本文關(guān)鍵詞：大熊貓和奶牛糞便中纖維素降解菌的篩選與鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本研究以大熊貓和中國(guó)荷斯坦奶牛糞便為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,采用形態(tài)學(xué)觀察、菌株的生理生化實(shí)驗(yàn)、菌株的分子鑒定及酶活性測(cè)定等方法,篩選大熊貓和奶牛糞便纖維素降解菌,旨在為尋找高效纖維素降解菌提供理論依據(jù)。實(shí)驗(yàn)一：纖維素降解菌篩選。纖維素降解菌的篩選包括初篩和復(fù)篩兩個(gè)階段。初篩過(guò)程是將糞樣放入到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中恒溫震蕩培養(yǎng)3 d,然后將發(fā)酵液稀釋并在固體培養(yǎng)基平板中涂布,挑取單菌落進(jìn)行純化培養(yǎng),然后將純化后的菌株滴加到固體培養(yǎng)基中再進(jìn)行培養(yǎng),之后用剛果紅染色進(jìn)行鑒定,選取透明水解圈較大的菌株。菌株的復(fù)篩主要是測(cè)定菌株的CMCase和FPAase兩種酶的酶活性,選取酶活性較高的菌株,進(jìn)行后續(xù)的鑒定。本實(shí)驗(yàn)分別從大熊貓和中國(guó)荷斯坦奶牛糞便樣本各篩選出5株纖維素降解菌。實(shí)驗(yàn)二：纖維素降解菌鑒定。纖維素降解菌的鑒定包括形態(tài)學(xué)觀察、生理生化實(shí)驗(yàn)及分子生物學(xué)鑒定等三個(gè)方面。形態(tài)學(xué)觀察主要包括革蘭氏染色并觀察菌的形狀,觀察菌落的顏色、形狀、菌落大小、透明度、光澤度、質(zhì)地、邊緣特征及隆起形狀等。生理生化實(shí)驗(yàn)參照《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》的有關(guān)方法進(jìn)行生理生化測(cè)定。包括糖醇的發(fā)酵實(shí)驗(yàn)、淀粉的水解實(shí)驗(yàn)、V-P實(shí)驗(yàn)、甲基紅實(shí)驗(yàn)、氧化酶實(shí)驗(yàn)、接觸酶實(shí)驗(yàn)及硝酸鹽還原反應(yīng)等。分子生物學(xué)鑒定主要通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),測(cè)定基因序列,并與Genbank基因庫(kù)的已知序列進(jìn)行比對(duì)分析,鑒定菌株的種類。經(jīng)鑒定從大熊貓和中國(guó)荷斯坦奶牛糞便中篩選得到的纖維素降解株菌分別為白色鏈霉菌(NC020990)、假單胞菌(NC020209)、芽孢桿菌(NC021171)、克雷伯菌(NC016612)、類芽孢桿菌(NC012914)和假單胞菌(NC020209)、志賀氏菌(NC007384)、菠蘿泛菌(NC013956)、嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌(NC010943)及類芽孢桿菌(NC012914)。實(shí)驗(yàn)三：酶活性優(yōu)化測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)酶活性優(yōu)化因素設(shè)定為5個(gè),分別是培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度、pH、接種量及裝液量。通過(guò)單因素優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,測(cè)定菌株酶活性。大熊貓糞便中所篩選的菌株產(chǎn)酶條件及產(chǎn)酶結(jié)果如下：白色鏈霉菌(NC020990)在pH為7,溫度35℃,裝液量30%,接種量2.5%,搖床轉(zhuǎn)速為180 rpm的條件下培養(yǎng)36 h, CMCase為最大值24.732U。假單胞菌(NC020209)在pH為6,溫度25℃,裝液量30%,接種量4%,搖床轉(zhuǎn)速為180 rpm的條件下培養(yǎng)36 h,CMCase為最大值24.362U。芽孢桿菌(NC021171)在pH為6.5,溫度30℃,裝液量30%,接種量2%搖床轉(zhuǎn)速為180 rpm的條件下培養(yǎng)30h,CMCase為最大值23.125 U�？死撞�(NC016612)在pH為6.5,溫度30℃,裝液量30%,接種量2%,搖床轉(zhuǎn)速為180 rpm的條件下培養(yǎng)42 h, CMCase為最大值18.642 U。類芽孢桿菌(NC012914)在pH為7,溫度30℃,裝液量30%,接種量2%,搖床轉(zhuǎn)速為180 rpm的條件下培養(yǎng)48h,CMCase為最大值9.234U通過(guò)單因素優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,測(cè)定菌株酶活性,中國(guó)荷斯坦奶牛糞便中所篩選的菌株產(chǎn)酶條件及產(chǎn)酶結(jié)果如下：假單胞菌(NC020209)在pH為6,溫度25℃,裝液量30%,接種量4%,搖床轉(zhuǎn)速為180 rpm的條件下培養(yǎng)36h,CMCase為最大值23.156U。志賀氏菌(NC007384)在pH為7,溫度為35℃,裝液量40%,接種量2.5%,搖床轉(zhuǎn)速為180 rpm的條件下培養(yǎng)42h,CMCase為最大值21.842U.菠蘿泛菌(NC013956)在pH為6.5,溫度30℃,裝液量30%,接種量3%,搖床轉(zhuǎn)速為180 rpm的條件下培養(yǎng)36h,CMCase為最大值10.624U。嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌(NC010943)在pH為6.5,溫度35℃,裝液量30%,接種量2.5%,搖床轉(zhuǎn)速為180rpm的條件下培養(yǎng)36 h,CMCase為最大值9.942 U。類芽孢桿菌(NC012914)在pH為7,溫度30℃,裝液量30%,接種量2%,搖床轉(zhuǎn)速為180 rpm的條件下培養(yǎng)48 h,CMCCase為最大值9.146U。
