假單胞菌屬菌株),相似度均為100%。將該3株細菌的基因序列遞交NCBI獲得的基因序列號分別為：KP313734、KP313735和KP313736。3,在實驗室條件下,進行批量試驗進一步研究了3株耐砷優(yōu)勢菌株對砷的氧化與還原能力。結(jié)果表明,3株耐砷細菌對于As(Ⅲ)均不具備氧化能力,但是,三株細菌對As(V)均具有較強的還原能力,Pseudomonas taiwanensis和Pseudomonas monteilii均能夠在6h內(nèi)能將LB培養(yǎng)液中濃度達10mg·L-1的As(Ⅴ)全部還原,產(chǎn)物為As(Ⅲ)。此外,3株細菌對環(huán)境中的As(Ⅲ)和As(Ⅴ)均表現(xiàn)出一定的生物吸附能力。
【關(guān)鍵詞】：砷 細菌 耐性 氧化 還原
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：X172
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 第一章 緒論10-21
• 1.1 課題的研究背景、內(nèi)容、目的及意義10-11
• 1.1.1 課題的研究背景10
• 1.1.2 課題的研究內(nèi)容、目的和意義10-11
• 1.2 技術(shù)路線圖11
• 1.3 綜述11-21
• 1.3.1 環(huán)境中砷的主要來源11-12
• 1.3.2 砷的存在形態(tài)及毒性12-13
• 1.3.3 土壤砷污染狀況13-14
• 1.3.4 微生物在砷地球化學(xué)循環(huán)中的作用14-15
• 1.3.5 微生物對三價砷的氧化15-16
• 1.3.6 微生物對五價砷的還原16-19
• 1.3.7 微生物對砷的甲基化作用19-20
• 1.3.8 微生物在砷污染修復(fù)環(huán)境中的作用20-21
• 第二章 耐砷優(yōu)勢細菌的分離及篩選21-29
• 2.1 試驗材料、儀器、試劑21-22
• 2.1.1 試驗材料21
• 2.1.2 試驗儀器21
• 2.1.3 試驗試劑21-22
• 2.2 實驗方法22-24
• 2.2.1 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制22
• 2.2.2 土壤總砷的測定22
• 2.2.3 耐砷細菌的分離、篩選22-24
• 2.2.4 數(shù)據(jù)處理24
• 2.3 試驗結(jié)果24-27
• 2.3.1 耐砷細菌的初篩24-25
• 2.3.2 砷濃度梯度法篩選25-26
• 2.3.3 液體培養(yǎng)法篩選26-27
• 2.4 討論27-28
• 2.4.1 砷對微生物生長的抑制27
• 2.4.2 微生物對砷的耐受27-28
• 2.5 小結(jié)28-29
• 第三章 耐砷細菌的形態(tài)及分子生物學(xué)鑒定29-39
• 3.1 實驗儀器和試劑29-30
• 3.1.1 實驗材料29
• 3.1.2 實驗儀器29-30
• 3.1.3 實驗試劑30
• 3.2 耐砷細菌形態(tài)學(xué)鑒定30
• 3.3 耐砷細菌分子生物學(xué)鑒定30-32
• 3.3.1 實驗試劑的制備30-31
• 3.3.2 DNA的提取31
• 3.3.3 制膠31
• 3.3.4 點樣31
• 3.3.5 電泳31
• 3.3.6 PCR擴增31
• 3.3.7 擴增產(chǎn)物的序列測定及相關(guān)數(shù)據(jù)處理31-32
• 3.4 結(jié)果與分析32-38
• 3.4.1 耐砷細菌形態(tài)學(xué)及生理生化鑒定32-33
• 3.4.2 耐砷細菌分子生物學(xué)鑒定33-38
• 3.5 小結(jié)38-39
• 第四章 三株耐砷細菌對砷氧化還原作用探究39-49
• 4.1 試驗材料、儀器、試劑39-40
• 4.1.1 試驗材料39
• 4.1.2 試驗儀器39-40
• 4.1.3 試驗試劑40
• 4.2 實驗方法40-41
• 4.2.1 牛肉膏蛋白胨培液體養(yǎng)基的配制40
• 4.2.2 含砷細菌培養(yǎng)液的制備40
• 4.2.3 培養(yǎng)液中不同形態(tài)砷含量的測定40-41
• 4.2.4 數(shù)據(jù)處理41
• 4.3 實驗結(jié)果41-45
• 4.3.1 三株耐砷細菌對As(Ⅲ)的氧化能力探究41-43
• 4.3.2 三株耐砷細菌對As(Ⅴ)的還原能力探究43-45
• 4.4 討論45-48
• 4.4.1 三株耐砷細菌對三價砷的氧化45
• 4.4.2 三株耐砷細菌對五價砷的還原45-48
• 4.5 小結(jié)48-49
• 第五章 全文結(jié)論與展望49-51
• 5.1 全文結(jié)論49-50
• 5.2 展望50-51
• 參考文獻51-60
• 附錄60-63
• 致謝63-64
• 個人簡歷64

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