CV-A6(Coxsackievirus A6)能引起手足口病,并在近年來(lái)成為流行性手足口病的主要病原體,逐漸成為全球公共健康的威脅。CV-A6能感染人惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞(RD)使其出現(xiàn)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effect,CPE),并能夠在其中增殖。但其極難以在人用疫苗細(xì)胞基質(zhì)(如Vero細(xì)胞)上增殖。獲得CV-A6的人用疫苗細(xì)胞基質(zhì)適應(yīng)株是目前工作的難點(diǎn)和重點(diǎn)所在。本課題旨在獲得CV-A6于Vero細(xì)胞上的適應(yīng)株,同時(shí)研究與CV-A6 Vero細(xì)胞嗜性和生長(zhǎng)能力相關(guān)的位點(diǎn)。本課題基于實(shí)驗(yàn)室在前期研究中于襄陽(yáng)2000余份樣本中獲得的8株CV-A6RD細(xì)胞適應(yīng)株。通過(guò)在RD細(xì)胞上連續(xù)傳代,最終于RD第16代獲得了一株可在Vero細(xì)胞上生長(zhǎng)的CV-A6適應(yīng)株CV-A6-HEV3391/XY/2017株(下簡(jiǎn)稱3391)。對(duì)3391-R16V6(RD細(xì)胞傳至16代,Vero細(xì)胞傳至6代)進(jìn)行連續(xù)三輪的空斑純化。通過(guò)對(duì)生長(zhǎng)特性、抗原含量、病毒滴度等方面的比較,選取克隆株P(guān)49-21-21為骨架,合成cDNA,構(gòu)建全長(zhǎng)cDNA質(zhì)粒,進(jìn)行病毒拯救,獲得了無(wú)RD細(xì)胞背景的CV-A6疫...

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
前言
技術(shù)路線
第一章 :材料及實(shí)驗(yàn)方法
    1.實(shí)驗(yàn)材料
    2.實(shí)驗(yàn)試劑及儀器
    3.實(shí)驗(yàn)試劑配置
    4.實(shí)驗(yàn)方法
第二章 :CV-A6疫苗株的篩選及拯救
    1.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.小結(jié)
第三章 :CV-A6細(xì)胞嗜性相關(guān)位點(diǎn)研究
    1.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.1.細(xì)胞傳代過(guò)程中細(xì)胞嗜性研究
        1.2.獲取細(xì)胞嗜性差異株
        1.3.c712/和c1023克隆株拯救
        1.4.氨基酸差異位點(diǎn)的點(diǎn)突變
    2.小結(jié)
第四章 :CV-A6生長(zhǎng)能力的研究
    1.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.1.res712與res3391 生長(zhǎng)能力的比較
        1.2.res712與res3391 株的同源重組
        1.3.重組株生長(zhǎng)特性的比較
    2.小結(jié)
第五章：總結(jié)與討論
    1.總結(jié)與討論
    2.下一步工作計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：3865177