【關(guān)鍵詞】：大熊貓 中國(guó)荷斯坦奶牛 纖維素降解菌 篩選 鑒定
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.6
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-13
• 第一章 文獻(xiàn)綜述13-20
• 1 前言13-20
• 1.1 我國(guó)纖維資源現(xiàn)狀13-14
• 1.1.1 農(nóng)作物秸稈13
• 1.1.2 能源類作物13
• 1.1.3 農(nóng)產(chǎn)品加工副產(chǎn)品13-14
• 1.2 纖維的結(jié)構(gòu)及降解菌14-15
• 1.2.1 纖維素的結(jié)構(gòu)與特性14
• 1.2.2 纖維素降解菌14-15
• 1.3 纖維素酶系15-16
• 1.4 纖維素酶的應(yīng)用16-17
• 1.4.1 在飼料產(chǎn)業(yè)中的應(yīng)用16
• 1.4.2 在食品加工業(yè)中的應(yīng)用16-17
• 1.4.3 在能源產(chǎn)業(yè)中的應(yīng)用17
• 1.4.4 在造紙業(yè)中的應(yīng)用17
• 1.4.5 在紡織業(yè)中的應(yīng)用17
• 1.5 纖維素酶的研究進(jìn)展17-18
• 1.5.1 國(guó)外的研究進(jìn)展17-18
• 1.5.2 國(guó)內(nèi)的研究進(jìn)展18
• 1.6 本課題研究的目的和意義18-20
• 第二章 纖維素降解菌的篩選20-26
• 1 材料與方法20-23
• 1.1 材料20-21
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品20
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑20
• 1.1.3 培養(yǎng)基20-21
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法21-23
• 1.2.1 糞樣的處理21
• 1.2.2 菌株的初選21
• 1.2.3 菌株的復(fù)篩21-23
• 2 結(jié)果與分析23-26
• 2.1 纖維素降解菌的初篩結(jié)果23
• 2.2 纖維素降解菌的復(fù)篩23-26
• 2.2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制23-24
• 2.2.2 CMCase和FPAase酶活力測(cè)定結(jié)果24-26
• 第三章 菌株的鑒定及生物學(xué)分析26-49
• 1 材料與方法26-29
• 1.1 材料26
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑26
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器26
• 1.1.3 培養(yǎng)基26
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法26-29
• 1.2.1 菌落形態(tài)學(xué)觀察26-27
• 1.2.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察27
• 1.2.3 菌株的生理生化實(shí)驗(yàn)27
• 1.2.4 菌株的分子生物學(xué)鑒定27-29
• 2 結(jié)果與分析29-49
• 2.1 奶牛糞便中菌株生理生化特性29-38
• 2.1.1 菌株的菌落特征29-31
• 2.1.2 菌株的生理生化實(shí)驗(yàn)31-35
• 2.1.3 菌株的分子鑒定35-38
• 2.2 大熊貓糞便中菌株生理生化特性38-49
• 2.2.1 菌株的菌落特征38-41
• 2.2.2 菌株的生理生化實(shí)驗(yàn)41-45
• 2.2.3 菌株的分子鑒定45-49
• 第四章 纖維素降解菌酶活性比較分析49-75
• 1 材料與方法49-50
• 1.1 材料49
• 1.1.1 菌種49
• 1.1.2 培養(yǎng)基49
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法49-50
• 1.2.1 纖維素降解菌酶培養(yǎng)時(shí)間優(yōu)化49
• 1.2.2 纖維素降解菌酶培養(yǎng)溫度優(yōu)化49
• 1.2.3 纖維素降解菌酶培養(yǎng)pH優(yōu)化49
• 1.2.4 纖維素降解菌酶接種量?jī)?yōu)化49-50
• 1.2.5 纖維素降解菌酶裝液量?jī)?yōu)化50
• 2 結(jié)果與分析50-75
• 2.1 奶牛糞便中菌株酶活力測(cè)定50-62
• 2.1.1 志賀氏菌發(fā)酵條件優(yōu)化50-52
• 2.1.2 類芽孢桿菌發(fā)酵條件優(yōu)化52-55
• 2.1.3 假單胞菌發(fā)酵條件優(yōu)化55-57
• 2.1.4 嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌發(fā)酵條件優(yōu)化57-59
• 2.1.5 菠蘿泛菌發(fā)酵條件優(yōu)化59-62
• 2.2 大熊貓糞便中菌株酶活測(cè)定62-73
• 2.2.1 假單胞菌發(fā)酵條件優(yōu)化62-64
• 2.2.2 克雷伯菌發(fā)酵條件優(yōu)化64-66
• 2.2.3 類芽孢桿菌發(fā)酵條件優(yōu)化66-69
• 2.2.4 芽孢桿菌發(fā)酵條件優(yōu)化69-71
• 2.2.5 白色鏈霉菌發(fā)酵條件優(yōu)化71-73
• 2.3 大熊貓和奶牛糞便中菌株酶活力比較分析73-75
• 第五章 全文結(jié)論75-78
• 1 結(jié)論75-77
• 2. 本實(shí)驗(yàn)的創(chuàng)新點(diǎn)77
• 3、前景展望77-78
• 附錄一 纖維降解菌拉丁文名對(duì)照表78-79
• 參考文獻(xiàn)79-83
• 致謝83

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5 劉韞滔;yな縵，

本文編號(hào)：481303