J亞群禽白血病是由逆轉錄病毒引起的腫瘤性疾病,尚無藥物和疫苗加以防控。家禽發(fā)病后由于根除成本和腫瘤導致的生產力下降,對全球家禽業(yè)造成了很大的經濟損失。IFN-λ為新型干擾素,具有與Ⅰ型干擾素相似的抗病毒和抗腫瘤活性。通過原核表達IFN-λ研究其對ALV-J復制的作用,為預防和治療J亞群禽白血病奠定了基礎。將IFN-λ基因連入pET-32a原核表達載體構建重組質粒,進行雙酶切驗證。以最佳表達時間誘導IFN-λ蛋白表達,經蛋白純化復性,用Western Blot驗證。使用ELISA和熒光定量PCR法,檢測單獨使用IFN-λ和聯(lián)合IFN-α在DF-1細胞上抑制ALV-J復制的作用。用IFN-λ誘導DF-1細胞,檢測對ISGs和Ⅰ型干擾素表達的影響。單獨使用IFN-λ時,終濃度在5000ng/mL時病毒相對表達量下降了52%(P<0.001),呈劑量依賴性抑制ALV-J的復制。在10ng/mL濃度下,聯(lián)合使用IFN-α和IFN-λ比單獨使用IFN-λ病毒相對表達量下降21%(P<0.01);在100ng/mL濃度下,聯(lián)合使用比單獨使用IFN-λ病毒相對表達量下降32%(P<0...

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【學位級別】：碩士

圖1pET-32a-IFN-λ基因PCR擴增結果

圖2重組質粒pET-32a-IFN-λ雙酶切產物電泳圖

圖4pET-32a-IFN-λ蛋白最佳表達時間探究M：蛋白Marker；NO.1：誘導1h蛋白表達產物；NO.2：誘導2h蛋白表達產物；NO.3：誘導3h蛋白表達產

圖3pET-32a-IFN-λ蛋白的小量表達M：蛋白Marker；1：誘導IFN-λ表達產物；2：誘導pET-32a空載體表達產物

本文編號：3884825