苦豆子SaENO2基因的克隆及功能分析
發(fā)布時(shí)間：2021-12-31 13:24
植物在生長發(fā)育過程中會(huì)受到各種各樣的環(huán)境脅迫,鹽堿脅迫就是制約植物生長發(fā)育的脅迫之一。由于土壤鹽堿脅迫不斷加重,使得耕地面積日益減少,農(nóng)作物的產(chǎn)量和質(zhì)量也進(jìn)一步受到影響�？喽棺樱⊿ophora alopecuroides）是多年生豆科槐屬植物,具有耐旱性、耐鹽性顯著的特點(diǎn),在干旱和半干旱地區(qū)廣泛分布,是一個(gè)抗性基因豐富的基因資源庫。本研究利用摩爾比為1:1的Na2CO3和NaHCO3模擬堿脅迫篩選苦豆子cDNA酵母表達(dá)文庫,得到了烯醇化酶基因SaENO2。通過基因重新轉(zhuǎn)入酵母BY4743和擬南芥中過表達(dá)SaENO2,驗(yàn)證了SaENO2基因的功能。本試驗(yàn)將有助于發(fā)掘和鑒定苦豆子的抗逆基因,豐富對植物烯醇化酶生物學(xué)功能的認(rèn)識,有助于深化植物生長發(fā)育和逆境響應(yīng)的分子機(jī)制的認(rèn)識,具有重要的科研創(chuàng)新價(jià)值。本研究主要獲得以下結(jié)果:1.利用0.0026 mol/L摩爾比為1:1的Na2CO3和NaHCO3對苦豆子cDNA酵母表達(dá)文庫進(jìn)行篩選,共得到了9個(gè)抗堿單克隆,對這...
【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：71 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
烯醇化酶在糖酵解過程中的催化作用
培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)酵母(見圖 2.1)，進(jìn)一步確定篩選濃度。結(jié)果發(fā)現(xiàn):在含有0.0026 mol/L 的 1:1 的 Na2CO3 和 NaHCO3 的培養(yǎng)基上，酵母生長狀況較適宜。因次，最終確定以0.0026 mol/L作為篩選抗堿酵母轉(zhuǎn)化子的篩選濃度，并利用0.0026mol/L 的 1:1 的 Na2CO3 和 NaHCO3 對苦豆子 c DNA 酵母表達(dá)文庫進(jìn)行篩選。A
第2章苦豆子cDNA酵母表達(dá)文庫耐堿性篩選15圖2.2抗堿酵母篩選Fig.2.2Screeingofalkaliresistance2.4討論從耐旱性、耐鹽堿性顯著的苦豆子中克隆基因，是獲得抗性基因資源的有效方法。隨著cDNA文庫構(gòu)建技術(shù)的不斷發(fā)展，其在基因克壟功能驗(yàn)證等方面的研究逐漸發(fā)揮優(yōu)勢。研究人員以大花蕙蘭為材料，成功構(gòu)建了以梭梭中花香為主要成分之一的酵母單雜和雙雜交cDNA文庫，研究了茉莉酸甲酯（MeJA）信號通路中相關(guān)蛋白的分子機(jī)制和功能[87]。董道英等[88]成功構(gòu)建了條斑紫菜酵母雙雜交cDNA文庫，從文庫中篩選得到26個(gè)與PyMAPK5互作的候選蛋白，以進(jìn)一步研究條斑紫菜促分裂原活化激酶家族PyMAPK5的下游互作蛋白，理解其生物學(xué)功能。酵母常作為模式生物被研究，其轉(zhuǎn)錄組測序和蛋白質(zhì)組測序已完成，具有良好的研究基矗作為真核生物，酵母細(xì)胞與植物有更為相近的轉(zhuǎn)錄后修飾功能，與植物表達(dá)系統(tǒng)相比，具有培養(yǎng)較為簡單，后期篩選周期短、效率高等優(yōu)點(diǎn)，因而在進(jìn)行抗性基因篩選方面具備更大優(yōu)勢，具有可靠性和快捷性。2.5小結(jié)試驗(yàn)通過對酵母文庫耐堿濃度的梯度試驗(yàn)，最終確定以0.0026mol/L的1:1Na2CO3和NaHCO3作為篩選抗堿酵母轉(zhuǎn)化子的篩選條件。通過對苦豆子cDNA酵母表達(dá)文庫篩選，共得到了9個(gè)單克隆，將9個(gè)單克隆進(jìn)行菌株P(guān)CR檢測，將測序后的序列去除載體序列，再經(jīng)序列對比分析，最終選定了1個(gè)苦豆子抗堿相關(guān)基因，命名為苦豆子烯醇化酶基因（SaENO2）。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]苦豆子賴氨酸脫羧酶基因啟動(dòng)子在擬南芥中的表達(dá)分析[J]. 陸姍姍,洪園淑,劉萍. 草業(yè)學(xué)報(bào). 2019(11)
[2]條斑紫菜酵母雙雜交文庫的構(gòu)建及PyMAPK5互作蛋白的篩選[J]. 董道英,孔凡娜,崔正彩,孫斌. 海洋與湖沼. 2019(06)
[3]ENO1在食管鱗癌中的差異表達(dá)及對食管鱗癌細(xì)胞增殖凋亡的影響[J]. 王文潔,彭昊,李鋒,楊蘭,崔曉賓,陳云昭. 石河子大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2019(05)
