胃癌是全世界范圍內常見的消化系統(tǒng)腫瘤之一,其死亡率一直居高不下。由于復雜的發(fā)病機制,且惡性病變程度對病人的身體健康造成了嚴重威脅,目前臨床尚無針對其的早期特異性診斷和有效治療方法。因此,開發(fā)新的早期診斷和治療方法是目前的研究重點。在腫瘤研究中,應用生物信息學數(shù)據(jù)庫,篩選與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關的基因,可為臨床對疾病診斷和新藥開發(fā)提供新的科學依據(jù)。微小RNA(microRNA)作為一種小的非編碼RNA參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展,在許多進程中發(fā)揮重要作用,包括參與調控腫瘤細胞的增殖、凋亡、遷移、分化等等。隨著近年來對miRNA的深入研究,越來越多的研究結果表明,腫瘤中部分miRNA表達失調,可以通過扮演原癌基因或者抑癌基因的角色進一步參與調控腫瘤的發(fā)生發(fā)展。有絲分裂阻滯缺陷蛋白2(MAD2L1)是有絲分裂檢查點復合蛋白的重要組成部分,MAD2L1基因在人中位于4號染色體,在小鼠中位于6號染色體上。本研究利用生物信息學數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn),與正常組織相比,MAD2L1在胃癌組織中顯著高表達;MAD2L1與miR-30a-3p表達顯著負相關;miR-30a-3p可以和MAD2L1的3’-UTR區(qū)結合,推測MAD2...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略詞表
1.緒論
    1.1 生物信息學在腫瘤研究中的應用
    1.2 胃癌研究現(xiàn)狀
    1.3 miRNA概述
    1.4 胃癌與miRNA
    1.5 miR-30a-3p研究進展
    1.6 MAD2L1研究進展
2.實驗材料與試劑
    2.1 實驗儀器
    2.2 實驗試劑
    2.3 主要試劑的制備
        2.3.1 Western blot試劑的制備
        2.3.2 分子克隆培養(yǎng)基的制備
        2.3.3 細胞實驗相關試劑的制備
3.生物信息學預測分析胃癌關鍵基因和miR-30a-3p
    3.1 實驗方法
        3.1.1 GEO數(shù)據(jù)庫分析差異表達基因
        3.1.2 TCGA數(shù)據(jù)庫分析差異表達基因
        3.1.3 GEO與 TCGA所得差異表達基因取交集
        3.1.4 PPI分析差異表達基因
        3.1.5 TCGA數(shù)據(jù)庫結合Target Scan分析差異表達基因和篩選miR-30a-3p
    3.2 實驗結果
        3.2.1 GEO數(shù)據(jù)庫分析差異表達基因
        3.2.2 TCGA數(shù)據(jù)庫分析差異表達基因
        3.2.3 GEO與 TCGA所得差異表達基因取交集
        3.2.4 PPI分析96個差異表達基因的關系網(wǎng)絡圖
        3.2.5 生物信息學分析MAD2L1
        3.2.6 生物信息學分析和篩選miR-30a-3p
        3.2.7 生物信息學預測分析miR-30a-3p和 MAD2L1 的靶向關系
    3.3 討論
4.miR-30a-3p在胃癌細胞中的生物學功能
    4.1 實驗方法
        4.1.1 準備工作
        4.1.2 細胞培養(yǎng)
        4.1.3 轉染實驗
        4.1.4 細胞RNA的提取
        4.1.5 RNA逆轉錄及qRT-PCR實驗
        4.1.6 MTT實驗
        4.1.7 克隆形成實驗
        4.1.8 細胞周期實驗
        4.1.9 統(tǒng)計學分析
    4.2 實驗結果
        4.2.1 轉染效率驗證
        4.2.2 miR-30a-3p對胃癌細胞增殖能力的影響
        4.2.3 miR-30a-3p對胃癌細胞周期的影響
    4.3 討論
5.miR-30a-3p靶向MAD2L1
    5.1 實驗方法
        5.1.1 準備工作
        5.1.2 HEK-293細胞基本信息
        5.1.3 雙熒光素酶報告基因實驗
        5.1.4 細胞蛋白的提取及蛋白定量
        5.1.5 Western blot實驗
        5.1.6 統(tǒng)計學分析
    5.2 實驗結果
        5.2.1 雙熒光素酶報告基因實驗驗證
        5.2.2 miR-30a-3p對MAD2L1蛋白水平的影響
    5.3 討論
6.同時過表達miR-30a-3p和 MAD2L1 對胃癌細胞增殖的影響
    6.1 實驗方法
        6.1.1 MTT實驗
        6.1.2 細胞周期實驗
        6.1.3 統(tǒng)計學分析
    6.2 實驗結果
        6.2.1 同時過表達miR-30a-3p和 MAD2L1 對胃癌細胞增殖能力的影響
        6.2.2 同時過表達miR-30a-3p和 MAD2L1 對胃癌細胞周期的影響
    6.3 討論
7.結論與展望
    7.1 結論
    7.2 展望
參考文獻
致謝
攻讀學位期間取得的研究成果



本文編號：3781512