VDR(Vitamin D Receptor,VDR)是轉(zhuǎn)錄因子核受體家族的成員,主要通過調(diào)控靶基因的表達,參與調(diào)節(jié)鈣與磷酸鹽代謝、骨骼發(fā)育、脂代謝、細胞增殖分化、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、免疫調(diào)節(jié),抗腫瘤發(fā)生和生殖調(diào)控等多種生物學(xué)功能。實驗室前期構(gòu)建了VDR敲除鼠,發(fā)現(xiàn)VDR敲除后小鼠生殖能力顯著下降,脂肪合成減少�；诖�,本研究采用Illumina Hiseq測序平臺,對6月齡和12月齡的VDR敲除型和野生型小鼠睪丸組織進行了轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析,以期在睪丸組織中篩選出受VDR調(diào)控的與脂代謝相關(guān)的相關(guān)基因。在獲得脂代謝基因SCD-1(stearoyl-coA desaturase1,SCD-1)后,利用RT-q PCR技術(shù)對SCD-1基因進行組織表達譜分析,然后采用細胞免疫化學(xué)染色方法分析SCD-1在睪丸組織不同類型細胞中的表達水平和細胞定位,最后基于VDR和篩選的脂代謝基因SCD-1的超表達和干擾實驗,通過RT-qPCR和Western blot技術(shù)在小鼠睪丸間質(zhì)細胞探究了VDR和SCD-1的互調(diào)關(guān)系。本研究獲得了小鼠睪丸組織中VDR調(diào)控的脂代謝基因,并初步分析了VDR與SCD-1之間的相互影響關(guān)系...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 維生素D受體
        1.1.1 維生素D與維生素D受體
        1.1.2 VDR基因組及非基因組效應(yīng)
        1.1.3 VDR的生物學(xué)功能及相關(guān)疾病
        1.1.4 VDR與脂代謝
        1.1.5 VDR與生殖
    1.2硬脂酰輔酶A去飽和酶1
        1.2.1 SCD-1 的發(fā)現(xiàn)與結(jié)構(gòu)
        1.2.2 SCD-1 的表達調(diào)控
        1.2.3 SCD-1 的生物學(xué)功能
        1.2.4 SCD-1 與脂代謝
    1.3 轉(zhuǎn)錄組分析研究進展
    1.4 研究的目的及意義
第2章 轉(zhuǎn)錄組測序質(zhì)量分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
        2.1.4 參考基因組基本信息統(tǒng)計
    2.2 實驗方法
        2.2.1 總RNA提取與檢測
        2.2.2 cDNA合成與文庫富集
        2.2.3 文庫質(zhì)檢
        2.2.4 轉(zhuǎn)錄組測序
        2.2.5 原始數(shù)據(jù)整理
        2.2.6 原始數(shù)據(jù)過濾
        2.2.7 參考基因組基因功能注釋整理
        2.2.8 比對分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 RNA提取與檢測
        2.3.2 測序質(zhì)量分析
        2.3.3 數(shù)據(jù)組裝與參考注釋
        2.3.4 測序數(shù)據(jù)比對
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第3章 睪丸組織轉(zhuǎn)錄組分析及脂代謝相關(guān)基因篩選
    3.1 實驗材料
    3.2 實驗方法
        3.2.1 基因表達量分析
        3.2.2 基因表達差異分析
        3.2.3 多組差異表達基因比較分析
        3.2.4 熱圖聚類分析
        3.2.5 差異表達基因GO富集分析
        3.2.6 差異表達基因KEGG富集分析
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 不同樣本睪丸組織基因表達量
        3.3.2 不同樣本睪丸組織差異基因統(tǒng)計
        3.3.3 表達差異基因分析
        3.3.4 6月齡和12 月齡共同差異表達基因分析
        3.3.5 差異表達基因GO富集分析
        3.3.6 差異表達基因KEGG富集分析
        3.3.7 VDR-/-和WT小鼠睪丸組織脂代謝差異基因統(tǒng)計
        3.3.8 VDR-/-和WT小鼠睪丸組織脂代謝差異表達基因表達模式
        3.3.9 小鼠睪丸組織脂代謝相關(guān)共差異表達基因篩選
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第4章 VDR對小鼠睪丸組織SCD-1 基因表達的影響
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗動物及細胞
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器設(shè)備
    4.2 實驗方法
        4.2.1 細胞免疫熒光染色檢測SCD-1 表達定位
        4.2.2 Real-time qPCR
        4.2.3 構(gòu)建SCD-1 超表達載體
        4.2.4 構(gòu)建VDR超表達載體
        4.2.5 重組載體表達分析
        4.2.6 干擾表達分析
        4.2.7 細胞培養(yǎng)
        4.2.8 Western blot
    4.3 實驗結(jié)果與分析
        4.3.1 野生型和VDR敲除型小鼠SCD-1 基因的組織差異表達
        4.3.2 SCD-1 基因在睪丸組織細胞系(TM3、GC-1、C18-4)的表達定位
        4.3.3 SCD-1 過表達載體的構(gòu)建
        4.3.4 EGFP-VDR融合表達載體構(gòu)建與驗證
        4.3.5 TM3 細胞中過表達VDR對 SCD-1 表達的影響
        4.3.6 TM3 細胞中干擾VDR對 SCD-1 表達的影響
        4.3.7 TM3 細胞中SCD-1 負向調(diào)節(jié)VDR表達
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
附錄 (試劑配制)
攻讀碩士期間取得的科研成果
致謝



本文編號：3778558