本文關(guān)鍵詞：喜鹽草黃酮類化合物的提取、純化及抗氧化活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：喜鹽草(Halophila ovalis),多年淺海生沉水草本,屬被子植物門,單子葉植物綱。隸屬于沼生目((Helobiae),水鱉科Hydrocharitacea),喜鹽草屬(Halophila Thou.)。喜鹽草是海草床的重要組成部分。目前,國(guó)內(nèi)尚未有關(guān)于喜鹽草黃酮的報(bào)道,對(duì)喜鹽草的研究主要集中在分類學(xué)、形態(tài)學(xué)和生理學(xué)等方面。黃酮類化合物是一類自然界中廣泛存在的化合物。研究表明,黃酮類化合物具有廣泛的生物活性,包括抗氧化、抗衰老、抗突變、抗腫瘤、抗菌等。但是對(duì)于黃酮類化合物的研究一般只限于陸生高等植物,海洋中的高等植物尚并未被充分開發(fā)利用。本文將海洋高等植物喜鹽草作為研究對(duì)象,主要研究其黃酮類化合物的提取工藝、純化方法,并研究了喜鹽草黃酮的抗氧化活性,主要研究結(jié)果如下：首先對(duì)喜鹽草的基本成分進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)喜鹽草是一種蛋白含量高(11.66%)、低脂肪(1.16%)并且富含礦質(zhì)元素(18.11%)的天然資源。在已測(cè)定的15中氨基酸中,必需氨基酸有7種,占氨基酸總量的34.70%。在必需氨基酸中,以纈氨酸含量最高,蛋氫酸含量最低。在非必需氨基酸中,谷氨酸含量最高,以組氨酸含量最低。呈味氨基酸豐富。其次進(jìn)行了黃酮類化合物的提取試驗(yàn)。以乙醇作為浸提液,研究了傳統(tǒng)工藝浸提法、超聲輔助提取法和纖維素酶輔助提取法,通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)得出這三種提取方法對(duì)喜鹽草黃酮類化合物的最佳提取條件,并對(duì)其最大得率進(jìn)行比較。傳統(tǒng)浸提工藝最佳提取條件：乙醇濃度為65%,提取溫度為70℃,提取時(shí)間為4h,料液比為1：40(g/mL),喜鹽草的黃酮類化合物得率為1.28%。超聲輔助提取工藝的最佳提取條件：乙醇濃度為55%,超聲功率為420W,超聲時(shí)間為8min,喜鹽草的黃酮類化合物得率為1.73%。纖維素酶輔助提取工藝的最佳提取條件：酶解溫度60℃,酶解pH為5.5,酶解時(shí)間60min,酶用量為3%,喜鹽草黃酮類化合物的得率為2.10%。結(jié)果表明,纖維素酶輔助提取工藝優(yōu)于其他兩種工藝。利用有機(jī)溶劑萃取法得到了乙酸乙酯相和正丁醇相萃取物,后者黃酮純度更高,且更符合黃酮的紫外吸收特征,所以作為分離純化的主要研究對(duì)象。選擇5種大孔吸附樹脂,通過靜態(tài)吸附和解吸實(shí)驗(yàn),選定最優(yōu)樹脂AB-8；最后通過靜態(tài)實(shí)驗(yàn)確定了最佳純化工藝條件：樣液pH為3,樣液質(zhì)量濃度為1.20mg/mL,吸附溫度和解吸溫度為25℃,洗脫液乙醇濃度為75%。在最佳純化條件下,正丁醇相萃取物的黃酮類化合物純度由原來的28.34%上升至47.28%,提高了1.7倍。經(jīng)高效液相色譜法和電噴霧質(zhì)譜鑒定,純化后的喜鹽草黃酮含有芹菜素-7-O-β-葡萄糖苷和柯伊利素-7-O-β-葡萄糖苷。文章最后研究了喜鹽草乙酸乙酯萃取物、正丁醇相萃取物、大孔樹脂純化物與芹菜素-7-O-β-葡萄糖苷和柯伊利素-7-O-β-葡萄糖苷的抗氧化活性,主要包括還原能力、清除羥基自由基能力、清除超氧陰離子自由基能力、清除DPPH自由基和亞硝基能力的測(cè)定。兩種黃酮單體的還原力略低于VC,說明還原力接近于VC。在清除超氧陰離子自由基、DPPH自由基和亞硝基的能力方面,從高到低依次是VC、兩種黃酮單體、大孔樹脂純化物、正丁醇相萃取物和乙酸乙酯相萃取物。兩種黃酮單體清除羥基自由基的能力均大于VC和其他樣品,說明兩種黃酮單體具有較強(qiáng)的清除羥基自由基的能力。研究結(jié)果表明,喜鹽草黃酮具有抗氧化活性,表現(xiàn)為具有一定的清除自由基和亞硝基的能力。
【關(guān)鍵詞】：喜鹽草 黃酮 提取 純化 抗氧化
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：Q946
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-13
• 1 前言13-27
• 1.1 喜鹽草簡(jiǎn)介13-14
• 1.1.1 海草的簡(jiǎn)介13
• 1.1.2 喜鹽草的分類地位、形態(tài)特征和分布13-14
• 1.1.3 喜鹽草的研究和利用現(xiàn)狀14
• 1.2 黃酮類化合物的研究現(xiàn)狀14-16
• 1.2.1 黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類15
• 1.2.2 黃酮類化合物的理化性質(zhì)15-16
• 1.3 黃酮類化合物的提取16-20
• 1.3.1 溶劑提取法16-17
• 1.3.2 超聲波輔助浸提法17-18
• 1.3.3 微波輔助浸提法18
• 1.3.4 酶解法18
• 1.3.5 超臨界二氧化碳萃取18-19
• 1.3.6 半仿生提取法19
• 1.3.7 膜分離法19-20
• 1.4 黃酮類化合物的分離純化20-22
• 1.4.1 大孔樹脂吸附法20
• 1.4.2 柱層析法20-21
• 1.4.3 有機(jī)溶劑萃取法21-22
• 1.4.4 高速逆流色譜(HSCCC)22
• 1.5 黃酮類化合物的分析鑒定22-23
• 1.5.1 紫外光譜(UV)22
• 1.5.2 平面色譜法22-23
• 1.5.3 高效液相色譜法(HPLC)23
• 1.6 黃酮類化合物的生理活性23-25
• 1.6.1 黃酮類化合物的抗氧化活性23-25
• 1.6.2 黃酮類化合物的抑菌活性25
• 1.6.3 黃酮類化合物的其他生理活性25
• 1.7 本文的研究目的和研究?jī)?nèi)容25-27
• 1.7.1 研究目的25-26
• 1.7.2 研究?jī)?nèi)容26-27
• 2 喜鹽草的基本成分分析27-32
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器27
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料27
