小鼠胚胎干細(xì)胞(Embryonic Stem Cells,ESCs)是一種來源于3.5天囊胚內(nèi)細(xì)胞團(inner cell mass,ICM)的多能性干細(xì)胞,具有無限自我更新能力。自從1981年第一次建立小鼠ESCs以來,ESCs體外培養(yǎng)體系一直是科學(xué)研究的熱點之一。2008年科研人員開發(fā)化學(xué)成分明確的2i/LIF(Mek1/2和Gsk3b的抑制劑,簡稱2i;LIF:白血病抑制因子)培養(yǎng)體系。該培養(yǎng)體系主要通過調(diào)節(jié)經(jīng)典的WNT、FGF/ERK和JAK/STAT3等信號通路來維持小鼠ESCs的na?ve多能性,但是這三種小因子中的某一種成分可以維持小鼠ESCs的自我更新和na?ve多能性并不清楚。在這里,我們主要研究應(yīng)用LIF能否建立L-ESCs細(xì)胞系,并鑒定其細(xì)胞的特性。首先在2i/LIF培養(yǎng)體系中去掉2i,觀察單獨使用LIF能否維持小鼠ESCs多能性,其次建立LIF依賴性新型小鼠胚胎干細(xì)胞系,我們將其命名為L-ESCs,對其細(xì)胞特性、多能性、體外分化和體內(nèi)發(fā)育潛能等方面進行鑒定。實驗結(jié)果如下:1.建立LIF依賴性新型小鼠胚胎干細(xì)胞系本實驗用LIF培養(yǎng)體系對6種2i/LIF培養(yǎng)的ESC...

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【學(xué)位級別】：碩士

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圖1.1LIF信號通路作用機制

內(nèi)蒙古大學(xué)碩士學(xué)位論文5配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域所組成的融合蛋白，融合蛋白的配體三苯氧胺(Tx)激活雌激素受體后，在STAT3不被磷酸化的情況下，融合蛋白轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核。另一方面，來自嵌合受體GCSFR-Gp130，它在Gp130的Shp2對接位點(Y118F)發(fā)生突變，激活JAK-STAT....

圖1.2經(jīng)典WNT信號通路作用機制Figure1.2MechanismofCanonicalWNTsignalingpathway

內(nèi)蒙古大學(xué)碩士學(xué)位論文7Stat3的消融導(dǎo)致后期囊胚的外胚層和原始內(nèi)胚層細(xì)胞的丟失。表明在胚胎著床前發(fā)育過程中，Stat3對于維持多能性細(xì)胞的數(shù)量至關(guān)重要。在LIF缺失的囊胚中，Y705殘基磷酸化的Stat3減少，盡管沒有完全消除，這表明LIF信號參與了Stat3的激活，這些數(shù)據(jù)....

圖2.1用2i/L-ESCs向L-ESCs誘導(dǎo)建系流程

建立LIF依賴性新型小鼠胚胎干細(xì)胞系162.3實驗結(jié)果2.3.1小鼠L-ESCs細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定我們使用的2i/L-ESCs細(xì)胞系均是由本實驗室建立并帶有Oct4-GOF/GFP標(biāo)記。在小鼠胚胎干細(xì)胞及原始生殖細(xì)胞（PGCs）中，Oct4遠端啟動子被激活，在倒置熒光顯微鏡下能夠觀察....

圖2.22i/L-ESCs和L-ESCs細(xì)胞形態(tài)（標(biāo)尺：100μm）

內(nèi)蒙古大學(xué)碩士學(xué)位論文

本文編號：3969229