本文關(guān)鍵詞：長(zhǎng)白山自然保護(hù)區(qū)土壤真菌彎頸霉屬真菌遺傳多樣性及分布規(guī)律研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：長(zhǎng)白山自然保護(hù)區(qū)是亞歐大陸保存較完整的生態(tài)系統(tǒng),是研究物種多樣性的理想之地。2013年和2014年6、7、8和9月赴長(zhǎng)白山自然保護(hù)區(qū)北坡,依據(jù)不同森林類(lèi)型和土壤類(lèi)型采用“之”字形多點(diǎn)采樣法,在海拔800-2650m區(qū)域內(nèi)采集土壤樣品324份。以稀釋平板法和形態(tài)學(xué)鑒定法,共分離得到133株彎頸霉。通過(guò)對(duì)彎頸霉屬(Tolypocladium)真菌在長(zhǎng)白山的生態(tài)分布分析,發(fā)現(xiàn)其種類(lèi)與數(shù)量的分布特點(diǎn):從海拔1500-1800m逐漸增加,從1800-2000m逐漸減少,從2000-2600m逐漸增加,在2600m以上沒(méi)有分離到;從6月至8月份離到的彎頸霉的數(shù)量逐漸下降,9月又有所回升,但是較7月份少。對(duì)133株彎頸霉進(jìn)行了分子生物學(xué)鑒定及18S rDNA-ITS和延長(zhǎng)因子(elongation factor 1-α)的核酸序列對(duì)比分析。結(jié)果表明,利用18S rDNA-ITS序列所建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)與Blast結(jié)果并不一致;與18S rDNA-ITS序列分析相比,依據(jù)延長(zhǎng)因子核酸序列所建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù),其鑒定結(jié)果更準(zhǔn)確。利用ISSR分子標(biāo)記技術(shù),對(duì)133株彎頸霉屬真菌進(jìn)行了遺傳多樣性分析。從40個(gè)通用引物中篩選出了10個(gè)穩(wěn)定性及多態(tài)性好的引物,鑒定結(jié)果表明,ISSR表現(xiàn)出很高的遺傳多態(tài)性,多態(tài)性條帶達(dá)到79%,且擴(kuò)增結(jié)果有很好的重復(fù)性;無(wú)論是海拔還是月份各居群間群體遺傳變異較小,這可能是由于彎頸霉生態(tài)適應(yīng)強(qiáng),即海拔和采集時(shí)間(月份)對(duì)彎頸霉的遺傳變異并沒(méi)有明顯的影響。通過(guò)對(duì)三種彎頸霉(雪白彎頸霉、柱孢彎頸霉、地生彎頸霉)的生長(zhǎng)培養(yǎng)基、pH、光照、氮源和碳源等生物學(xué)特性的研究發(fā)現(xiàn),在同一環(huán)境下,最適光照條件為光暗交替(12h),最適合培養(yǎng)基為PDA,孢子萌發(fā)的最適碳源為葡萄糖,最適氮源為硫酸銨;三者不同的是:三種彎頸霉中,雪白彎頸霉(Tolypocladium niveum)的長(zhǎng)勢(shì)始終最好,產(chǎn)孢量也總體偏高。雪白彎頸霉的最適培養(yǎng)基為PDA,最適溫度為25?C,對(duì)酸度不敏感,當(dāng)pH為7時(shí),產(chǎn)孢量最大。其菌落生長(zhǎng)最適合碳源為葡萄糖,最適氮源為硝酸鈉;地生彎頸霉的最適培養(yǎng)基為MEA,最適溫度為30?C,最適pH值為6。其菌落生長(zhǎng)最適碳源為葡萄糖,最適氮源為檸檬酸銨;柱孢彎頸霉的最適培養(yǎng)基為PDA,最適溫度為25℃,柱孢彎頸霉的生長(zhǎng)對(duì)酸度不是特別明顯。最適碳源為葡萄糖,最適氮源為硝酸鈉。
【關(guān)鍵詞】：長(zhǎng)白山 彎頸霉 18S rDNA-ITS 延長(zhǎng)因子 ISSR 生物學(xué)特性
【學(xué)位授予單位】：遼寧師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：Q93
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 引言10-11
• 1 綜述11-20
• 1.1 長(zhǎng)白山自然保護(hù)區(qū)概述11-12
• 1.2 土壤真菌多樣性研究概述12-13
• 1.3 彎頸霉屬真菌的研究進(jìn)展13-16
• 1.4 環(huán)孢菌素16-17
• 1.5 rDNA-ITS序列分析和延長(zhǎng)因子序列分析17-18
• 1.6 ISSR分子標(biāo)記技術(shù)18-20
• 2 長(zhǎng)白山彎頸霉屬真菌形態(tài)學(xué)多樣性以及其分布特點(diǎn)20-23
• 2.1 材料與方法20-21
• 2.1.1 土壤采集方法20
• 2.1.2 試驗(yàn)方法20
• 2.1.3 培養(yǎng)基20-21