[4]苦豆子資源現(xiàn)狀、化學(xué)成分、毒性及其開發(fā)利用研究進(jìn)展[J]. 史芳蕓,邱明寧,李國中,張庚,吳晨晨,路浩,趙寶玉. 黑龍江畜牧獸醫(yī). 2019(13)
[5]植物烯醇化酶基因ENO2的功能研究進(jìn)展[J]. 馬小鳳,劉子金,鄭超星,王星,武宇,李洪杰,張根發(fā). 植物遺傳資源學(xué)報(bào). 2018(06)
[6]植物對非生物脅迫的響應(yīng)機(jī)制研究[J]. 劉燕敏,周海燕,王康,閆洪朗,徐建平,吳俊平,魏小云,何林池. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(16)
[7]水稻OsENO2-2基因過表達(dá)對水稻抽穗期的影響[J]. 劉小云,李曉,李騰飛,蘇魯方. 中國水稻科學(xué). 2018(01)
[8]苦豆子及其生物制品在農(nóng)業(yè)上的綜合應(yīng)用[J]. 高亮,伏國,伏民. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2017(24)
[9]植物對鹽堿脅迫的響應(yīng)機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 王佺珍,劉倩,高婭妮,柳旭. 生態(tài)學(xué)報(bào). 2017(16)
[10]苦豆子種子萌發(fā)期及幼苗期對鹽、旱耐受性的探索[J]. 王彥芹,張寧,李志軍. 分子植物育種. 2017(03)
博士論文
[1]苦豆子植物資源化學(xué)研究[D]. 王漢卿.南京中醫(yī)藥大學(xué) 2014
[2]不結(jié)球白菜抗寒相關(guān)基因的克隆及序列分析[D]. 蔣芳玲.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006
[3]白念珠菌烯醇化酶的研究[D]. 唐寧楓.中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué) 2000
碩士論文
[1]感抗柳枝稷根部響應(yīng)堿脅迫生理生化及轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[D]. 多田琦.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]苦豆子半胱氨酸蛋白酶SaCP1基因的克隆及功能驗(yàn)證[D]. 趙亞男.吉林大學(xué) 2019
[3]鹽脅迫下野大豆（Glycine soja）和栽培大豆（Glycine max）幼苗葉片代謝組學(xué)比較研究[D]. 張婧.東北師范大學(xué) 2017
[4]苦豆子抗鹽相關(guān)基因的篩選及功能分析[D]. 郭文云.吉林大學(xué) 2016
[5]澳大利亞引進(jìn)植物沙漠豆抗旱性與耐鹽性研究[D]. 琴達(dá)木尼.內(nèi)蒙古師范大學(xué) 2013
[6]白念珠菌烯醇化酶及其N端肽段的原核表達(dá)和應(yīng)用研究[D]. 王仕欽.南京師范大學(xué) 2011
本文編號：3560336
【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：71 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
烯醇化酶在糖酵解過程中的催化作用
培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)酵母(見圖 2.1)，進(jìn)一步確定篩選濃度。結(jié)果發(fā)現(xiàn):在含有0.0026 mol/L 的 1:1 的 Na2CO3 和 NaHCO3 的培養(yǎng)基上，酵母生長狀況較適宜。因次，最終確定以0.0026 mol/L作為篩選抗堿酵母轉(zhuǎn)化子的篩選濃度，并利用0.0026mol/L 的 1:1 的 Na2CO3 和 NaHCO3 對苦豆子 c DNA 酵母表達(dá)文庫進(jìn)行篩選。A
第2章苦豆子cDNA酵母表達(dá)文庫耐堿性篩選15圖2.2抗堿酵母篩選Fig.2.2Screeingofalkaliresistance2.4討論從耐旱性、耐鹽堿性顯著的苦豆子中克隆基因，是獲得抗性基因資源的有效方法。隨著cDNA文庫構(gòu)建技術(shù)的不斷發(fā)展，其在基因克壟功能驗(yàn)證等方面的研究逐漸發(fā)揮優(yōu)勢。研究人員以大花蕙蘭為材料，成功構(gòu)建了以梭梭中花香為主要成分之一的酵母單雜和雙雜交cDNA文庫，研究了茉莉酸甲酯（MeJA）信號通路中相關(guān)蛋白的分子機(jī)制和功能[87]。董道英等[88]成功構(gòu)建了條斑紫菜酵母雙雜交cDNA文庫，從文庫中篩選得到26個(gè)與PyMAPK5互作的候選蛋白，以進(jìn)一步研究條斑紫菜促分裂原活化激酶家族PyMAPK5的下游互作蛋白，理解其生物學(xué)功能。