花青素是一類廣泛存在于被子植物及少數(shù)裸子植物細(xì)胞液中的水溶性色素。因其特殊的化學(xué)結(jié)構(gòu),在不同酸堿性條件下能夠使植物器官呈現(xiàn)不同的顏色如粉紅、天藍(lán)、紫色等�；ㄇ嗨貙儆邳S酮類物質(zhì),具有抗癌、抗炎抗菌、抗衰老、降血糖、保護(hù)肝臟等功效。花青素主要在植物的花、果實(shí)、塊莖中積累,然而目前主要來(lái)源于產(chǎn)量較高的水果和蔬菜中(黑枸杞、藍(lán)莓、葡萄、黑加侖、紫甘薯、紅甘藍(lán)等)來(lái)源較為單一。從更多的植物中獲取花青素成為了擴(kuò)充花青素資源庫(kù)的有效手段。本研究擬通過(guò)在植物毛狀根中過(guò)量表達(dá)調(diào)控花青素合成代謝的MYB和bHLH基因,獲得高花青素的生物反應(yīng)器,并對(duì)獲得花青素的種類進(jìn)行驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：1、Gateway技術(shù)構(gòu)建調(diào)控花青素合成代謝的MYB基因AmROS1和bHLH基因AmDEL的遍在表達(dá)載體,利用電轉(zhuǎn)法將表達(dá)載體轉(zhuǎn)至發(fā)根農(nóng)桿菌Ar1193中。通過(guò)發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因法侵染煙草及大牽牛葉片使AmROS和AmDEL在毛狀根中過(guò)表達(dá),獲得高花青素毛狀根,其轉(zhuǎn)化率為40%,在’Samsun’煙草的毛狀根中花青素占干重的1.46%。2、利用并通過(guò)高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析了毛狀根中花青素的種類。毛狀根中花青素化合物種...

【文章來(lái)源】： 青海師范大學(xué)青海省

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中文摘要
Abstract
符號(hào)或縮略詞說(shuō)明
前言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 花青素簡(jiǎn)述
        1.1.1 花青素的化學(xué)結(jié)構(gòu)
        1.1.2 花青素的光學(xué)效應(yīng)和穩(wěn)定性
        1.1.3 影響花青素穩(wěn)定性的因素
        1.1.4 花青素的作用
        1.1.5 花青素的藥理作用及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值
            1.1.5.1 抗癌作用
            1.1.5.2 抗炎、抗菌作用
            1.1.5.3 降高血糖、高血脂的作用
            1.1.5.4 保護(hù)肝臟
            1.1.5.5 抗衰老
            1.1.5.6 提高記憶力
    1.2 花青素的生物合成途徑
    1.3 花青素合成途徑的結(jié)構(gòu)基因
    1.4 植物中花青素合成代謝的分子機(jī)理
    1.5 大牽牛（天堂藍(lán)）
    1.6 發(fā)根農(nóng)桿菌
        1.6.1 發(fā)根農(nóng)桿菌的生物學(xué)特性
        1.6.2 發(fā)根農(nóng)桿菌的Ri質(zhì)粒及Ri質(zhì)粒載體
    1.7 毛狀根
        1.7.1 發(fā)根農(nóng)桿菌誘導(dǎo)植物形成毛狀根的機(jī)制
        1.7.2 發(fā)根農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化植物產(chǎn)生毛狀根的方法
        1.7.3 毛狀根的培養(yǎng)
        1.7.4 影響發(fā)根農(nóng)桿菌感染的因素
        1.7.5 利用毛狀根生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物
        1.7.6 利用毛狀根合成高含量的花青素
第二章 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及菌株
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 引物設(shè)計(jì)
        2.2.2 提取煙草毛狀根RNA
        2.2.3 RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.2.4 加A
        2.2.5 DNA回收
        2.2.6 pGEM^?-T Easy載體鏈接
        2.2.7 鏈接產(chǎn)物做DH5 α（E.coli細(xì)胞）轉(zhuǎn)化
        2.2.8 重組克隆的篩選
        2.2.9 穿刺
        2.2.10 送樣測(cè)序
        2.2.11 搖菌擴(kuò)大培養(yǎng)
        2.2.12 提質(zhì)粒
        2.2.13 BP反應(yīng)
        2.2.14 菌落陽(yáng)性篩選
        2.2.15 LR反應(yīng)
        2.2.16 電轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌Ar1193
        2.2.17 培養(yǎng)、保存轉(zhuǎn)化好的農(nóng)桿菌
        2.2.18 培養(yǎng)無(wú)菌苗
        2.2.19 農(nóng)桿菌侵染煙草
        2.2.20 擴(kuò)大培養(yǎng)毛狀根
        2.2.21 QRT-PCR檢測(cè)調(diào)控花青素合成的結(jié)構(gòu)基因表達(dá)量
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 RNA提取檢測(cè)結(jié)果
    3.2 反轉(zhuǎn)錄加A后PCR結(jié)果
    3.3 DNA回收結(jié)果
    3.4 T載體鏈接產(chǎn)物做DH5 α（E.coli）細(xì)胞轉(zhuǎn)化
    3.5 T載體連接轉(zhuǎn)化DH5 α,質(zhì)粒提取結(jié)果
    3.6 BP反應(yīng)后轉(zhuǎn)化DH5 α
    3.7 BP反應(yīng)后轉(zhuǎn)化DH5 α,提取質(zhì)粒結(jié)果
    3.8 LR反應(yīng)后轉(zhuǎn)化DH5 α
    3.9 LR反應(yīng)后轉(zhuǎn)化DH5 α,提取質(zhì)粒結(jié)果
    3.10 電轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌Ar1193
    3.11 農(nóng)桿菌侵染煙草
        3.11.1 誘導(dǎo)毛狀根結(jié)果
        3.11.2 擴(kuò)大培養(yǎng)后的毛狀根
        3.11.3 檢測(cè)MYB基因,bHLH基因
        3.11.4 調(diào)控花青素生物合成的結(jié)構(gòu)基因表達(dá)譜
        3.11.5 轉(zhuǎn)基因型煙草毛狀根與野生型煙草花中花青素的量及化合物種類比較
        3.11.6 大牽牛“天堂藍(lán)”毛狀根與花中花青素類化合物比較
第四章 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附圖
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]紫甘薯色素純化及其對(duì)糖尿病鼠的抗氧化作用[D]. 范輝.天津科技大學(xué). 2009
[3]發(fā)根農(nóng)桿菌對(duì)藍(lán)豬耳的遺傳轉(zhuǎn)化及其毛狀根再生植株的初步研究[D]. 陶均.華南師范大學(xué). 2004



本文編號(hào)：3538242