七鰓鰻,現(xiàn)存最古老的無(wú)頜類(lèi)脊椎動(dòng)物之一,因其獨(dú)特的進(jìn)化地位和免疫系統(tǒng)獲得了關(guān)注,成為研究脊椎動(dòng)物先天免疫系統(tǒng)、抗氧化系統(tǒng)起源及進(jìn)化的新型模式生物,因此七鰓鰻的先天免疫防御系統(tǒng)中必然存在一系列與解毒及參與水生動(dòng)物氧化抗菌反應(yīng)的相關(guān)蛋白。本論文首次從日本七鰓鰻（Lampetra japonica）白細(xì)胞中獲得了乙醛脫氫酶9（aldehyde dehydrogenase 9,ALDH9）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶4（glutathione peroxidase4,GPx4）的同源基因,通過(guò)基因克隆、重組表達(dá)及生物信息學(xué)方法對(duì)基因進(jìn)行分析預(yù)測(cè),為更好的了解其活性奠定了基礎(chǔ)。乙醛脫氫酶（ALDHs）,能夠?qū)⒉煌╊?lèi)氧化為相應(yīng)的酸類(lèi),在內(nèi)源性和外源性醛解毒過(guò)程中扮演了重要的角色。目前為止ALDH在哺乳動(dòng)物及微生物中已有所研究,但其在魚(yú)類(lèi)及兩棲類(lèi)動(dòng)物中研究較少。本論文首次克隆并原核表達(dá)了來(lái)自于日本七鰓鰻的ALDH9（Lj ALDH9）基因。LjALDH9 ORF區(qū)共1566 bp,編碼521個(gè)氨基酸,理論分子量為55.68 kDa。LjALDH9蛋白含有信號(hào)肽區(qū)域（1-29）、Cys315活性位點(diǎn)及Ald... 

【文章來(lái)源】：遼寧師范大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)表
第1章 引言
    1.1 日本七鰓鰻
        1.1.1 生活史
        1.1.2 組織結(jié)構(gòu)
        1.1.3 功能基因
        1.1.4 免疫相關(guān)基因
    1.2 乙醛脫氫酶
        1.2.1 乙醛脫氫酶家族蛋白概況
        1.2.2 乙醛脫氫酶蛋白功能
        1.2.3 魚(yú)類(lèi)血液中的醛類(lèi)
        1.2.4 乙醛脫氫酶的應(yīng)用展望
    1.3 谷胱甘肽過(guò)氧化物酶
        1.3.1 GPx蛋白家族概況
        1.3.2 GPx蛋白的功能
        1.3.3 GPx作用機(jī)制
        1.3.4 GPx家族蛋白的應(yīng)用展望
    1.4 本研究的目的和意義
第2章 LjALDH9基因的分子克隆、表達(dá)及活性分析
    2.1 材料
        2.1.1 菌株與載體
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 LjALDH9基因的分子克隆
        2.2.2 LjALDH9生物信息學(xué)分析
        2.2.3 LjALDH9基因各組織表達(dá)量分析
        2.2.4 LjALDH9原核表達(dá)
        2.2.5 LjALDH9活性測(cè)定
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 LjALDH9基因克隆
        2.3.2 LjALDH9生物信息學(xué)分析
        2.3.3 LjALDH9各組織相對(duì)表達(dá)量
        2.3.4 LjALDH9原核表達(dá)載體構(gòu)建
        2.3.5 LjALDH9表達(dá)和純化
        2.3.6 LjALDH9酶活性檢測(cè)
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第3章 Gpx4基因的分子克隆、表達(dá)及進(jìn)化分析
    3.1 材料
        3.1.1 菌株與載體
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 方法
        3.2.1 LjGPx4基因的分子克隆及序列分析
        3.2.2 LjGPx4基因各組織表達(dá)量分析
        3.2.3 LjGPx4基因組結(jié)構(gòu)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 LjGPx4基因克隆
        3.3.2 LjGPx4生物信息學(xué)分析
        3.3.3 LjGPx4基因的組織表達(dá)及免疫前后變化
        3.3.4 LjGPx4基因組結(jié)構(gòu)分析
    3.4 討論
第4章 結(jié)論
本文創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄A pET28a(+)質(zhì)粒圖譜
附錄B SanPrep柱式DNA膠回收試劑盒說(shuō)明
附錄C TaKaRA Genomic DNA提取
附錄D 不同物種ALDH9的FASTA格式氨基酸序列（NCBI）
附錄E 不同物種GPx4的FASTA格式氨基酸序列（NCBI）
附錄F 不同物種GPx4的FASTA格式核苷酸序列（NCBI）
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]GC-MS法分析南灣鳙魚(yú)魚(yú)肉揮發(fā)性成分的組成[J]. 趙亮,馬凌云.  食品與機(jī)械. 2011(06)
[2]七鰓鰻（Lampetra japonica）白細(xì)胞cDNA文庫(kù)構(gòu)建及生物信息學(xué)分析[J]. 張寧,劉欣,孫晶,劉岑潔,陳操,李競(jìng),蘆靜,劉慧玲,李慶偉.  遼寧師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2010(02)
[3]日本鰻鱺谷胱甘肽過(guò)氧化物酶1和4的克隆、分析和組織表達(dá)分布[J]. 劉振興,柯浩,曹艷林,張健騑,林敏,孟軒.  中國(guó)水產(chǎn)科學(xué). 2010(03)
[4]鯉魚(yú)揮發(fā)性成分測(cè)定及其產(chǎn)生機(jī)理初探[J]. 楊玉平,焦春海,廖濤,熊光權(quán),程薇,王易芬,吳文錦,李小定,喬宇,李新,耿勝榮,林若泰.  湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(03)
[5]重組七鰓鰻細(xì)胞毒素蛋白rLj-RGD3表達(dá)及對(duì)Hela細(xì)胞活性的影響[J]. 張丕橋,王繼紅,劉欣,褚丹,李慶偉.  生物工程學(xué)報(bào). 2009(05)
[6]谷胱甘肽過(guò)氧化物酶和谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶研究進(jìn)展[J]. 馬森.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2008(10)
[7]硒對(duì)硒蛋白-谷胱甘肽過(guò)氧化物酶基因表達(dá)及其酶活性的調(diào)節(jié)[J]. 于昱,呂林,張億一,羅緒剛.  動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào). 2007(S1)
[8]Glutathione Peroxidase Revisited—Simulation of the Catalytic Cycle by Computer-Assisted Molecular Modelling[J]. K. -D. AUMANN; N. BEDORF; R. BRIGELIUS-FLOHED;D. SCHOMBURG; AND L. FLOHE(Gesellschaft fur Biotechnologische Forschung mbH (GBF) Mascheroder Weg 1, D-38124 Braunschweig, Germany; Deutsches Institut fur Ernahrungsforschung (DIfE) Arthur-Scheunert-Allee 114.  Biomedical and Environmental Sciences. 1997(Z1)

碩士論文
[1]日本七鰓鰻α-天冬氨酰二肽酶和棕櫚酰蛋白硫酯酶1的基因克隆、原核表達(dá)及生物活性研究[D]. 曹瀛.遼寧師范大學(xué) 2013
[2]日本七鰓鰻口腔腺Grimin基因的生物學(xué)活性研究[D]. 麻曉慶.遼寧師范大學(xué) 2007
[3]人乙醛脫氫酶2基因的克隆及表達(dá)[D]. 裘麗珍.浙江大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3574190