金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）是食源性病原菌中研究的焦點(diǎn),具有可以形成生物膜的能力,其被膜菌群體耐藥性極強(qiáng)并難以徹底清除,對(duì)食品工業(yè)生產(chǎn)影響極大。乳糖酸（Lactobionic acid,LBA）被歸類為一種在自然界中較少見的仿生酸,由結(jié)合到半乳糖上的多羥基葡萄糖醛酸組成,如今以其抗氧化性、抗菌性、螯合、穩(wěn)定、酸化作用及抑菌性而聞名,是一種多用途的食品添加劑。為進(jìn)一步研究乳糖酸的生物膜抑制特性,本課題研究乳糖酸對(duì)S.aureus生物膜的作用效果及作用機(jī)制。主要結(jié)果如下:（1）通過結(jié)晶紫染色鑒定生物膜的黏附能力發(fā)現(xiàn),24 h的生物膜的粘附形態(tài)為體積較小的細(xì)菌簇,局部可見依舊散落的單個(gè)菌體。隨著培養(yǎng)時(shí)間達(dá)到3 d,蓋玻片表面的紫色菌團(tuán)量開始增多,生物膜面積也逐漸增大,呈現(xiàn)致密且均勻的片狀結(jié)構(gòu),生物膜內(nèi)活菌數(shù)達(dá)到最大,活性較好。7 d的樣本發(fā)現(xiàn)當(dāng)生物膜積累到一定厚度,會(huì)發(fā)生不同程度的脫落與局部解離。（2）乳糖酸對(duì)S.aureus的MIC值為8 mg/mL,MBC值為32 mg/mL,對(duì)S.aureus生物膜的MBIC值為16 mg/mL,MBB... 

【文章來源】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

S.aureus生物膜形成模型示意圖

2乳糖酸對(duì)金黃色葡萄球菌生物膜形成的影響16分析，以P＜0.01表示差異極顯著，0.01＜P＜0.05表示差異顯著，P＞0.05表示差異不顯著。2.3結(jié)果與分析2.3.1金黃色葡萄球菌生物膜形成能力鑒定將實(shí)驗(yàn)菌株接種于剛果紅平板，可通過菌落顏色變化鑒定生物膜的形成。37℃孵育24h后，大多數(shù)的菌落觀察呈紅色或暗褐色，部分菌落幾乎顯示為黑色。室溫下靜置24h后，觀察發(fā)現(xiàn)大多數(shù)S.aureus菌落呈黑色、干燥、光亮的表面特性，菌落四周產(chǎn)生透明圈，紅色明顯減少，證明該菌株為PIA陽(yáng)性菌株，可產(chǎn)生生物膜。圖2-1S.aureus生物膜形成能力剛果紅鑒定Fig.2-1TheabilityofS.aureusbiofilmformationtestedbyCongoRedagar2.3.2金黃色葡萄球菌黏附過程鑒定由于結(jié)晶紫可以與菌體中的DNA結(jié)合從而使核區(qū)被染成紫色，因而通過結(jié)晶紫染色可以觀察S.aureus生物膜形成的粘附情況。24-孔板培養(yǎng)物結(jié)晶紫染色的試驗(yàn)結(jié)果表明（圖2-2）培養(yǎng)時(shí)間24h的載體表面較為均勻附著了體積較小的細(xì)菌簇，局部可見依舊散落的單個(gè)菌體，部分區(qū)域凝聚成小的菌團(tuán)，隨著培養(yǎng)時(shí)間達(dá)到2d及3d，蓋玻片表面的紫色菌團(tuán)區(qū)域數(shù)量開始增多，且面積也逐漸增大，附著細(xì)菌量逐漸增多（圖2-2A、B、C），4d-6d生物膜呈現(xiàn)致密且均勻的片狀膜，隨著厚度提高透光度大大降低（圖2-2D、E、F）。培養(yǎng)7d的生物膜染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)局部區(qū)域呈現(xiàn)紫色團(tuán)塊的缺失，這可能與生物膜成熟后的傳播階段有關(guān)，當(dāng)生物膜積累到一定厚度，會(huì)發(fā)生不同程度的脫落與解離，解離后的分散菌體會(huì)繼續(xù)定植于新的載體表面（圖2-2G1、G2）。

沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士論文17圖2-2Fig.2-2IdentificationofS.aureusadhesionbycrystal-violetstaining(A-Grepresentedbiofilmsamplesfor1-7days)2.3.3金黃色葡萄球菌生物膜形成過程鑒定銀染法可以與蛋白質(zhì)結(jié)合，使暴露的蛋白質(zhì)呈現(xiàn)黑色，因此可以觀察生物膜組織中胞外蛋白的分布，在24-孔板中培養(yǎng)1、3及7d的蓋玻片載體取出后通過銀染處理出現(xiàn)了不同程度的網(wǎng)狀或團(tuán)塊狀黑色組織（圖2-3）。培養(yǎng)1d生物膜形成仍屬于初期階段，生物膜生長(zhǎng)十分均勻。培養(yǎng)3d的生物膜樣本染色后黑色網(wǎng)狀團(tuán)塊的量更多，結(jié)構(gòu)更加緊湊致密。培養(yǎng)至7d，積累的黑色團(tuán)塊顏色更深代表積累的生物膜的量更多，而染色區(qū)域非常不均勻，出現(xiàn)由于成熟生物膜脫落而造成的區(qū)域性空白。圖2-3銀染法鑒定S.aureus生物膜形成情況（A-C分別代表1、3、7d的生物膜樣本）Fig.2-3IdentificationofS.aureusbiofilmformationbysilverstaining(A-Crepresentsbiofilmsamplesof1,3,7days)2.3.4金黃色葡萄球菌生物膜內(nèi)活菌數(shù)的變化蓋玻片載體表面生物膜的膜內(nèi)活菌數(shù)的結(jié)果繪制的生長(zhǎng)曲線如圖2-4。生物膜生長(zhǎng)初期24h內(nèi)，S.aureus浮游菌由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富而大量繁殖，并且不斷向蓋玻片表面附

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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