酵母常作為模式生物被研究，其轉(zhuǎn)錄組測序和蛋白質(zhì)組測序已完成，具有良好的研究基矗作為真核生物，酵母細(xì)胞與植物有更為相近的轉(zhuǎn)錄后修飾功能，與植物表達(dá)系統(tǒng)相比，具有培養(yǎng)較為簡單，后期篩選周期短、效率高等優(yōu)點(diǎn)，因而在進(jìn)行抗性基因篩選方面具備更大優(yōu)勢，具有可靠性和快捷性。2.5小結(jié)試驗(yàn)通過對酵母文庫耐堿濃度的梯度試驗(yàn)，最終確定以0.0026mol/L的1:1Na2CO3和NaHCO3作為篩選抗堿酵母轉(zhuǎn)化子的篩選條件。通過對苦豆子cDNA酵母表達(dá)文庫篩選，共得到了9個(gè)單克隆，將9個(gè)單克隆進(jìn)行菌株P(guān)CR檢測，將測序后的序列去除載體序列，再經(jīng)序列對比分析，最終選定了1個(gè)苦豆子抗堿相關(guān)基因，命名為苦豆子烯醇化酶基因（SaENO2）。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]苦豆子賴氨酸脫羧酶基因啟動(dòng)子在擬南芥中的表達(dá)分析[J]. 陸姍姍,洪園淑,劉萍. 草業(yè)學(xué)報(bào). 2019(11)
[2]條斑紫菜酵母雙雜交文庫的構(gòu)建及PyMAPK5互作蛋白的篩選[J]. 董道英,孔凡娜,崔正彩,孫斌. 海洋與湖沼. 2019(06)
[3]ENO1在食管鱗癌中的差異表達(dá)及對食管鱗癌細(xì)胞增殖凋亡的影響[J]. 王文潔,彭昊,李鋒,楊蘭,崔曉賓,陳云昭. 石河子大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2019(05)
[4]苦豆子資源現(xiàn)狀、化學(xué)成分、毒性及其開發(fā)利用研究進(jìn)展[J]. 史芳蕓,邱明寧,李國中,張庚,吳晨晨,路浩,趙寶玉. 黑龍江畜牧獸醫(yī). 2019(13)
[5]植物烯醇化酶基因ENO2的功能研究進(jìn)展[J]. 馬小鳳,劉子金,鄭超星,王星,武宇,李洪杰,張根發(fā). 植物遺傳資源學(xué)報(bào). 2018(06)
[6]植物對非生物脅迫的響應(yīng)機(jī)制研究[J]. 劉燕敏,周海燕,王康,閆洪朗,徐建平,吳俊平,魏小云,何林池. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(16)
[7]水稻OsENO2-2基因過表達(dá)對水稻抽穗期的影響[J]. 劉小云,李曉,李騰飛,蘇魯方. 中國水稻科學(xué). 2018(01)
[8]苦豆子及其生物制品在農(nóng)業(yè)上的綜合應(yīng)用[J]. 高亮,伏國,伏民. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2017(24)
[9]植物對鹽堿脅迫的響應(yīng)機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 王佺珍,劉倩,高婭妮,柳旭. 生態(tài)學(xué)報(bào). 2017(16)
[10]苦豆子種子萌發(fā)期及幼苗期對鹽、旱耐受性的探索[J]. 王彥芹,張寧,李志軍. 分子植物育種. 2017(03)
博士論文
[1]苦豆子植物資源化學(xué)研究[D]. 王漢卿.南京中醫(yī)藥大學(xué) 2014
[2]不結(jié)球白菜抗寒相關(guān)基因的克隆及序列分析[D]. 蔣芳玲.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006
[3]白念珠菌烯醇化酶的研究[D]. 唐寧楓.中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué) 2000
碩士論文
[1]感抗柳枝稷根部響應(yīng)堿脅迫生理生化及轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[D]. 多田琦.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]苦豆子半胱氨酸蛋白酶SaCP1基因的克隆及功能驗(yàn)證[D]. 趙亞男.吉林大學(xué) 2019
[3]鹽脅迫下野大豆（Glycine soja）和栽培大豆（Glycine max）幼苗葉片代謝組學(xué)比較研究[D]. 張婧.東北師范大學(xué) 2017
[4]苦豆子抗鹽相關(guān)基因的篩選及功能分析[D]. 郭文云.吉林大學(xué) 2016
[5]澳大利亞引進(jìn)植物沙漠豆抗旱性與耐鹽性研究[D]. 琴達(dá)木尼.內(nèi)蒙古師范大學(xué) 2013
[6]白念珠菌烯醇化酶及其N端肽段的原核表達(dá)和應(yīng)用研究[D]. 王仕欽.南京師范大學(xué) 2011
本文編號：3560336
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