發(fā)布時(shí)間：2023-08-14 19:38

　　近年來(lái)對(duì)于再生過(guò)程的研究非常熱門(mén)。蠑螈作為再生研究的模式生物有著不可代替的優(yōu)勢(shì)。蠑螈在進(jìn)化上屬于脊椎動(dòng)物,再生能力卻沒(méi)有像其他脊椎動(dòng)物退化嚴(yán)重,其趾可以同源到人類(lèi)的手指。并且對(duì)于人類(lèi)有限的指再生能力,使得蠑螈趾再生相對(duì)于附肢再生的研究更有應(yīng)用前景。然而到目前為止,對(duì)于蠑螈趾部再生研究的報(bào)道甚少。本文首次開(kāi)展了墨西哥鈍口螈趾部切除再生的相關(guān)實(shí)驗(yàn),包括研究再生過(guò)程形態(tài)組織學(xué)分析及基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的時(shí)空表達(dá)模式和功能等。首先開(kāi)展了趾部再生形態(tài)學(xué)觀(guān)察,蠑螈的趾部再生周期為5-6周。HE染色組織學(xué)分析,將趾部再生分3個(gè)階段。創(chuàng)傷愈合期,手術(shù)創(chuàng)傷幾小時(shí)后傷口附近表皮細(xì)胞遷移形成單層傷口表皮(WE)覆蓋住傷口；芽基形成期(創(chuàng)傷后3-10天),在增厚的WE(或稱(chēng)頂表皮帽,AEC)下方間質(zhì)細(xì)胞聚集,進(jìn)一步形成了錐體型結(jié)構(gòu)的再生芽基；分化和形態(tài)發(fā)生期,14天時(shí)在芽基內(nèi)部出現(xiàn)分化的軟骨細(xì)胞,繼而經(jīng)過(guò)復(fù)雜的分化和形態(tài)發(fā)生過(guò)程,形成血管、骨骼等,組裝成完整的趾。其次通過(guò)原位雜交技術(shù)對(duì)再生過(guò)程中相關(guān)的MMPs家族重要基因進(jìn)行時(shí)空表達(dá)模式探究。結(jié)果顯示,3個(gè)基因主要在創(chuàng)傷愈合期和芽基期以特定形式表達(dá)。MM...

【文章頁(yè)數(shù)】：81 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 綜述
    1. 再生及蠑螈再生研究進(jìn)展
        1.1 再生研究概況
        1.2 蠑螈與其再生簡(jiǎn)介
        1.3 蠑螈附肢再生過(guò)程
        1.4 蠑螈再生研究?jī)r(jià)值
    2 基質(zhì)金屬蛋白酶研究進(jìn)展
        2.1 研究背景
            2.1.1 分子技術(shù)背景
            2.1.2 MMPs研究趨勢(shì)
        2.2 MMPs種類(lèi)及特性
        2.3 再生中的MMPs研究
        2.4 MMPs功能活動(dòng)小結(jié)
    3 研究目的及意義
    4 研究路線(xiàn)
第二章 墨西哥鈍口螈趾部再生的形態(tài)學(xué)觀(guān)察和組織學(xué)分析
    1 研究的目的和意義
    2 實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
        2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象——墨西哥鈍口螈（mbystoma mexicanum)
        2.2 實(shí)驗(yàn)藥品
        2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.4 實(shí)驗(yàn)流程
        2.5 實(shí)驗(yàn)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        3.1 蠑螈趾部分的再生情況
        3.2 蠑螈再生趾頭的HE染色結(jié)果
        3.3 討論
    4 總結(jié)
第三章 蠑螈趾部再生相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶基因MMP3/10a、MMP3/10b和MMP9鑒定與時(shí)空表達(dá)模式研究
    1 前言
    2 實(shí)驗(yàn)材料及用品
        2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象——墨西哥鈍口螈(Ambystoma mexicanum)
        2.2 主要化學(xué)試劑及儀器設(shè)備
        2.3 主要儀器設(shè)備
    3.實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線(xiàn)
        3.2 引物的設(shè)計(jì)
        3.3 基因MMP3/10a、MMP3/10b和MMP9片段的克隆
        3.4 原位雜交
            3.4.1 實(shí)驗(yàn)所用試劑及配制方法
            3.4.2 探針合成
            3.4.3 組織原位雜交步驟
        3.5 Real-Time qPCR
    4 結(jié)果
        4.1 基因MMP3/10a、MMP3/10b和MMP9片段克隆
            4.1.1 基因片段克隆模板的制備
            4.1.2 基因編碼區(qū)片段的PCR擴(kuò)增
            4.1.3 基因PCR產(chǎn)物的回收、純化
            4.1.4 原核重組子構(gòu)建
            4.1.5 MMP3/10a、MMP3/10b和MMP9的克隆測(cè)序結(jié)果
        4.2 MMPs在趾部再生過(guò)程中的表達(dá)模式
            4.2.1 RNA探針的合成
            4.2.2 原位雜交
        4.3 MMPs在趾部再生不同時(shí)期相對(duì)表達(dá)量
    5.討論與小結(jié)
    6.總結(jié)
第四章 MMPs酶活性鑒定
    1 試劑
    2 酶譜SDS-PAGE
    3 結(jié)果與討論
    4 小結(jié)
第五章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷
發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3841935