發(fā)布時間：2024-05-18 13:58

　　布魯菌病是一種重要的人畜共患病。主要引起反芻動物流產、不育和人類的慢性感染和波狀熱。在全世界廣泛分布,對人類的健康和畜牧業(yè)的發(fā)展造成嚴重的危害。目前準確診斷該病是控制布魯菌病的關鍵。傳統(tǒng)檢測方法的敏感性和特異性不理想,且實驗條件要求高。常見的血清學診斷方法有假陽性現象存在。因此,開發(fā)一種靈敏、便捷、特異的檢測方法對于布魯菌病診斷具有十分重要的意義。在本研究中,我們完成了三部分研究內容:1)布魯菌已報道主要免疫原性蛋白的篩選。通過對BALB/c小鼠腹腔注射流產布魯菌S2308株的方法,建立小鼠感染模型。評估了已報道的布魯菌主要免疫原性蛋白的OMP16、BP26、BLS、BCSP31、VirB12、SodC和GroEL在布魯菌感染不同階段抗體生成規(guī)律,探討了它們在布魯菌病診斷中的應用。在隨后研究中,通過免疫印跡試驗評估了7種蛋白對44例臨床牛血清的檢測效果。2)篩選流產布魯菌新的免疫原性蛋白。通過免疫印跡試驗分析流產布魯菌感染小鼠不同階段的血清中以及臨床牛羊布魯菌病陽性血清中抗體生成規(guī)律和特點,確定布魯菌主要免疫原性蛋白的相對區(qū)域。通過SDS-PAGE分離布魯菌總蛋白,對照免疫印跡試驗結果...

【文章頁數】：56 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.布魯菌免疫原性蛋白的原核表達及純化

流產布魯菌免疫原性蛋白篩選及膠體金試紙條的初步研究183.結果與分析3.1布魯菌感染過程中主要免疫原性蛋白的篩選3.1.1蛋白在不同原核表達系統(tǒng)中表達和純化選擇OMP16、BP26、BLS、BCSP31、VirB12、SodC和GroEL蛋白作為布魯菌病的診斷抗原。利用pCold....

圖2.小鼠在布魯菌感染期間的抗體產生情況

山東農業(yè)大學碩士專業(yè)學位論文19BLS、BCSP31和SodC蛋白相比，OMP16、VirB12和GroEL蛋白的抗體水平較低。抗BP26和BLS蛋白的抗體在約4周時產生，然后維持在高抗體水平，直到第22周。此外，抗BCSP31和抗SodC抗體分別于6周和8周誘導產生，然后保持在....

圖3.免疫原性蛋白與牛標準血清反應Figure3.Reactionofimmunogenicproteinwithbovinestandardserum

（圖3A和B）。為了消除SUMOtag蛋白的干擾，我們將BP26蛋白在含有6×Histag的pColdI表達系統(tǒng)中重新表達（圖4）。免疫印跡試驗結果顯示，6×His-BP26仍然與標準的布魯菌陽性和陰性血清反應（圖3C）。LPS陽性對照與陽性血清反應良好，與陰性血清無反應，6×H....

圖4.BP26蛋白在pColdI質粒中的表達Figure4.ExpressionofBP26proteininpColdIplasmid

糶匝?搴鴕跣匝?宸從?M:蛋白標志物;1:S-OMP16蛋白;2:S-BP26蛋白;3:S-BLS蛋白;4:S-BCSP31蛋白;5:VirB12蛋白;6:SodC蛋白;7:GroEL蛋白;8:脂多糖;9:表達6×His-BP26蛋白的BL21細胞的細菌裂解液;10:含有空載的B....

本文編號：3977027