目的探討人源重組蛋白顆粒蛋白前體rhPGRN(recombinant human progranulin,rhPGRN)對軟骨細(xì)胞C28I2和巨噬細(xì)胞RAW264.7增殖、自噬和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響及作用機(jī)制。方法采用Ni-NTA瓊脂糖樹脂對組氨酸標(biāo)簽蛋白進(jìn)行特異性親和純化,通過考馬斯亮藍(lán)染色、BCA法和Western blot驗(yàn)證目的蛋白的純度和濃度。將細(xì)胞隨機(jī)分為對照、rhPGRN、U0126、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)、rhPGRN+U0126、rhPGRN+3-MA、rhPGRN+bafilomycin A1(Baf-A1)、rhPGRN+4-苯基丁酸鈉(4-phenyl butyric acid,4-PBA)組,采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法、Western blot和RT-PCR檢測rhPGRN對C28I2和RAW264.7兩種不同類型細(xì)胞增殖、自噬和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ER stress)的影響。結(jié)果(1)在含有His標(biāo)簽PGRN的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株中成功提取高純度、具有生物活性的人源重組蛋白rhPGRN。(2)rhPGRN能促進(jìn)C28I2和RAW264.7細(xì)胞的增殖,促進(jìn)細(xì)...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1GRN的基因圖譜

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文11圖1.1GRN的基因圖譜Figure1.1GenemapofGRN.A:GenomiclocationofGRN.2.2GRN基因結(jié)構(gòu)與序列人類GRN基因包含兩種不同的轉(zhuǎn)錄本（圖1.2A）（引自www.ncbi.nlm.nih.gov），mRNA....

圖1.2GRN的結(jié)構(gòu)與序列

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文12圖1.2GRN的結(jié)構(gòu)與序列Figure1.2StructureandsequenceofGRN.A:structureofGRN,transcriptvariantX1andtranscriptvariantX2.B:Nucleicacidseq....

圖1.3不同物種間GRN基因結(jié)構(gòu)比較

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文13馬魚（D.rerio）中全長26950bp，含25個外顯子，24個內(nèi)含子。通過比較上述不同物種間的基因序列，發(fā)現(xiàn)GRN基因尤其是外顯子序列在不同物種中是高度保守的（圖1.3）（引自www.ncbi.nlm.nih.gov），最新研究表明不同種屬間....

圖1.4PGRN的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)圖譜和蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文14顆粒中，Granulin-3被證實(shí)可抑制上皮細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)上皮細(xì)胞分泌IL-8[8]；Granulin-4可以促進(jìn)培養(yǎng)中上皮細(xì)胞系A(chǔ)431的增殖[7]；Granulin-7通過與組織蛋白酶D（CathepsinD,CTSD）相互作用來穩(wěn)定CTSD....

本文編號：3965613