胃癌是全世界范圍內(nèi)常見(jiàn)的消化系統(tǒng)腫瘤之一,其死亡率一直居高不下。由于復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制,且惡性病變程度對(duì)病人的身體健康造成了嚴(yán)重威脅,目前臨床尚無(wú)針對(duì)其的早期特異性診斷和有效治療方法。因此,開(kāi)發(fā)新的早期診斷和治療方法是目前的研究重點(diǎn)。在腫瘤研究中,應(yīng)用生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù),篩選與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的基因,可為臨床對(duì)疾病診斷和新藥開(kāi)發(fā)提供新的科學(xué)依據(jù)。微小RNA(microRNA)作為一種小的非編碼RNA參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展,在許多進(jìn)程中發(fā)揮重要作用,包括參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移、分化等等。隨著近年來(lái)對(duì)miRNA的深入研究,越來(lái)越多的研究結(jié)果表明,腫瘤中部分miRNA表達(dá)失調(diào),可以通過(guò)扮演原癌基因或者抑癌基因的角色進(jìn)一步參與調(diào)控腫瘤的發(fā)生發(fā)展。有絲分裂阻滯缺陷蛋白2(MAD2L1)是有絲分裂檢查點(diǎn)復(fù)合蛋白的重要組成部分,MAD2L1基因在人中位于4號(hào)染色體,在小鼠中位于6號(hào)染色體上。本研究利用生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)分析發(fā)現(xiàn),與正常組織相比,MAD2L1在胃癌組織中顯著高表達(dá);MAD2L1與miR-30a-3p表達(dá)顯著負(fù)相關(guān);miR-30a-3p可以和MAD2L1的3’-UTR區(qū)結(jié)合,推測(cè)MAD2...

【文章頁(yè)數(shù)】：81 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略詞表
1.緒論
    1.1 生物信息學(xué)在腫瘤研究中的應(yīng)用
    1.2 胃癌研究現(xiàn)狀
    1.3 miRNA概述
    1.4 胃癌與miRNA
    1.5 miR-30a-3p研究進(jìn)展
    1.6 MAD2L1研究進(jìn)展
2.實(shí)驗(yàn)材料與試劑
    2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.3 主要試劑的制備
        2.3.1 Western blot試劑的制備
        2.3.2 分子克隆培養(yǎng)基的制備
        2.3.3 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑的制備
3.生物信息學(xué)預(yù)測(cè)分析胃癌關(guān)鍵基因和miR-30a-3p
    3.1 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1.1 GEO數(shù)據(jù)庫(kù)分析差異表達(dá)基因
        3.1.2 TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析差異表達(dá)基因
        3.1.3 GEO與 TCGA所得差異表達(dá)基因取交集
        3.1.4 PPI分析差異表達(dá)基因
        3.1.5 TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)結(jié)合Target Scan分析差異表達(dá)基因和篩選miR-30a-3p
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 GEO數(shù)據(jù)庫(kù)分析差異表達(dá)基因
        3.2.2 TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析差異表達(dá)基因
        3.2.3 GEO與 TCGA所得差異表達(dá)基因取交集
        3.2.4 PPI分析96個(gè)差異表達(dá)基因的關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖
        3.2.5 生物信息學(xué)分析MAD2L1
        3.2.6 生物信息學(xué)分析和篩選miR-30a-3p
        3.2.7 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)分析miR-30a-3p和 MAD2L1 的靶向關(guān)系
    3.3 討論
4.miR-30a-3p在胃癌細(xì)胞中的生物學(xué)功能
    4.1 實(shí)驗(yàn)方法
        4.1.1 準(zhǔn)備工作
        4.1.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.1.3 轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
        4.1.4 細(xì)胞RNA的提取
        4.1.5 RNA逆轉(zhuǎn)錄及qRT-PCR實(shí)驗(yàn)
        4.1.6 MTT實(shí)驗(yàn)
        4.1.7 克隆形成實(shí)驗(yàn)
        4.1.8 細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)
        4.1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.2.1 轉(zhuǎn)染效率驗(yàn)證
        4.2.2 miR-30a-3p對(duì)胃癌細(xì)胞增殖能力的影響
        4.2.3 miR-30a-3p對(duì)胃癌細(xì)胞周期的影響
    4.3 討論
5.miR-30a-3p靶向MAD2L1
    5.1 實(shí)驗(yàn)方法
        5.1.1 準(zhǔn)備工作
        5.1.2 HEK-293細(xì)胞基本信息
        5.1.3 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        5.1.4 細(xì)胞蛋白的提取及蛋白定量
        5.1.5 Western blot實(shí)驗(yàn)
        5.1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    5.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.2.1 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證
        5.2.2 miR-30a-3p對(duì)MAD2L1蛋白水平的影響
    5.3 討論
6.同時(shí)過(guò)表達(dá)miR-30a-3p和 MAD2L1 對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的影響
    6.1 實(shí)驗(yàn)方法
        6.1.1 MTT實(shí)驗(yàn)
        6.1.2 細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)
        6.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    6.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        6.2.1 同時(shí)過(guò)表達(dá)miR-30a-3p和 MAD2L1 對(duì)胃癌細(xì)胞增殖能力的影響
        6.2.2 同時(shí)過(guò)表達(dá)miR-30a-3p和 MAD2L1 對(duì)胃癌細(xì)胞周期的影響
    6.3 討論
7.結(jié)論與展望
    7.1 結(jié)論
    7.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果



本文編號(hào)：3781512