J亞群禽白血病是由逆轉(zhuǎn)錄病毒引起的腫瘤性疾病,尚無藥物和疫苗加以防控。家禽發(fā)病后由于根除成本和腫瘤導(dǎo)致的生產(chǎn)力下降,對(duì)全球家禽業(yè)造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失。IFN-λ為新型干擾素,具有與Ⅰ型干擾素相似的抗病毒和抗腫瘤活性。通過原核表達(dá)IFN-λ研究其對(duì)ALV-J復(fù)制的作用,為預(yù)防和治療J亞群禽白血病奠定了基礎(chǔ)。將IFN-λ基因連入pET-32a原核表達(dá)載體構(gòu)建重組質(zhì)粒,進(jìn)行雙酶切驗(yàn)證。以最佳表達(dá)時(shí)間誘導(dǎo)IFN-λ蛋白表達(dá),經(jīng)蛋白純化復(fù)性,用Western Blot驗(yàn)證。使用ELISA和熒光定量PCR法,檢測(cè)單獨(dú)使用IFN-λ和聯(lián)合IFN-α在DF-1細(xì)胞上抑制ALV-J復(fù)制的作用。用IFN-λ誘導(dǎo)DF-1細(xì)胞,檢測(cè)對(duì)ISGs和Ⅰ型干擾素表達(dá)的影響。單獨(dú)使用IFN-λ時(shí),終濃度在5000ng/mL時(shí)病毒相對(duì)表達(dá)量下降了52%(P<0.001),呈劑量依賴性抑制ALV-J的復(fù)制。在10ng/mL濃度下,聯(lián)合使用IFN-α和IFN-λ比單獨(dú)使用IFN-λ病毒相對(duì)表達(dá)量下降21%(P<0.01);在100ng/mL濃度下,聯(lián)合使用比單獨(dú)使用IFN-λ病毒相對(duì)表達(dá)量下降32%(P<0...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

圖1pET-32a-IFN-λ基因PCR擴(kuò)增結(jié)果

圖2重組質(zhì)粒pET-32a-IFN-λ雙酶切產(chǎn)物電泳圖

圖4pET-32a-IFN-λ蛋白最佳表達(dá)時(shí)間探究M：蛋白Marker；NO.1：誘導(dǎo)1h蛋白表達(dá)產(chǎn)物；NO.2：誘導(dǎo)2h蛋白表達(dá)產(chǎn)物；NO.3：誘導(dǎo)3h蛋白表達(dá)產(chǎn)

圖3pET-32a-IFN-λ蛋白的小量表達(dá)M：蛋白Marker；1：誘導(dǎo)IFN-λ表達(dá)產(chǎn)物；2：誘導(dǎo)pET-32a空載體表達(dá)產(chǎn)物

本文編號(hào)：3884825