耐鹽酶類及基因?qū)τ诟啕}環(huán)境中微生物的生長(zhǎng)代謝具有重要作用,并在海產(chǎn)品加工、洗滌等生物技術(shù)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。相對(duì)高滲的胃腸道腔（⁰.3 mol/L NaCl）及飲食變化可導(dǎo)致動(dòng)物胃腸道中滲透壓的產(chǎn)生,因此胃腸道微生物中可能蘊(yùn)藏著豐富的耐鹽酶類及基因資源。本文以倭蜂猴及大額牛胃腸道微生物為研究對(duì)象,從已構(gòu)建的宏基因組文庫(kù)中篩選耐鹽克隆并測(cè)序,分析潛在的耐鹽酶類及基因,并進(jìn)一步對(duì)6-磷酸海藻糖水解酶進(jìn)行異源表達(dá)及鑒定,以挖掘胃腸道微生物宏基因組中的耐鹽酶類及基因,為探究胃腸道微生物的耐鹽機(jī)理及該環(huán)境中耐鹽酶類和基因的開(kāi)發(fā)利用奠定理論基礎(chǔ)。研究結(jié)果總結(jié)如下:1.胃腸道微生物宏基因組文庫(kù)中耐鹽克隆的篩選、測(cè)序及分析以7%NaCl（w/v）為篩選因子,從倭蜂猴和大額牛胃腸道微生物宏基因組文庫(kù)中分別獲得4個(gè)（1A、3-1、5₁₁、5₁₅）和6個(gè)（21₉A、24₇H、16₂E、16₂D、16₈

【文章來(lái)源】：云南師范大學(xué)云南省

【文章頁(yè)數(shù)】：97 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

質(zhì)粒測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程

第二章胃腸道微生物宏基因組耐鹽克隆的篩癬測(cè)序及潛在耐鹽酶類及基因分析25物宏基因組文庫(kù)中獲得31個(gè)耐鹽克隆，部分克隆在7%NaCl條件下培養(yǎng)24h的生長(zhǎng)狀況如圖2.2所示。所獲48個(gè)耐鹽克隆的OD600值均高于對(duì)照，在0.236–1.471之間，其中，在含鹽培養(yǎng)基中生長(zhǎng)最快的克隆是5_1_1，克隆1_2B則耐受7%NaCl(w/v)能力最弱。而在含7%NaCl培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h，對(duì)照E.coliEPI300-C菌株的OD600值基本無(wú)變化。上述結(jié)果表明，耐鹽克隆的pCC1FOS載體上可能已插入微生物耐鹽基因片段。圖2.2部分耐鹽克隆生長(zhǎng)狀況Figure2.2Screeningofsomesalt-tolerantclonesoffosmidlibrary2.3.2耐鹽克隆對(duì)不同鹽濃度的耐受性分析選取耐鹽性較好的10個(gè)克隆（來(lái)自倭蜂猴糞便微生物宏基因組文庫(kù)的4個(gè)克隆1A、3-1、5_1_1、5_1_5和來(lái)自大額牛糞便為生物宏基因組文庫(kù)的6個(gè)克隆21_9A、24_7H、16_2E、16_2D、16_8H、1_2G）進(jìn)行不同鹽濃度耐受研究，結(jié)果如圖2.3所示。隨著NaCl濃度（5%9%(w/v)）的增加，克隆1A、3-1、5_1_1、5_1_5、21_9A、24_7H、16_2E、16_2D、16_8H、1_2G的OD600值基本保持穩(wěn)定，與對(duì)照相比表現(xiàn)出顯著耐鹽性。

