發(fā)布時(shí)間：2021-11-13 08:27

　　CRISPR/Cas9系統(tǒng)是繼鋅指核酸酶（ZFNs）技術(shù)和轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物核酸酶（TALENs）技術(shù)后新的基因編輯技術(shù)。與ZFNs和TALENs相比,CRISPR/Cas9系統(tǒng)具有操作簡(jiǎn)單,花費(fèi)低的優(yōu)點(diǎn)。CRISPR/Cas系統(tǒng)有三種類型,即I型、II型和III型,其中II型是最為簡(jiǎn)單的,人們將其改為基因組定點(diǎn)修飾技術(shù),即CRISPR/Cas9系統(tǒng)。CD44是一組分布極為廣泛的多分子形式的膜整合糖蛋白,可以在細(xì)胞中介導(dǎo)粘附作用,參與細(xì)胞之間特異性粘連過程,包括細(xì)胞與細(xì)胞之間,細(xì)胞與基質(zhì)之間等。大量研究表明,CD44分子在許多惡性腫瘤中表達(dá),參與腫瘤的發(fā)生及其調(diào)控,但當(dāng)前CD44分子的作用機(jī)制尚不明確,所以,建立CD44表達(dá)降低的小鼠黑色素瘤（B16F10）細(xì)胞研究其CD44蛋白的作用有重要的意義。研究目的:利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)基因編輯技術(shù),在小鼠黑色素瘤細(xì)胞中建立CD44表達(dá)降低的細(xì)胞株,并以CD44表達(dá)降低的細(xì)胞為研究對(duì)象,進(jìn)行各種生物學(xué)活性的檢測(cè)。研究方法:（1）對(duì)CD44基因設(shè)計(jì)sgRNA序列,sg RNA序列與線性化的PX459質(zhì)粒連接形成重組質(zhì)粒,經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證,構(gòu)... 

【文章來(lái)源】：魯東大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

嗜熱鏈球菌CRISPR/Cas系統(tǒng)基本結(jié)構(gòu)

圖 2 CRISPR/Cas 系統(tǒng)干擾外源噬菌體入侵示意圖[35]Fig 2 CRISPR/Cas system interference with exogenous phage intrusions1.1.4 sgRNA 的設(shè)計(jì)與選擇根據(jù)前邊介紹及研究，我們得知 sgRNA 的設(shè)計(jì)和選擇是 CRISPR/Cas9 技術(shù)的精髓，也是實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵。因?yàn)?sgRNA 決定了 Cas9 的靶向性和特異性，

目前廣泛應(yīng)用的土壤農(nóng)桿菌系統(tǒng)來(lái)說：sgRNA 結(jié)合的靶基因序列的 3’端必G 序列（N 可以為 A、T、C、G 任意堿基），即 PAM 序列（例如本實(shí)驗(yàn)所–GAATACACCTGCGTAGCGGCAGG-3’），Cas9 會(huì)在 PAM 序列 5’端大約對(duì) DNA 序列進(jìn)行切割（見圖 3）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3492690