目的:人類細(xì)胞核內(nèi)存在著46條致密染色質(zhì),它們?cè)诓煌幕蚪M尺度下具有不同的染色質(zhì)折疊,這可能使基因組能夠進(jìn)行有效的組裝和功能組織。目前,研究染色質(zhì)折疊的技術(shù)主要有染色質(zhì)構(gòu)象捕獲(3C)技術(shù)和成像技術(shù),但他們大多數(shù)只能用于固定細(xì)胞的研究。然而,活細(xì)胞染色質(zhì)折疊的研究對(duì)于理解染色質(zhì)時(shí)空組織與基因功能的關(guān)系至關(guān)重要。近年來(lái),CRISPR/Cas9成像技術(shù)已經(jīng)被證明可以有效用于活細(xì)胞染色質(zhì)折疊研究,該技術(shù)可以對(duì)染色質(zhì)位點(diǎn)進(jìn)行活細(xì)胞成像。在本課題中,我們構(gòu)建了多重sgRNA-CRISPR/Cas9系統(tǒng),目的是利用該系統(tǒng)初步實(shí)現(xiàn)染色質(zhì)位點(diǎn)的成像,并為活細(xì)胞染色質(zhì)折疊的研究提供理論基礎(chǔ)。方法:本課題構(gòu)建質(zhì)粒的方法有連接、重組、Golden-gate克隆,構(gòu)建過程中用HiPure Gel Pure Micro Kit(D2111-03)回收凝膠DNA,用HiPure Plasmid Micro Kit C(P1001-03C)提取質(zhì)粒。采用lipo3000轉(zhuǎn)染細(xì)胞,然后利用激光共聚焦顯微鏡成像觀察,最后用ImageJ處理成像數(shù)據(jù)。結(jié)果:1.CRISPR-Cas9雙光系統(tǒng)可以實(shí)現(xiàn)重復(fù)基因組序列的成像。...

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮略語(yǔ)表
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 研究三維染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的方法
    1.2 CRISPR/Cas9 系統(tǒng)
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
第三章 結(jié)果
    3.1 雙光系統(tǒng)可以實(shí)現(xiàn)重復(fù)基因組序列的成像
    3.2 質(zhì)粒依賴的多重sgRNA組裝系統(tǒng)
    3.3 非重復(fù)基因組序列的成像
第四章 討論
    4.1 雙光系統(tǒng)的構(gòu)建及應(yīng)用
    4.2 多重sgRNA組裝系統(tǒng)構(gòu)建
    4.3 創(chuàng)新點(diǎn)、不足及需繼續(xù)深入研究的內(nèi)容
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
簡(jiǎn)歷
致謝



本文編號(hào)：3886758