發(fā)布時間：2021-12-16 13:48

　　花青素是一類廣泛存在于被子植物及少數(shù)裸子植物細胞液中的水溶性色素。因其特殊的化學(xué)結(jié)構(gòu),在不同酸堿性條件下能夠使植物器官呈現(xiàn)不同的顏色如粉紅、天藍、紫色等�；ㄇ嗨貙儆邳S酮類物質(zhì),具有抗癌、抗炎抗菌、抗衰老、降血糖、保護肝臟等功效�；ㄇ嗨刂饕谥参锏幕�、果實、塊莖中積累,然而目前主要來源于產(chǎn)量較高的水果和蔬菜中(黑枸杞、藍莓、葡萄、黑加侖、紫甘薯、紅甘藍等)來源較為單一。從更多的植物中獲取花青素成為了擴充花青素資源庫的有效手段。本研究擬通過在植物毛狀根中過量表達調(diào)控花青素合成代謝的MYB和bHLH基因,獲得高花青素的生物反應(yīng)器,并對獲得花青素的種類進行驗證。實驗結(jié)果如下：1、Gateway技術(shù)構(gòu)建調(diào)控花青素合成代謝的MYB基因AmROS1和bHLH基因AmDEL的遍在表達載體,利用電轉(zhuǎn)法將表達載體轉(zhuǎn)至發(fā)根農(nóng)桿菌Ar1193中。通過發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因法侵染煙草及大牽牛葉片使AmROS和AmDEL在毛狀根中過表達,獲得高花青素毛狀根,其轉(zhuǎn)化率為40%,在’Samsun’煙草的毛狀根中花青素占干重的1.46%。2、利用并通過高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析了毛狀根中花青素的種類。毛狀根中花青素化合物種...

