昆蟲種類繁多、數(shù)量龐大,分布范圍極為廣泛,其體內(nèi)蘊(yùn)含著豐富多樣的微生物資源。針對(duì)昆蟲內(nèi)生真菌進(jìn)行系統(tǒng)分離、保藏和研究,不僅可以豐富微生物資源,也可以為開發(fā)結(jié)構(gòu)新穎、類型豐富的微生物活性代謝產(chǎn)物奠定基礎(chǔ)。本研究以秦嶺鱗翅目昆蟲為研究對(duì)象,建立了鱗翅目昆蟲內(nèi)生真菌高效分離、鑒定體系;在此基礎(chǔ)上,對(duì)采集自秦嶺四個(gè)不同生境的鱗翅目昆蟲內(nèi)生真菌進(jìn)行了分離、鑒定及統(tǒng)計(jì)分析,建立秦嶺鱗翅目昆蟲內(nèi)生真菌資源。最后,針對(duì)分離的內(nèi)生真菌,進(jìn)行活性代謝產(chǎn)物的研究,對(duì)高活性菌株次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行系統(tǒng)分離,并對(duì)獲得的單體化合物進(jìn)行初步分析,為發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)新穎的抗菌活性化合物奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.鱗翅目昆蟲內(nèi)生真菌高效分離鑒定體系的建立。通過三種不同方式對(duì)鱗翅目昆蟲預(yù)處理后進(jìn)行內(nèi)生真菌分離,確立最適預(yù)處理方式為組織剪切法;通過五種分離培養(yǎng)基對(duì)鱗翅目昆蟲內(nèi)生真菌進(jìn)行分離,確立最適分離培養(yǎng)基為孟加拉紅培養(yǎng)基;采取機(jī)械破壁聯(lián)合微波法獲取內(nèi)生真菌DNA模板進(jìn)行ITS序列擴(kuò)增,并采取單因素法進(jìn)行條件優(yōu)化,最終確立機(jī)械破壁聯(lián)合微波法鑒定內(nèi)生真菌的方法為:挑取少半環(huán)菌絲體,裝于100μL 10×Buffer TE的2 mL... 

【文章來源】：陜西理工大學(xué)陜西省

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

鱗翅目昆蟲體表消毒結(jié)果

陜西理工大學(xué)碩士學(xué)位論文32其中Pi=Ni/N，Pi是指第i種內(nèi)生真菌的菌株數(shù)占全部?jī)?nèi)生真菌菌株數(shù)的百分比，S指不同生境鱗翅目昆蟲內(nèi)生真菌的種類數(shù)，N為不同生境鱗翅目昆蟲內(nèi)生真菌的總數(shù)。相似性系數(shù)（Sorensonsimilaritycoefficient，Cs）用于分析比較兩種不同生境間鱗翅目昆蟲內(nèi)生真菌種類組成的相似程度[139]。Cs=2j/（a+b），其中j是兩種生境中共同具有的內(nèi)生真菌種類數(shù)；a是其中一個(gè)生境中的內(nèi)生真菌種類數(shù)；b是另一個(gè)生境中的內(nèi)生真菌種類數(shù)。3.3結(jié)果與分析3.3.1試驗(yàn)材料體表消毒結(jié)果檢驗(yàn)漂洗液檢驗(yàn)法組織印跡法圖3-1鱗翅目昆蟲體表消毒結(jié)果Fig.3-1ResultsofsurfacedisinfectionofLepidoptera鱗翅目昆蟲體表消毒結(jié)果如圖3-1所示，漂洗液檢驗(yàn)法和組織印跡法的培養(yǎng)基正反面都無雜菌生長(zhǎng)，表明昆蟲樣本表面消毒徹底。3.3.2秦嶺鱗翅目昆蟲內(nèi)生真菌的分離純化結(jié)果本研究采取組織剪切法、孟加拉紅培養(yǎng)基對(duì)西安鄠邑區(qū)、寶雞鳳縣、漢中留壩縣、商洛柞水縣四個(gè)不同生境采集的鱗翅目昆蟲樣本進(jìn)行多次分離，共得到237株內(nèi)生真菌，其中從西安鄠邑區(qū)的樣本中共分離得到73株，從寶雞鳳縣的樣本中共分離得到66株，從漢中留壩的樣本中共分離得到51株，從商洛柞水縣的樣本中共分離得到47株。部分內(nèi)生真菌分離平板、菌落形態(tài)特征分別如圖3-2、3-3所示。圖3-2秦嶺鱗翅目昆蟲部分內(nèi)生真菌分離平板Fig.3-2PlateisolationofsomeendophyticfungusinLepidopteraofqinlingmountains

