小球藻病毒來源的啟動子具有在原核生物與真核生物都能啟動基因轉(zhuǎn)錄的特點(diǎn),本實(shí)驗(yàn)利用來自小球藻病毒且在大腸桿菌中具有強(qiáng)調(diào)控活性的啟動子序列來構(gòu)建萊茵衣藻轉(zhuǎn)化載體。將博萊霉素抗性基因sh ble與綠色熒光蛋白基因gfp融合成的ble-gfp篩選標(biāo)記-報(bào)告基因融合基因置于小球藻病毒啟動子控制下,同時(shí)構(gòu)建無啟動子和由內(nèi)源rbcS2啟動子控制的正負(fù)對照轉(zhuǎn)化載體。上述轉(zhuǎn)化載體經(jīng)電擊導(dǎo)入胞壁缺陷型萊茵衣藻藻株Chlamydomonas reinhardtii cc503后分別用7.5μg/mL和4μg/mL博萊霉素進(jìn)行平板和液體篩選,得到一系列sh ble抗性藻落;而無啟動子的對照轉(zhuǎn)化載體沒得到任何抗性藻落。經(jīng)PCR擴(kuò)增發(fā)現(xiàn)小球藻病毒來源的N63、N80、N99、N35啟動子控制下的ble-gfp融合基因插入了sh ble抗性藻細(xì)胞基因組。用qRT-PCR方法檢測了病毒啟動子和rbcS2啟動子控制的sh ble轉(zhuǎn)錄文本豐度,結(jié)果表明小球藻病毒啟動子和rbcS2啟動子一樣在萊茵衣藻中具有正常的啟動活性。將上述篩選到的啟動活性較強(qiáng)的啟動子來構(gòu)建含有g(shù)pd1基因的重組質(zhì)粒,同樣用電擊轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化進(jìn)萊茵衣藻細(xì)胞...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1萊茵衣藻顯微結(jié)構(gòu)圖

第1章緒論5的新工藝是從微藻中生產(chǎn)高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)燃料油的一種可行而有效的方法。1.2萊茵衣藻1.2.1簡介近年來萊茵衣藻已經(jīng)被證明是研究光合作用、葉綠體生物發(fā)生、鞭毛生物合成、細(xì)胞識別和細(xì)胞周期調(diào)控等重要生物學(xué)問題的理想的系統(tǒng)[31]。萊茵衣藻(Chlamydomonasreinhar....

圖1-2萊茵衣藻油脂代謝途徑Fig1-2lipidmetabolismpathwayofChlamydomonasreinhardtii

河北大學(xué)碩士學(xué)位論文6脂和磷脂等為細(xì)胞膜的重要組成成分[34]。如三酰甘油(triacylglycerol,TAG)是儲存脂質(zhì)存在的主要形式，是制造生物柴油的理想原材料。隨著不斷的研究，關(guān)于萊茵衣藻脂質(zhì)代謝的關(guān)鍵基因被鑒定出來，這將對萊茵衣藻油脂代謝過程的研究具有重要的意義[35....

圖1-3衣藻轉(zhuǎn)化株P(guān)CR驗(yàn)證結(jié)果

河北大學(xué)碩士學(xué)位論文10茵衣藻中。本實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用在大腸桿菌中構(gòu)建了小球藻病毒啟動子文庫，發(fā)現(xiàn)篩選的啟動子在酵母、大腸桿菌、萊茵衣藻中均具有啟動活性，并對小球藻病毒啟動子N63在萊茵衣藻中的轉(zhuǎn)錄活性進(jìn)行分析。提取萊茵衣藻轉(zhuǎn)化株的基因組，進(jìn)行PCR驗(yàn)證，結(jié)果如圖1-3所示，發(fā)現(xiàn)在N63....

圖1-4萊茵衣藻CC503pBR11-N63轉(zhuǎn)化子共聚焦圖像

第1章緒論11圖1-4萊茵衣藻CC503pBR11-N63轉(zhuǎn)化子共聚焦圖像A，可見光下的圖像；B和C，分別是GFP和葉綠體發(fā)射的熒光圖像；D，A、B和C圖像重疊的圖像。Fig1-4:confocalimageofChlamydomonasreinhardtiiCC503pBR11....

本文編號：3927834