第二章胃腸道微生物宏基因組耐鹽克隆的篩癬測(cè)序及潛在耐鹽酶類及基因分析26圖2.3部分耐鹽克隆對(duì)不同鹽濃度的耐受情況Figure2.3Salttoleranceofsomesalttoleranceclonesagainstdifferentsaltstresslevels2.3.3高通量測(cè)序和基因功能分析2.3.3.1高通量測(cè)序及序列分析為了從胃腸道獲得耐鹽基因和酶類，我們對(duì)10個(gè)耐鹽克隆的FosmidDNA進(jìn)行高通量測(cè)序，序列數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)見(jiàn)表2.5。所有樣品共獲得100,909,958條rawreads，總長(zhǎng)為15,136,493,700bps。過(guò)濾測(cè)序質(zhì)量值低的reads后共獲得94,533,758個(gè)cleanreads，總長(zhǎng)14,161,779,631bp。組裝后共得到245個(gè)scaffolds，其總長(zhǎng)為1,221,827bp。使用Prodigal（v2.6.3）進(jìn)行基因組編碼基因預(yù)測(cè)共獲得1285個(gè)基因。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]滇金絲猴糞便微生物來(lái)源的β-半乳糖苷酶基因的表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)[J]. 張文洪,楊雁霞,楊正鳳,黃遵錫,李俊俊,唐湘華,楊云娟,吳倩,慕躍林,韓楠玉,許波.  微生物學(xué)報(bào). 2019(08)
[2]宏基因組來(lái)源β-半乳糖苷酶的異源表達(dá)與酶學(xué)性質(zhì)研究[J]. 楊正鳳,楊雁霞,張文洪,黃吉芬,黃遵錫,許波.  云南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2018(04)
[3]基于高通量測(cè)序的花馬鹽湖原核微生物及其耐鹽基因[J]. 劉開(kāi)輝,張波,丁小維,楊學(xué)英,鄧百萬(wàn),蘭阿峰,彭浩,牛明月,米洋.  微生物學(xué)報(bào). 2018(10)
[4]傳統(tǒng)食品發(fā)酵環(huán)境宏基因組中酯酶基因的克隆、表達(dá)及性質(zhì)分析[J]. 葉茂,鄧毛程,劉慧平,李靜.  現(xiàn)代食品科技. 2017(08)
[5]未培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)方法進(jìn)展[J]. 范念斯,齊嶸,楊敏.  應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào). 2016(03)
[6]宏基因組學(xué)在纖維素酶研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 戴利銘,熊彩云,黃遵錫,李俊俊,唐湘華,楊云娟,許波.  微生物學(xué)通報(bào). 2015(06)
[7]嗜鹽菌耐鹽機(jī)制相關(guān)基因的研究進(jìn)展[J]. 王偉偉,唐鴻志,許平.  微生物學(xué)通報(bào). 2015(03)
[8]一種耐鹽性谷氨酰胺酶在高鹽稀態(tài)醬油釀造過(guò)程中的應(yīng)用研究[J]. 葉茂,張遠(yuǎn)平,鄧毛程.  中國(guó)調(diào)味品. 2014(07)
[9]宏基因組學(xué)在人和動(dòng)物胃腸道微生物研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 許波,楊云娟,李俊俊,唐湘華,慕躍林,黃遵錫.  生物工程學(xué)報(bào). 2013(12)
[10]高糖土壤微生物宏基因組文庫(kù)的構(gòu)建及β-葡萄糖苷酶基因鑒定[J]. 陸堅(jiān),杜麗琴,龐浩,馬貴,韋宇拓,黃日波.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2013(01)

博士論文
[1]基于嗜耐鹽菌基因組分析與深海宏基因組文庫(kù)的酯酶研究[D]. 江夏薇.浙江大學(xué) 2013
[2]云斑天牛胃腸道內(nèi)共生細(xì)菌來(lái)源的纖維素酶和半纖維素酶的初步研究[D]. 周峻沛.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2010
[3]耐鹽微生物的分離及兩株耐鹽真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究[D]. 王文良.中國(guó)海洋大學(xué) 2008
[4]鹽生植物（補(bǔ)血草與鹽地堿蓬）耐鹽基因的發(fā)掘及應(yīng)用[D]. 郭善利.山東師范大學(xué) 2005

碩士論文
[1]陜北花馬鹽湖原核微生物多樣性及耐鹽逆境研究[D]. 張波.陜西理工學(xué)院 2016
[2]滇金絲猴糞便微生物木聚糖降解酶研究[D]. 戴利銘.云南師范大學(xué) 2016
[3]紅樹(shù)林生境新型酯酶的基因克隆、酶學(xué)性質(zhì)研究及紅樹(shù)林水體宏轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)的構(gòu)建[D]. 李長(zhǎng)杰.中山大學(xué) 2013
[4]山羊瘤胃宏基因組中葡聚糖酶/木聚糖酶的篩選與性質(zhì)分析[D]. 冷園園.山東大學(xué) 2012
[5]宏基因組文庫(kù)高通量篩選古鹽井中嗜鹽微生物耐鹽基因[D]. 梁華忠.西華大學(xué) 2012
[6]嗜鹽（耐鹽）微生物的分離及其在榨菜廢水處理中的應(yīng)用[D]. 沈宇強(qiáng).浙江大學(xué) 2008



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