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器27
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法27-29
• 2.2.1 水分含量的測(cè)定27-28
• 2.2.2 總糖含量的測(cè)定28
• 2.2.3 蛋白質(zhì)含量的測(cè)定28
• 2.2.4 粗脂肪含量的測(cè)定28
• 2.2.5 灰分含量的測(cè)定28
• 2.2.6 氨基酸含量的測(cè)定28-29
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-30
• 2.4 討論30-32
• 3 喜鹽草中黃酮類化合物的提取工藝研究32-54
• 3.1 引言32
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑32-33
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料32
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑32
• 3.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備32-33
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法33-39
• 3.3.1 黃酮類化合物的初步鑒定33
• 3.3.2 喜鹽草黃酮類化合物含量的測(cè)定33-35
• 3.3.3 傳統(tǒng)浸提工藝提取喜鹽草黃酮類化合物的工藝研究35-36
• 3.3.4 超聲輔助提取喜鹽草黃酮類化合物工藝的研究36-38
• 3.3.5 纖維素酶輔助提取喜鹽草黃酮工藝的研究38-39
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論39-54
• 3.4.1 黃酮的定性實(shí)驗(yàn)39
• 3.4.2 喜鹽草黃酮測(cè)量方法的考察39-41
• 3.4.3 傳統(tǒng)浸提工藝提取喜鹽草黃酮類化合物的工藝研究41-45
• 3.4.4 超聲輔助提取喜鹽草黃酮類化合物工藝的研究45-49
• 3.4.5 纖維素酶輔助提取喜鹽草黃酮類化合物工藝的研究49-53
• 3.4.6 提取工藝最優(yōu)組合的比較53-54
• 4. 喜鹽草中黃酮類化合物的分離與純化54-71
• 4.1 引言54
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑54-55
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料54
• 4.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑54-55
• 4.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備55
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法55-59
• 4.3.1 有機(jī)溶劑萃取法對(duì)喜鹽草黃酮提取物的初步分離55-56
• 4.3.2 喜鹽草各萃取相中黃酮含量的測(cè)定56
• 4.3.3 大孔吸附樹脂選型及預(yù)處理56-57
• 4.3.4 大孔吸附樹脂的靜態(tài)實(shí)驗(yàn)57-58
• 4.3.5 不同條件下大孔吸附樹脂對(duì)喜鹽草黃酮樣品純化的影響58
• 4.3.6 工藝驗(yàn)證58-59
• 4.3.7 喜鹽草正丁醇相經(jīng)大孔樹脂后純化物的HPLC分析59
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果59-71
• 4.4.1 各萃取相中的黃酮純度和紫外吸收掃描圖59-60
• 4.4.2 大孔吸附樹脂的篩選60-62
• 4.4.3 不同條件下大孔吸附樹脂對(duì)喜鹽草黃酮樣品純化的影響62-66
• 4.4.4 工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)66
• 4.4.5 經(jīng)大孔樹脂純化后喜鹽草黃酮的HPLC分析66-67
• 4.4.6 質(zhì)譜分析67-71
• 5 喜鹽草中黃酮類化合物的抗氧化活性研究71-81
• 5.1 引言71
• 5.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑71-72
• 5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料71
• 5.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑71-72
• 5.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備72
• 5.3 實(shí)驗(yàn)方法72-74
• 5.3.1 喜鹽草黃酮總還原能力的測(cè)定72
• 5.3.2 清除羥基自由基能力的測(cè)定72
• 5.3.3 清除超氧陰離子自由基的能力的測(cè)定72-73
• 5.3.4 清除DPPH自由基的能力的測(cè)定73-74
• 5.3.5 清除亞硝基離子能力的測(cè)定74
• 5.4 結(jié)果與分析74-81
• 5.4.1 總還原力的測(cè)定74-75
• 5.4.2 清除羥基自由基能力的測(cè)定75-77
• 5.4.3 清除超氧陰離子自由基能力的測(cè)定77-78
• 5.4.4 清除DPPH自由基的能力的測(cè)定78-79
• 5.4.5 清除亞硝基離子能力的測(cè)定79-81
• 6. 總結(jié)和展望81-83
• 參考文獻(xiàn)83-88
• 附錄88-91
• 致謝91-92
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷92
• 研究生期間發(fā)表的研究成果92

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：喜鹽草黃酮類化合物的提取、純化及抗氧化活性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：396356