志賀氏菌(Shigella castellani)是一類短小的桿菌,屬于革蘭氏陰性菌。它是人類和靈長類動物的腸道致病菌,是最常見的病原體之一,可以導(dǎo)致細(xì)菌性痢疾。人類容易感染志賀氏菌,只需較少的菌量就可以使人類患病,主要在發(fā)展中國家流行,在我國的發(fā)病率僅次于肺炎和結(jié)核,同時對全球醫(yī)療衛(wèi)生系統(tǒng)構(gòu)成重大威脅。目前,研究者已經(jīng)針對預(yù)防志賀氏菌研發(fā)出一種新型多糖結(jié)合疫苗,這種疫苗雖然具有預(yù)防作用,但是往往還存在著免疫原性較差、免疫過程中需要佐劑的添加才能有效發(fā)揮效用等缺點,并且制備過程也較繁瑣,存在許多弊端。因此,對新型多糖結(jié)合疫苗的進(jìn)一步改造優(yōu)化工作已成為急需研究的熱點。通過對新型多糖結(jié)合疫苗的改造,以期達(dá)到使其成為更加經(jīng)濟、高效的疫苗的目的,使其具有更廣闊的應(yīng)用前景。本研究從兩方面對新型多糖結(jié)合疫苗進(jìn)行了改造優(yōu)化,主要研究結(jié)果如下:1.為提高其免疫原性,減少佐劑的添加,將在免疫反應(yīng)過程中具有重要作用的細(xì)菌脂蛋白添加到多糖結(jié)合疫苗中。脂蛋白在免疫系統(tǒng)中既可以觸發(fā)宿主的先天性免疫系統(tǒng),又可以引起適應(yīng)性免疫應(yīng)答反應(yīng),可以作為疫苗的有效成分之一。將脂化區(qū)域?qū)胍呀?jīng)構(gòu)建好的多糖結(jié)合疫苗載體,轉(zhuǎn)入志賀...

【文章頁數(shù)】：37 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 細(xì)菌脂蛋白
        1.1.1 細(xì)菌脂蛋白生物合成途徑
        1.1.2 細(xì)菌脂蛋白的功能研究
        1.1.3細(xì)菌脂蛋白激活TLR2
    1.2 細(xì)菌蛋白胞外分泌表達(dá)載體蛋白YebF
        1.2.1 YebF蛋白結(jié)構(gòu)
        1.2.2 YebF胞外分泌機制
    1.3 志賀氏菌研究現(xiàn)狀
        1.3.1 志賀氏菌
        1.3.2 志賀氏菌致病機理
    1.4 本文研究目的及意義
        1.4.1 研究內(nèi)容
        1.4.2 技術(shù)路線
第二章 志賀氏菌多糖結(jié)合疫苗的脂化構(gòu)建及糖蛋白脂化檢測
    2.1 材料和儀器
    2.2 方法
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 志賀氏菌301DWP菌落PCR鑒定
        2.3.2 脂化志賀氏菌301DWP/Lipo-CTB蛋白誘導(dǎo)表達(dá)
        2.3.3 脂化志賀氏菌301DWP/Lipo-CTB電鏡檢測
        2.3.4 脂化志賀氏菌301DWP/Lipo-CTB與 TLR2 結(jié)合效果檢測
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 志賀氏菌脂蛋白的純化及動物免疫
    3.1 材料和儀器
    3.2 方法
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 志賀氏菌301DWP脂蛋白的純化
        3.3.2 志賀氏菌301DWP脂蛋白的糖定量
        3.3.3 志賀氏菌301DWP脂蛋白的蛋白定量
        3.3.4 ELISA法檢測小鼠血清效價
        3.3.5 體外殺菌實驗
        3.3.6 免疫后攻毒實驗
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 志賀氏菌多糖結(jié)合疫苗外分泌系統(tǒng)的構(gòu)建及蛋白外分泌檢測
    4.1 材料和儀器
    4.2 方法
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 可溶性內(nèi)源蛋白YebF片段的獲取
        4.3.2 載體同源臂的獲取
        4.3.3 志賀氏菌301DWP/YebF-CTB外分泌系統(tǒng)的構(gòu)建
        4.3.4 志賀氏菌蛋白外分泌系統(tǒng)的蛋白誘導(dǎo)表達(dá)
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號：3812044