• 2.2 長(zhǎng)白山彎頸霉屬真菌的生態(tài)分布特點(diǎn)21-23
• 2.2.1 不同海拔長(zhǎng)白山彎頸霉屬真菌分布的特點(diǎn)21-22
• 2.2.2 不同月份長(zhǎng)白山彎頸霉屬真菌分布特點(diǎn)22-23
• 3 長(zhǎng)白山彎頸霉屬真菌的分子生物學(xué)鑒定23-30
• 3.1 材料方法23-24
• 3.1.1 菌株來(lái)源23
• 3.1.2 試驗(yàn)儀器23-24
• 3.1.3 試劑24
• 3.2 研究方法24-25
• 3.2.1 基因組DNA的提取24
• 3.2.2 DNA的檢測(cè)24-25
• 3.3 rDNA-ITS序列分析25-27
• 3.3.1 rDNA-ITS序列擴(kuò)增25
• 3.3.2 rDNA-ITS序列分析結(jié)果25-27
• 3.4 長(zhǎng)白山彎頸霉屬真菌延長(zhǎng)因子序列分析27-29
• 3.4.1 彎頸霉屬真菌延長(zhǎng)因子序列擴(kuò)增27
• 3.4.2 延長(zhǎng)因子序列分析結(jié)果27-29
• 3.5 長(zhǎng)白山彎頸霉屬真菌不同基因序列分析的比較29-30
• 4 長(zhǎng)白山彎頸霉屬真菌的ISSR分子標(biāo)記技術(shù)研究30-41
• 4.1 材料與方法30-34
• 4.1.1 菌株及其來(lái)源30-31
• 4.1.2 DNA的提取31
• 4.1.3 ISSR引物的篩選31-32
• 4.1.4 ISSR溫度梯度PCR32-33
• 4.1.5 ISSR反應(yīng)體系優(yōu)化33-34
• 4.2 結(jié)果與分析34-41
• 4.2.1 ISSR擴(kuò)增的正交優(yōu)化34-35
• 4.2.2 ISSR引物篩選結(jié)果35-36
• 4.2.3 ISSR-PCR擴(kuò)增結(jié)果檢測(cè)以及數(shù)據(jù)分析36
• 4.2.4 ISSR-PCR擴(kuò)增結(jié)果36
• 4.2.5 長(zhǎng)白山彎頸霉屬真菌群體遺傳多樣性36-37
• 4.2.6 長(zhǎng)白山彎頸霉屬真菌聚類(lèi)分析與討論37-41
• 5 長(zhǎng)白山彎頸霉屬真菌生物學(xué)特性的研究41-51
• 5.1 材料與方法41
• 5.1.1 試驗(yàn)菌株41
• 5.1.2 實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基及配方41
• 5.2 試驗(yàn)方法41-43
• 5.2.1 分離活化彎頸霉菌株41-42
• 5.2.2 培養(yǎng)基對(duì)三種彎頸霉屬真菌菌落生長(zhǎng)、產(chǎn)孢的影響42
• 5.2.3 碳源對(duì)三種彎頸霉屬真菌菌落生長(zhǎng)、產(chǎn)孢的影響42
• 5.2.4 氮源的對(duì)三種彎頸霉屬真菌菌落大小、產(chǎn)孢的影響42
• 5.2.5 光照強(qiáng)度對(duì)三種彎頸霉屬真菌菌落生長(zhǎng)、產(chǎn)孢的影響42
• 5.2.6 酸堿度對(duì)三種彎頸霉屬真菌菌落生長(zhǎng)、產(chǎn)孢的影響42-43
• 5.2.7 溫度對(duì)三種彎頸霉屬真菌菌落生長(zhǎng)、產(chǎn)孢的影響43
• 5.3 結(jié)果與分析43-51
• 5.3.1 培養(yǎng)基對(duì)三種彎頸霉屬真菌菌落生長(zhǎng)、產(chǎn)孢的影響43-44
• 5.3.2 碳源對(duì)三種彎頸霉屬真菌菌落生長(zhǎng)、產(chǎn)孢的影響44-45
• 5.3.3 氮源對(duì)三種彎頸霉屬真菌菌落生長(zhǎng)、產(chǎn)孢的影響45-47
• 5.3.4 光照對(duì)三種彎頸霉屬真菌菌落生長(zhǎng)、產(chǎn)孢的影響47-48
• 5.3.5 溫度對(duì)三種彎頸霉屬真菌菌落生長(zhǎng)、產(chǎn)孢的影響48-49
• 5.3.6 酸堿度對(duì)三種彎頸霉屬真菌菌落生長(zhǎng)、產(chǎn)孢的影響49-51
• 結(jié)論51-53
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 附錄A 彎頸霉延長(zhǎng)因子序列57-109
• 附錄B 彎頸霉的ISSR種群遺傳相似性系數(shù)GS109-110
• 附錄C 彎頸霉在不同培養(yǎng)條件下的產(chǎn)孢量(108個(gè)/mL)110-113
• 附錄D 三種彎頸霉在不同培養(yǎng)基培養(yǎng) 7d的菌落圖113-115
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況115-116
• 致謝116

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