陜西理工大學(xué)碩士學(xué)位論文32其中Pi=Ni/N，Pi是指第i種內(nèi)生真菌的菌株數(shù)占全部?jī)?nèi)生真菌菌株數(shù)的百分比，S指不同生境鱗翅目昆蟲內(nèi)生真菌的種類數(shù)，N為不同生境鱗翅目昆蟲內(nèi)生真菌的總數(shù)。相似性系數(shù)（Sorensonsimilaritycoefficient，Cs）用于分析比較兩種不同生境間鱗翅目昆蟲內(nèi)生真菌種類組成的相似程度[139]。Cs=2j/（a+b），其中j是兩種生境中共同具有的內(nèi)生真菌種類數(shù)；a是其中一個(gè)生境中的內(nèi)生真菌種類數(shù)；b是另一個(gè)生境中的內(nèi)生真菌種類數(shù)。3.3結(jié)果與分析3.3.1試驗(yàn)材料體表消毒結(jié)果檢驗(yàn)漂洗液檢驗(yàn)法組織印跡法圖3-1鱗翅目昆蟲體表消毒結(jié)果Fig.3-1ResultsofsurfacedisinfectionofLepidoptera鱗翅目昆蟲體表消毒結(jié)果如圖3-1所示，漂洗液檢驗(yàn)法和組織印跡法的培養(yǎng)基正反面都無雜菌生長(zhǎng)，表明昆蟲樣本表面消毒徹底。3.3.2秦嶺鱗翅目昆蟲內(nèi)生真菌的分離純化結(jié)果本研究采取組織剪切法、孟加拉紅培養(yǎng)基對(duì)西安鄠邑區(qū)、寶雞鳳縣、漢中留壩縣、商洛柞水縣四個(gè)不同生境采集的鱗翅目昆蟲樣本進(jìn)行多次分離，共得到237株內(nèi)生真菌，其中從西安鄠邑區(qū)的樣本中共分離得到73株，從寶雞鳳縣的樣本中共分離得到66株，從漢中留壩的樣本中共分離得到51株，從商洛柞水縣的樣本中共分離得到47株。部分內(nèi)生真菌分離平板、菌落形態(tài)特征分別如圖3-2、3-3所示。圖3-2秦嶺鱗翅目昆蟲部分內(nèi)生真菌分離平板Fig.3-2PlateisolationofsomeendophyticfungusinLepidopteraofqinlingmountains

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[6]鹽漬化極端生態(tài)環(huán)境條件下土壤微生物生態(tài)及放線菌資源[D]. 來航線.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2008

碩士論文
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[2]核桃高活性內(nèi)生真菌篩選及其代謝產(chǎn)物抑菌活性的研究[D]. 劉澤星.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017
[3]應(yīng)用DNA復(fù)合條形碼技術(shù)研究蝗蟲腸道微生物多樣性[D]. 楊麗平.陜西師范大學(xué) 2017
[4]日本弓背蟻共生放線菌的多樣性分析及抑菌活性研究[D]. 郭麗楓.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[5]中華蜂內(nèi)共生放線菌的分離、多樣性及抗菌活性研究[D]. 劉娟.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[6]擬黑多刺蟻共生放線菌的篩選、鑒定及抗菌活性研究[D]. 于超.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[7]兩株昆蟲病原內(nèi)生菌次級(jí)代謝產(chǎn)物研究[D]. 方啟.上海交通大學(xué) 2014
[8]秦嶺“七藥”植物資源及其地理分布格局研究[D]. 王梅.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014
[9]小菜蛾不同發(fā)育階段腸道細(xì)菌多樣性分析[D]. 鄭丹丹.福建農(nóng)林大學(xué) 2013
[10]天津八仙山鱗翅目幼蟲多樣性初步研究[D]. 劉淑蓉.南開大學(xué) 2011



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