隨著基因工程和細胞工程的發(fā)展,利用高密度動物細胞生產(chǎn)的重組抗體藥物展示出良好的治療效果和市場效益,市場需求日益增加。由于動物細胞的培養(yǎng)周期長,無菌要求高以及藥物研發(fā)的周期要求越來越短等因素影響,促使了一次性產(chǎn)品的快速發(fā)展。本文針對動物細胞抗體生產(chǎn)上游培養(yǎng)與收獲環(huán)節(jié),對一次性生物反應(yīng)器和一次性單級澄清過濾系統(tǒng)進行測試與評估。通過對兩種一次性生物反應(yīng)器（一次性攪拌罐式生物反應(yīng)器和WAVE波浪式生物反應(yīng)器）與傳統(tǒng)生物反應(yīng)器的對比結(jié)果顯示,一次性攪拌罐式生物反應(yīng)器與傳統(tǒng)生物反應(yīng)器由于結(jié)構(gòu)及工作原理相似,生產(chǎn)中無論從細胞生長狀態(tài)、代謝產(chǎn)物分析、抗體表達水平及最終產(chǎn)品質(zhì)量都可以較容易的達到很好的一致性。而WAVE波浪式生物反應(yīng)器與其他兩種攪拌式生物反應(yīng)器工作原理上有所不同,所以抗體表達量和細胞生長相對差一些。在細胞培養(yǎng)初期,三種生物反應(yīng)器各種檢測結(jié)果可以達到一致;但到了中后期,WAVE波浪式生物反應(yīng)器,由于代謝副產(chǎn)物濃度過高,抑制了細胞的生長,從而影響了產(chǎn)量,但最終產(chǎn)品的質(zhì)量未受影響,在此次比較測試中未能達到預(yù)期的結(jié)果,今后在培養(yǎng)條件控制上仍需要進一步優(yōu)化。在對一次性單級過濾澄清系統(tǒng)的優(yōu)化中,使用... 

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 研究的目的和意義
    1.2 研究背景
        1.2.1 重組抗體生產(chǎn)的研究背景
            1.2.1.1 重組抗體的簡介
            1.2.1.2 重組抗體的生產(chǎn)途徑
        1.2.2 一次性生物反應(yīng)器的研究背景
            1.2.2.1 一次性生物反應(yīng)器的種類和選擇
            1.2.2.2 一次性生物反應(yīng)器的應(yīng)用范圍
            1.2.2.3 一次性生物反應(yīng)器的優(yōu)點
        1.2.3 澄清過濾系統(tǒng)的研究背景
            1.2.3.1 過濾的含義
            1.2.3.2 過濾的機理
            1.2.3.3 影響過濾的因素
            1.2.3.4 制藥使用的過濾器分類與特性
            1.2.3.5 過濾器的選擇原則
            1.2.3.6 過濾系統(tǒng)的常規(guī)配置
            1.2.3.7 抗體生產(chǎn)中的細胞培養(yǎng)液澄清工藝
    1.3 研究思路及內(nèi)容
        1.3.1 研究思路
        1.3.2 研究內(nèi)容
第2章 一次性生物反應(yīng)器在重組抗體生產(chǎn)中的應(yīng)用
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗細胞株
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 實驗耗材
        2.1.4 實驗儀器
    2.2 實驗過程與方法
        2.2.1 實驗過程
            2.2.1.1 培養(yǎng)基的制備
            2.2.1.2 種子的制備
            2.2.1.3 接種前各生物反應(yīng)器的準備工作
            2.2.1.4 細胞培養(yǎng)
            2.2.1.5 細胞收獲
            2.2.1.6 抗體的純化
        2.2.2 樣品處理及分析方法
            2.2.2.1 細胞計數(shù)方法
            2.2.2.2 細胞培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)及代謝產(chǎn)物的測定方法
            2.2.2.3 SDS-PAGE蛋白電泳方法
            2.2.2.4 等電聚焦電泳（IEF）方法
            2.2.2.5 Affinity-HPLC檢測方法
            2.2.2.6 SEC-HPLC檢測方法
            2.2.2.7 LC-MS檢測方法
            2.2.2.8 Fortebio檢測方法
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 不同反應(yīng)器中細胞生長的比較
        2.3.2 營養(yǎng)物質(zhì)和代謝產(chǎn)物的檢測和比較
        2.3.3 抗體表達水平的測定
        2.3.4 抗體質(zhì)量的分析比較
            2.3.4.1 SDS-Page電泳分析
            2.3.4.2 LC-MS檢測
            2.3.4.3 等電聚焦電泳分析
            2.3.4.4 多聚體檢測
            2.3.4.5 結(jié)合活性檢測
    2.4 結(jié)果分析與討論
第3章 一次性澄清過濾系統(tǒng)在重組抗體生產(chǎn)中的應(yīng)用
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗試劑
        3.1.2 實驗耗材
        3.1.3 實驗儀器
    3.2 實驗方法與過程
        3.2.1 實驗分組及樣品預(yù)處理
        3.2.2 實驗過程
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 新濾器過濾結(jié)果
            3.3.1.1 料液特性及工藝需求
            3.3.1.2 料液未預(yù)處理過濾結(jié)果
            3.3.1.3 料液預(yù)處理過濾結(jié)果
        3.3.2 新濾器與現(xiàn)有配置濾器對比結(jié)果
            3.3.2.1 澄清過濾效果與配置對比結(jié)果
            3.3.2.2 抗體收率的對比結(jié)果
            3.3.2.3 最終產(chǎn)物質(zhì)量對比結(jié)果
    3.4 結(jié)果分析與討論
結(jié)論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3725986