【文章來源】： 青海師范大學(xué)青海省

【文章頁數(shù)】：91 頁

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
符號或縮略詞說明
前言
第一章 文獻綜述
    1.1 花青素簡述
        1.1.1 花青素的化學(xué)結(jié)構(gòu)
        1.1.2 花青素的光學(xué)效應(yīng)和穩(wěn)定性
        1.1.3 影響花青素穩(wěn)定性的因素
        1.1.4 花青素的作用
        1.1.5 花青素的藥理作用及營養(yǎng)價值
            1.1.5.1 抗癌作用
            1.1.5.2 抗炎、抗菌作用
            1.1.5.3 降高血糖、高血脂的作用
            1.1.5.4 保護肝臟
            1.1.5.5 抗衰老
            1.1.5.6 提高記憶力
    1.2 花青素的生物合成途徑
    1.3 花青素合成途徑的結(jié)構(gòu)基因
    1.4 植物中花青素合成代謝的分子機理
    1.5 大牽牛（天堂藍）
    1.6 發(fā)根農(nóng)桿菌
        1.6.1 發(fā)根農(nóng)桿菌的生物學(xué)特性
        1.6.2 發(fā)根農(nóng)桿菌的Ri質(zhì)粒及Ri質(zhì)粒載體
    1.7 毛狀根
        1.7.1 發(fā)根農(nóng)桿菌誘導(dǎo)植物形成毛狀根的機制
        1.7.2 發(fā)根農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化植物產(chǎn)生毛狀根的方法
        1.7.3 毛狀根的培養(yǎng)
        1.7.4 影響發(fā)根農(nóng)桿菌感染的因素
        1.7.5 利用毛狀根生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物
        1.7.6 利用毛狀根合成高含量的花青素
第二章 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗試劑及菌株
    2.2 實驗方法
        2.2.1 引物設(shè)計
        2.2.2 提取煙草毛狀根RNA
        2.2.3 RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.2.4 加A
        2.2.5 DNA回收
        2.2.6 pGEM^?-T Easy載體鏈接
        2.2.7 鏈接產(chǎn)物做DH5 α（E.coli細胞）轉(zhuǎn)化
        2.2.8 重組克隆的篩選
        2.2.9 穿刺
        2.2.10 送樣測序
        2.2.11 搖菌擴大培養(yǎng)
        2.2.12 提質(zhì)粒
        2.2.13 BP反應(yīng)
        2.2.14 菌落陽性篩選
        2.2.15 LR反應(yīng)
        2.2.16 電轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌Ar1193
        2.2.17 培養(yǎng)、保存轉(zhuǎn)化好的農(nóng)桿菌
        2.2.18 培養(yǎng)無菌苗
        2.2.19 農(nóng)桿菌侵染煙草
        2.2.20 擴大培養(yǎng)毛狀根
        2.2.21 QRT-PCR檢測調(diào)控花青素合成的結(jié)構(gòu)基因表達量
第三章 實驗結(jié)果
    3.1 RNA提取檢測結(jié)果
    3.2 反轉(zhuǎn)錄加A后PCR結(jié)果
    3.3 DNA回收結(jié)果
    3.4 T載體鏈接產(chǎn)物做DH5 α（E.coli）細胞轉(zhuǎn)化
    3.5 T載體連接轉(zhuǎn)化DH5 α,質(zhì)粒提取結(jié)果
    3.6 BP反應(yīng)后轉(zhuǎn)化DH5 α
    3.7 BP反應(yīng)后轉(zhuǎn)化DH5 α,提取質(zhì)粒結(jié)果
    3.8 LR反應(yīng)后轉(zhuǎn)化DH5 α
    3.9 LR反應(yīng)后轉(zhuǎn)化DH5 α,提取質(zhì)粒結(jié)果
    3.10 電轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌Ar1193
    3.11 農(nóng)桿菌侵染煙草
        3.11.1 誘導(dǎo)毛狀根結(jié)果
        3.11.2 擴大培養(yǎng)后的毛狀根
        3.11.3 檢測MYB基因,bHLH基因
        3.11.4 調(diào)控花青素生物合成的結(jié)構(gòu)基因表達譜
        3.11.5 轉(zhuǎn)基因型煙草毛狀根與野生型煙草花中花青素的量及化合物種類比較
        3.11.6 大牽�！疤焯盟{”毛狀根與花中花青素類化合物比較
第四章 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻
附圖
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]植物花青素生物合成轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究進展 [J]. 梁平,宋洪元.  南方農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2014(08)
[2]原花青素對腦缺血再灌注損傷羥自由基含量和腫瘤壞死因子-α表達影響 [J]. 翟婷婷,蔡紅艷,云愛華.  中國實用醫(yī)藥. 2014(22)
[3]七彩紅竹二氫黃酮醇4-還原酶基因IhDFR1的克隆及表達分析 [J]. 繆�？�,陳劍,孫浩,王毅,王晨晨,原曉龍,楊宇明,王娟.  植物生理學(xué)報. 2014(04)
[4]發(fā)根農(nóng)桿菌R1000菌株對抗生素抗性反應(yīng)及毛狀根誘導(dǎo)影響研究 [J]. 黃淑燕,鄭郁善.  福建林業(yè). 2014(01)
[5]桑樹查爾酮異構(gòu)酶基因的克隆與原核表達分析 [J]. 劉長英,趙愛春,李軍,呂蕊花,余亞圣,王茜齡,魯成,余茂德.  林業(yè)科學(xué). 2013(02)
[6]茶樹類黃酮3-O-葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因的克隆和表達分析 [J]. 王曉帆,田艷維,王云生,高麗萍,夏濤.  茶葉科學(xué). 2012(05)
[7]滁菊類黃酮3′-羥化酶基因的克隆及分子特性 [J]. 蔡華,許雪峰,諸立新,孫艷輝,代洪亮,崔勇.  食品科學(xué). 2012(17)
[8]發(fā)根農(nóng)桿菌菌株和煙草品種對毛狀根誘導(dǎo)率的影響 [J]. 黃麗萍,唐瑤,江龍.  山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報. 2012(04)
[9]紫甘薯花青素提取工藝及抑菌活性的研究 [J]. 古榮鑫,胡花麗,劉雨辰,周杰,李鵬霞,朱樹華.  山東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(04)
[10]紫甘薯花青素對LPS致炎小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的保護作用 [J]. 孫曉,王正,阮杰,王曉慧,鄭元林.  醫(yī)學(xué)研究雜志. 2011(11)

碩士論文
[1]紫色作物花色苷的分離鑒定及抗病毒機理的初探[D]. 雷用東.石河子大學(xué). 2013
[2]紫甘薯色素純化及其對糖尿病鼠的抗氧化作用[D]. 范輝.天津科技大學(xué). 2009
[3]發(fā)根農(nóng)桿菌對藍豬耳的遺傳轉(zhuǎn)化及其毛狀根再生植株的初步研究[D]. 陶均.華南師范大學(xué). 2004



本文編號：3538242